羽苔素E体外抗真菌活性及逆转氟康唑耐药的初步研究

目的评价白色念珠菌对羽苔素E的体外敏感性,并观察羽苔素E和氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。方法采用微量稀释法,测定15株白念敏感株和4株白念耐药株对羽苔素E的敏感性,以最低抑菌浓度(MIC)表示。同时观察羽苔素E与氟康唑合用对白念敏感株和耐药株的联合抗真菌作用。结果羽苔素E对敏感株的MIC值为16 mg.L-1,对耐药株的MIC值与敏感株基本一致。羽苔素E与氟康唑合用,对敏感株和耐药株分别表现出相加和协同的抗真菌活性,并明显减少氟康唑的用量。结论羽苔素E具有中等的抗真菌活性,与氟康唑合用对耐药菌株表现出协同的抗真菌作用,提示羽苔素E有较好的抗真菌作用并有逆转氟康唑耐药的潜力。

羽苔素E对白念珠菌细胞内氟康唑浓度的影响研究

目的:建立高效液相色谱质谱联用技术测定耐药真菌细胞内氟康唑的浓度并观察羽苔素E对细胞内氟康唑聚集的影响。方法:将白念耐药株菌悬液与氟康唑单独培养或氟康唑和羽苔素E联合培养24h后,经离心、皂化、提取等过程得到菌体细胞内聚集的氟康唑。样品以Phenomenex-C18柱(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱进行分离,流动相为醋酸铵-乙腈(3∶7,v/v),流速0.8mL·min-1。正离子方式检测,多反应监测(MRM)方式测定样品浓度,监测离子对分别为m/z307.4→220.3(氟康唑)和m/z531.2→489.3(内标酮康唑)。通过测定氟康唑的浓度,观察不同浓度羽苔素E对细胞内氟康唑浓度的影响。结果:高效液相色谱质谱联用法可用于真菌细胞内氟康唑浓度的测定。氟康唑在1～100μg·L-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9956),最低定量限为1μg·L-1。低、中、高3种浓度质控样品的日内、日间精密度小于6.4%,方法回收率94.1%～98.3%。并且羽苔素E能显著增加耐药株细胞内氟康唑的浓度,呈剂量依赖性。结论:羽苔素E能显著提高耐药株菌体细胞内氟康唑的浓度,是羽苔素E和氟康唑合用产生协同作用的重要机理,提示羽苔素E可能具有逆转氟康唑耐药的作用。