羰酰氰间氯苯腙对检测恩诺沙星药物残留的增敏研究

为了探讨羰酰氰间氯苯腙(CCCP)对恩诺沙星药物残留检测的影响,试验采用大肠杆菌ATCC 8739为测试菌,用琼脂平板法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)值,同法测定恩诺沙星应用CCCP增敏后对大肠杆菌MIC值的影响。结果表明:加入CCCP后恩诺沙星对大肠杆菌的灵敏度由25μg/kg提高到10μg/kg。说明CCCP可有效增强恩诺沙星的抗菌活性,增大了恩诺沙星抑制大肠杆菌的抑菌圈直径,提高了恩诺沙星对大肠杆菌的灵敏度。

羰酰氰间氯苯腙对多重耐药大肠埃希菌最低抑菌浓度的影响

目的了解本地大肠埃希菌(Escherichia coli)对6种常用抗菌药物的药敏情况以及碳酰氰间氯苯腙(CCCP)对多重耐药大肠埃希菌最低抑菌浓度(MIC)的影响。方法纸片扩散法(K-B法)进行6种抗菌药物的药物敏感性检测;PCR技术检测受试菌株携带acra、acrb基因的情况;常量肉汤稀释法测定大肠埃希菌对两种氟喹诺酮类抗菌药物的MIC,并对比加入CCCP后MIC的变化。结果 71株大肠埃希菌对三类6种抗生素耐药结果中环丙沙星(CIP)耐药率最高52株(73.24%),氨曲南(ATM)最小30.99%,耐药模式以多药耐药为主(51.11%);外排泵基因acra,acrb在多重耐药菌中阳性率高达91.89%和81.03%;加入CCCP前后多重耐菌株和敏感株的MIC值的变化差值经秩和检验差异有统计学意义。结论本地大肠埃希菌存在明显的多重耐药现象;外排泵基因acra和acrb是大肠埃希菌多药耐药的重要原因之一;主动外排泵抑制剂CCCP能够降低氟喹诺酮类抗菌药物对多耐药大肠埃希菌的MIC。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药机制研究

目的探讨2014年该院收集的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法采用纸片扩散法或者Vitek 2Compact全自动药敏分析系统初筛亚胺培南非敏感菌株,琼脂稀释法确证亚胺培南非敏感肺炎克雷伯菌;通过Carba NP确证试验检测碳青霉烯酶表型;通过PCR扩增及测序检测碳青霉烯酶基因、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、质粒携带的AmpC基因在菌株中携带情况;外膜蛋白SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白的改变;外排泵抑制剂羰酰氰氯苯腙(CCCP)抑制试验检测不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌中是否存在针对碳青霉烯类抗菌药物的外排泵。结果琼脂稀释法验证30株为碳青霉烯非敏感菌株,其中19株为Carba NP表型试验阳性,其中18株产KPC-2,1株产NDM-1。11株Carba NP表型试验阴性的不产碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌的ESBLs、AmpC酶的携带率为blaCTX-M 72.7%,blaSHV 27.3%,blaTEM 72.7%,blaDHA 27.3%。SDS-PAGE结果显示编号2368、2875、3050的菌株OmpK36缺失,其余菌株未发现外膜蛋白缺失。CCCP存在时,11株不产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的最小抑菌浓度值均明显降低。结论碳青霉烯酶产生,尤其是产KPC-2是该院CRKP的主要耐药机制,外排泵的高表达,外膜蛋白的缺失合并产AmpC酶也发挥了重要作用。

多重耐药鲍曼不动杆菌体外联合用药抗菌活性的研究

目的评价体外联合用药对多重耐药的鲍曼不动杆菌（MDRAB）的杀茵效果以及外排泵抑制剂对抗生素敏感性的恢复作用。方法使用肉汤倍比稀释法分别检测头孢哌酮／舒巴坦（SCF）、米诺环素（MH）、SCF与MH联合用药、碳酰氰间氯苯腙（CCCP）与MH联合用药及CCCP与SCP联合用药对临床分离的24株MDIKAB最低抑菌浓度（MIC），并计算抑菌浓度指数（FIC）。结果SCF、MH单用MIC与联合使用MIC比较。单独用药均明显高于联合用药，差异具有统计学意义（t=2．19，P〈0．01；t=1．68，P〈0．05；C=2．68，P〈0．01）oSCF和MH分别与CCCP联用时的MIC明显低于SCF与MH联用时的MIC，差异具有统计学意义（c=1．76，P〈O．01；t=2．20，P〈0．01）。SCF与MH联合应用FIC指数O．o~0．5占50．00％，O．5～1．0占45．83％，1．0—2．0占4．17％。结论SCF与MH联合用药具有协同和相加作用；抗生素与外排泵抑制剂联用可降低抗生素MIC及用量，恢复其敏感性。

多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统adeA的分布

目的探讨主动外排系统adeA与鲍曼不动杆菌多重耐药的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)筛选鲍曼不动杆菌的主动外排基因adeA,应用琼脂稀释法检测主动外排抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)联合抗菌药物对多重耐药鲍曼不动杆菌生长的影响。结果收集的60株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南、美罗培南耐药率分别80.0%和81.7%,对其它大多数抗菌药物的耐药率为90%以上;60株临床分离株检测出adeA主动外排基因52株,检出率为86.7%;CCCP可减少多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的外排作用,增加抗生素对多重耐药鲍曼不动杆菌的抑制率。结论鲍曼不动杆菌是医院感染重要的多重耐药病原菌,adeA主动外排作用可能在本地区鲍曼不动杆菌多重耐药中发挥非常重要的作用。

主动外排抑制剂对环丙沙星抗金黄色葡萄球菌活性的影响

目的研究主动外排抑制剂对喹诺酮类药物抗金黄色葡萄球菌活性的影响,并了解本院主动外排介导的金黄色葡萄球菌流行情况。方法应用琼脂稀释法检测喹诺酮类药物环丙沙星对40株金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),同时分别检测在加入主动外排抑制剂利血平和碳酰氰间氯苯腙(CCCP)后,环丙沙星MIC的变化情况。结果利血平可减少菌体对环丙沙星的外排作用,降低环丙沙星对金黄色葡萄球菌的MIC,而加入CCCP后金黄色葡萄球菌不生长。结论利血平可抑制金黄色葡萄球菌的主动外排,降低耐药菌株的MIC,是一种好的主动外排抑制剂。

耐环丙沙星阴沟肠杆菌临床株泵出机制的探讨

目的:探讨耐环丙沙星阴沟肠杆菌临床株中是否存在主动泵出机制。方法:用荧光分光光度法测定5株耐环丙沙星阴沟肠杆菌及2株敏感菌细胞内环丙沙星的聚积动力,比较加入能量抑制剂碳酰氰间氯苯腙(CCCP)前后细菌细胞内环丙沙星稳态聚积量的变化。结果:5株耐环丙沙星阴沟肠杆菌临床株和2株敏感株对环丙沙星的摄取均在5min内达到稳态浓度,耐药菌株细胞内环丙沙星的稳态浓度低于敏感菌株(均P<0.05),加入CCCP后耐环丙沙星菌株细胞内的环丙沙星聚积浓度较未加CCCP时增加12%～46%(均P<0.05),敏感菌株加入CCCP前后环丙沙星聚积浓度无明显变化(均P>0.05)。测试菌株对环丙沙星的聚积浓度与MIC值间呈负相关。结论:耐环丙沙星阴沟肠杆菌临床株中可能存在对环丙沙星的主动泵出机制,该机制可能参与了阴沟肠杆菌对环丙沙星的耐药。