翘嘴鲌及翘嘴鲌“全雌1号”氨氮胁迫下的生理应答反应及耐受性分析

【目的】探究翘嘴鲌及翘嘴鲌“全雌1号”在氨氮胁迫下的生理应答反应及耐受性,为新品种选育和健康养殖提供依据。【方法】采用实验生态学方法,在预试验确定96 h氨氮半致死浓度(96 h LC_(50))的基础上,研究不同浓度(0、8、16 mg/L)氨氮对翘嘴鲌及翘嘴鲌“全雌1号”存活指标、肝脏组织学、抗氧化酶活性的影响。【结果】(1)翘嘴鲌及翘嘴鲌“全雌1号”的死亡率随氨氮浓度与胁迫时间的增加而升高,在8和16 mg/L浓度下,翘嘴鲌“全雌1号”的死亡率更低;(2)组织学观察显示,随着氨氮浓度与胁迫时间的增加,肝血窦逐渐增大,局部破损增加,出现肝细胞融合,细胞轮廓与空泡界限模糊的现象增多。低浓度胁迫96 h与高浓度胁迫48 h和96 h均造成肝脏出现较大的病理学组织损伤。(3)SOD活性检测显示,对照组SOD活性稳定,而高、低浓度组则均呈先升高后降低再升高的趋势,且高浓度组高于低浓度组。同时,翘嘴鲌“全雌1号”增幅更大,降幅更小,其在相同氨氮浓度与胁迫时间下SOD活性较翘嘴鲌高。【结论】翘嘴鲌“全雌1号”较普通翘嘴鲌具有更强的氨氮抗逆性。

基于线粒体Cytb基因的江淮下游6个湖泊翘嘴鲌群体遗传多样性分析

以线粒体Cytb基因作为分子标记对长江、淮河下游6个湖泊翘嘴鲌群体共262尾个体的遗传多样性、遗传分化及历史动态进行分析。结果显示,翘嘴鲌Cytb基因序列全长为1141 bp,碱基A+T的含量(55.9%)高于G+C含量(44.1%)。262条Cytb基因序列检出42个变异位点,定义46个单倍型,总群体单倍型和核苷酸多样性分别为0.916±0.010和0.00256±0.00008;6个群体的单倍型多样性为(0.798±0.059)~(0.927±0.019),核苷酸多样性为(0.00204±0.00027)~(0.00285±0.00018),表明翘嘴鲌遗传多样性属于高Hd和低Pi模式。基于单倍型构建的系统发育树和进化网络图显示,6个群体的单倍型未形成明显的地理格局。分子方差分析(AMOVA)显示,遗传变异主要来自于群体内部(91.64%),群体间遗传分化系数(F_(st))为0.08362(P<0.01);6个群体间的F_(st)为-0.00427~0.15529,其中,长江群体和淮河群体间均具有显著中度或高度遗传分化(P<0.05)。中性检验结果显示,Tajima’s D和Fu’s F_(s)均为负值(P<0.05),核苷酸不配对分布曲线呈现单峰型,表明翘嘴鲌群体在历史上经历过显著的种群扩张。整体来看,江淮下游湖泊的翘嘴鲌野生种质资源遗传多样性较低,长江水系群体和淮河水系群体间有显著的遗传分化,应采取措施恢复翘嘴鲌资源量及提高其遗传多样性,并将长江流域和淮河流域湖泊群体划分为不同的管理单元进行保护。

池塘养殖密度对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼生长的影响

为研究养殖密度对兴凯湖翘嘴鲌幼鱼生长性能的影响,探索兴凯湖翘嘴鲌池塘养殖密度阈值,设置养殖密度分别为15万尾/hm^(2)(D1)、30万尾/hm^(2)(D2)、60万尾/hm^(2)(D3)、90万尾/hm^(2)(D4)、150万尾/hm^(2)(D5)共5个试验组,进行了为期180 d的兴凯湖翘嘴鲌幼鱼池塘培育试验。试验结果显示:幼鱼的增重率随着放养密度的增加呈现明显的下降趋势,其中放养密度最低的D1组幼鱼的增重率最高,达63.74%,但与D2组(60.57%)没有显著差异,D1、D2组幼鱼的增重率显著高于其他密度组(P<0.05);幼鱼的体长增长率也随着养殖密度的增加呈现显著下降的趋势,D1组体长增长率最高,为3.16%,D5组最低,为0.56%;养殖试验结束时,5个试验组鱼的肥满度无明显差异。结果表明,池塘养殖条件下兴凯湖翘嘴鲌幼鱼的适宜培育密度为30万~60万尾/hm^(2)。

翘嘴红鲌生物特性及池塘养殖高产实验

翘嘴红鲌出身名门,淡水珍品,为广大人民群众所喜爱。在我国北方地区,翘嘴红鲌、松江鲈、黄河鲤、松花江鳜并称中国四大名鱼,在江浙沪,翘嘴红鲌、银鱼、白虾称为“太湖三白”。可见,翘嘴红鲌红鲌在祖国大江南北都享有盛誉,得到广泛喜爱。大湖股份自2000年上市以来,一直进行着翘嘴红鲌的养殖研究工作,首先是翘嘴红鲌的人工繁殖及苗种培育.

溶氧水平对翘嘴鲌及其新品种全雌1号的影响研究

翘嘴鲌对低氧环境较为敏感,因此,本研究以翘嘴鲌及其新品种全雌1号为研究对象,探讨不同溶氧水平对其生理指标、抗氧化酶活性、肝脏组织学的影响。结果表明,翘嘴鲌及全雌1号从浮头点到死亡点,溶解氧值曲线均呈逐渐下降趋势,且总体上翘嘴鲌的溶解氧值均略高于全雌1号;且翘嘴鲌及全雌1号在20℃下的浮头点、昏迷临界点、昏迷点显著高于30℃时的相应值。翘嘴鲌及全雌1号超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性均为先逐渐升高,在12 h达最大值,之后下降,至24 h仍高于0 h的值;其中全雌1号SOD指标升高时升高幅度更大,活性下降时下降幅度更小,且总体上全雌1号SOD指标在相同低氧胁迫时间下比翘嘴鲌活性更高。组织学观察结果显示,随着低氧胁迫时间的持续,肝细胞逐渐无序排列,肝细胞间血窦扩张,肝细胞融合等现象愈加明显,且肝组织空泡化变性加剧。即低氧胁迫使肝出现病理学组织损伤变化,且损伤程度随低氧时间的持续逐渐增强。总之,本研究推测全雌1号对低氧环境的耐受力可能略微高于普通翘嘴鲌;在实际生产过程中,要实时监测水中的溶氧,避免长期缺氧对机体造成影响。

长荡湖翘嘴鲌年龄结构和生长特征研究

为了解长荡湖翘嘴鲌种群的年龄结构及生长特征,采集长荡湖翘嘴鲌样本113尾,通过鳞片鉴定其年龄,并建立体长、体质量的生长方程。结果显示,翘嘴鲌体长为18.15~74.63 cm,体质量为58.5~4524.6 g。翘嘴鲌由1~6龄个体构成,其中1~3龄个体占比为72.6%,种群组成呈现出低龄化。体长和体质量方程式为W=0.0103L^(2.9928)(n=113,R^(2)=0.9931),表明翘嘴鲌为匀速生长类型。体长生长方程为L_(t)=109.28[1-e^(-0.1232(t+0.6468))],体质量生长方程为W_(t)=12993.47[1-e—(-0.1232(t+0.6468))]^(2.9928)。生长拐点年龄t_(i)=8.25龄,对应的体长和体质量分别为72.76 cm和3656.34 g。

基于线粒体Cyt b基因的洪泽湖翘嘴鲌群体遗传多样性分析

为全面了解洪泽湖翘嘴鲌的种质资源遗传状况,采用Cyt b基因(线粒体细胞色素b基因),分析了洪泽湖6个群体共计210尾翘嘴鲌的遗传多样性及遗传结构。结果显示,Cyt b基因序列全长为1141 bp,碱基A+T的含量(56.0%)大于G+C的含量(44.0%)。试验共检测到31个变异位点,定义26个单倍型,平均单倍型多样性(H d)和核苷酸多样性(P i)分别为0.735±0.032和0.0019±0.0001;6个群体的单倍型多样性(H d)为(0.618±0.096)~(0.788±0.064),核苷酸多样性(P i)为(0.0015±0.0003)~(0.0021±0.0002);翘嘴鲌的遗传多样性属于高H d低P i类型,暗示其遗传多样性较低。分子方差分析显示,遗传差异主要来源于群体内部,群体间的遗传分化指数F st为-0.0177~0.0182,P>0.05,表明群体间没有显著的遗传分化。单倍型邻接关系树和单倍型网络结构图显示,所有单倍型聚为1个分支,6个群体未形成特定的地理遗传结构。Tajima’s D和Fu’s F s中性检验均为负值,且具有显著性差异,核苷酸错配分布曲线呈现明显的单峰分布,均表明翘嘴鲌在历史上经历了显著的群体扩张事件。研究结果表明,洪泽湖翘嘴鲌6个群体间没有显著的遗传分化,应作为1个整体进行管理和保护。洪泽湖翘嘴鲌资源遗传多样性较低,需要采取措施增加翘嘴鲌种群数量,提高其遗传多样性。

兴凯湖翘嘴鲌(Culter albarnus)的生长特性

采用经典的VonBertalanffy生长方程和数理统计的方法 ,于 2 0 0 1— 2 0 0 2年在中俄界湖兴凯湖采集翘嘴 ,对其生长特性进行了研究。结果表明 ,翘嘴体长和体重的关系为W =0 .0 0 77L3.1 (r=0 .9881 ) ,VonBertalanffy生长方程为Lt=1 5 3.2 [1 -e- 0 .0 5(t+1 ) ];Wt=42 0 0 0 .3×[1 -e- 0 .0 6(t+1 ) ]3.1 ,体重生长拐点t=1 7.6龄 ,相应的体长为 95 .3cm ,体重为 1 2 70 6.6g。按生长指标值分析 ,阶段生长可划分为两个时期 ,即 1 7.6龄前的生长迅速期和 1 7.6龄后的生长减缓期。因此 ,为了保护翘嘴鱼类资源 ,天然渔业的捕捞个体规格应控制在 5 0 0 0g以上。

丹江口水库翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)遗传多样性的RAPD和ISSR分析

利用RAPD和ISSR两种分子标记技术,分析了丹江口水库野生翘嘴红鲌30个个体的遗传多样性。用10个RAPD引物对其基因组DNA进行扩增,共获得66个重复性好且谱带清晰的扩增位点,片段大小在200—2000bp之间,其中多态性位点24个,多态位点比例为36.36%;个体间遗传距离在0.0338—0.1426之间,平均为0.0941;Shannon信息指数为0.1083。用10个ISSR引物共检测到73个位点,其中多态性位点28个,多态位点比例38.36%;个体间遗传距离在0.0376—0.1652之间,平均为0.1058;Shannon信息指数为0.1196。结果显示,丹江口水库野生翘嘴红鲌的多态位点比例、平均遗传距离和Shannon信息指数均较大,说明其有较丰富的遗传多样性。

鄱阳湖通江水道翘嘴鲌(Culter alburnus)的生物学参数估算

利用2012年3月-2013年2月在鄱阳湖通江水道进行的定置网渔获物调查的数据,运用软件FiSATII对翘嘴鲌(Culter alburnus)的生长参数以及种群补充模式进行了估算。结果显示,鄱阳湖通江水道翘嘴鲌体长范围为93-645 mm;体长(L,mm)和体重(W,g)的关系式为W=0.9×10-5L3.029(R2=0.975,n=317),von Bertalanffy生长方程的各参数:渐近体长L∞=677.25 mm,生长系数K=0.140,理论生长起点年龄t0=-0.854。总死亡系数Z=1.514/a,自然死亡系数M=0.173/a,捕捞死亡系数F=1.341/a。鄱阳湖通江水道翘嘴鲌开发率E=0.886,资源处于过度利用状态。种群补充模式表明,鄱阳湖通江水道翘嘴鲌种群补充期在4–8月。因此,建议适当延长鄱阳湖的禁渔期,以利于其资源的恢复与保护。

福建泉州山美水库翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)生长特性、资源评估与合理利用

随机从福建泉州山美水库2002年4月—2003年5月的翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)渔获物中获取340尾样本,以鳞片为年龄鉴定材料,获得年龄生长资料,建立生长方程和Beverton-Holt模型对山美水库翘嘴红鲌资源进行评估,为制定合理的捕捞年龄和捕捞规格提供科学依据。结果表明,山美水库翘嘴红鲌体重范围是0.035—4.12kg,体长范围是15.6—73.5cm,其中体长20.1—60.0cm的样本占93.57%,且为2+—3+龄。本文给出了该鱼类体长与体重的关系式、体长与鳞径的关系式以及相关的von Bertalanffy方程。山美水库翘嘴红鲌生长拐点为10.4龄,山美水库现有资源量为10.164t,合理开捕年龄为6龄。

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis Bleeker)种群遗传多样性的RAPD分析

提要采用RAPD技术对翘嘴红养殖群体进行了DNA多态性检测。共采用40个随机引物进行扩增,其中14个引物可获得清晰且重复性好的扩增图谱,共扩增出121个RAPD位点,具有多态现象的位点为40个,多态位点比例为33.06%。翘嘴红群体的遗传相似系数为0.8878—0.9600,平均为0.9201,遗传变异度为0.0799。Shannon多样性指数为10.8824,Shannon多样性值为0.0899。研究表明,翘嘴红目前的种质资源状况令人堪忧,改变目前人工繁育模式,建立原种、良种场,丰富物种遗传多样性是资源保护的基础。

兴凯湖翘嘴鲌(Culter alburnus)LPL基因克隆及其表达

采用RT-PCR和RACE技术,进行兴凯湖翘嘴鲌LPL基因的克隆与表达分析,旨在为其脂肪性状的研究奠定基础.根据Genbank中已知的鲤科鱼类LPL基因序列设计引物,克隆出兴凯湖翘嘴鲌(Culter alburnus)脂蛋白酯酶(idella lipoprotein lipase,LPL)的c DNA序列;将其提交到Genbank,获得基因登陆号为KC166 231;兴凯湖翘嘴鲌LPL基因c DNA序列共1 947 bp,基因编码区序列共1 524 bp,编码一个终止密码子和507个氨基酸;通过Blast与Genbank上发表的其他物种的CDS区进行比对发现,与草鱼(Ctenopharyngodon)的同源性达到98%.采用荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测了兴凯湖翘嘴鲌野生群体和养殖群体在不同年龄、不同组织中LPL的表达量.结果表明,随年龄的增长野生群体与养殖群体LPL基因相对表达量差异增大,4龄养殖群体LPL基因相对表达量是同期野生群体的17.54倍,二者差异显著(P<0.05);LPL基因在心脏当中表达水平最高,脾和肝脏中的表达量次之.

5种人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼的诱集效果研究

为研究正方通体礁(T1型)、三角通体礁(T2型)、正方箱式礁(X1型)、三角箱式礁(X2型)、正方体礁(F1型)5种不同构造的人工鱼礁对翘嘴鲌(Culter alburnus)幼鱼的诱集效果。使用室内模拟试验方法,观察了不同人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼行为以及分布的影响。结果表明:未放置人工鱼礁的对照组,翘嘴鲌幼鱼聚集分布在两侧;放置的5种人工鱼礁模型,对翘嘴鲌幼鱼均产生了一定的诱集效应,其中以可利用空间最为合适、便于通过,遮蔽效果最好的T2型人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼的诱集效应最佳;F1型、T1型人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼的诱集效应由于礁体模型的诱集有效空间、遮蔽效应的减少而下降;X1型、X2型人工鱼礁模型的箱式设计的诱集效果不如前3种鱼礁,但根据试验结果分析显示,5种人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼的诱集效果之间不存在显著性差异(P>0.05)。5种人工鱼礁模型对翘嘴鲌幼鱼诱集效果的差异可能是由礁体模型的不同结构设计和翘嘴鲌幼鱼的活动习性共同作用下产生的,T2型人工鱼礁模型可以推广使用。

翘嘴鲌(Culter alburnus)TMEM-57基因的克隆、组织表达和单核苷酸多态性分析

采用RT-PCR和快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术首次克隆了翘嘴鲌TMEM-57蛋白基因的cDNA全序列,该序列全长为2822bp,其中5′-UTR区93bp,3′-UTR区731bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1998bp,编码665个氨基酸。NJ法系统进化分析将同科或属中TMEM-57基因分成一个分支,表现出种属间的高度保守性。利用荧光定量PCR(qPCR)技术检测了不同组织的表达量,发现在卵巢中表达量最高,其次为心脏和脑。用直接测序法对TMEM-57基因部分区段单核苷酸多态性(SNP)进行了检测,寻找到11个新的SNP位点。

基于Cyt b序列的太湖和洪泽湖翘嘴鲌遗传多样性和遗传结构分析

翘嘴鲌具有很高的营养价值、经济价值和生态价值,近年来其野生资源趋于枯竭,因而掌握翘嘴鲌遗传多样性对于科学保护其种质资源具有重要意义。为了解太湖和洪泽湖翘嘴鲌种质资源遗传状况,通过线粒体Cyt b基因序列测定,分析了其群体的遗传多样性和遗传结构。结果显示,翘嘴鲌Cyt b基因全序列长度为1141 bp,碱基A+T含量明显高于G+C含量。98条Cyt b序列共检测出29个变异位点,共定义29种单倍型,平均单倍型多样性指数(Hd)和核苷酸多样性指数(Pi)分别为0.923和0.00274,平均核苷酸差异数(K)为3.127。太湖和洪泽湖群体的Hd分别为0.927和0.816,Pi分别为0.00285和0.00220,遗传多样性表现出高Hd、低Pi的特点。分子方差分析结果显示,群体内分子变异占比为15.01%,群体间分子变异占比为84.99%,两群体间遗传分化系数(Fst)为0.15015(P<0.01),表明两群体间有显著性遗传分化。Tajima′s D中性检验结果为不显著性负值,Fu′s Fs中性检验结果为显著性负值,且歧点分布曲线为单峰型,表明翘嘴鲌在进化过程中经历过群体扩张事件。本研究结果为太湖和洪泽湖翘嘴鲌种质资源管理保护提供了数据资料。

基于线粒体控制区D-loop序列的洪泽湖翘嘴鲌遗传多样性分析

为掌握洪泽湖翘嘴鲌(Culter alburnus)种质资源遗传多样性状况,采集洪泽湖6个群体共233尾翘嘴鲌,采用线粒体控制区D-loop全序列进行遗传多样性分析.结果显示,翘嘴鲌线粒体D-loop序列长度为934 bp~936 bp,碱基(A+T)含量(66.0%)明显高于(G+C)含量(34.0%).243条D-loop序列检出23个变异位点,其中有9个单一信息位点,14个简约信息位点.6个群体发现22个单倍型,全部群体的单倍型多样性(H_(d))和核苷酸多样性(P_(i))分别为(0.794±0.019)和(0.00251±0.00014),呈现出高H_(d)和低P_(i)的遗传多样性模式.6个群体中洪泽湖群体的遗传多样性最高(Hd:0.873±0.038,Pi:0.00295±0.00035),顾勒河群体的遗传多样性最低(H_(d):0.709±0.064,P_(i):0.00203±0.00031).分子方差分析表明,群体间的分子变异占比0.43%,群体内的分子变异占比99.57%,分子变异主要发生在群体内.群体间遗传分化指数F_(st)为-0.01912~0.02801(P>0.05),表明群体间没有出现遗传分化.单倍型系统进化树和单倍型网络结构图显示,群体间拥有多个共享单倍型,单倍型聚为一个进化分支,没有形成特定的地理遗传结构.中性检验结果表明洪泽湖翘嘴鲌群体没有经历显著种群扩张事件.研究结果表明,洪泽湖翘嘴鲌遗传多样性较低,6个群体间基因交流频繁,遗传分化不显著,可将6个群体作为一个管理单元进行保护,需采取措施提高翘嘴鲌遗传多样性及恢复其种群数量.

翘嘴鲌淀山湖和兴凯湖群体的胚胎发育及染色体核型比较

为了解翘嘴鲌(Culter alburnus)南、北不同地理群体在繁殖和染色体核型方面的差异性,以翘嘴鲌南方(上海淀山湖)群体和北方(黑龙江兴凯湖)群体为研究对象,在上海地区同时进行了翘嘴鲌两个群体的人工繁育、胚胎发育观察和染色体组成比较。结果显示,翘嘴鲌南方淀山湖群体的受精卵呈灰黄色,有黏性,为黏性卵,卵径为(1.11±0.05)mm;北方兴凯湖群体的受精卵呈青灰色,无黏性,为浮性卵,卵径为(1.21±0.03)mm。两个群体的相对繁殖力和受精率无明显差异。在(25±1)℃的水温条件下,两个群体的胚胎均可以在24 h内出膜,且胚胎发育特征及时序无明显差异。北方兴凯湖群体仔鱼的出膜后体长为(5.77±0.29)mm,极显著大于南方淀山湖群体[(3.40±0.14)mm](P<0.01)。两个群体的染色体数目均为2n=48,其中南方淀山湖群体的核型公式为2n=24m+20sm+4st,染色体臂数NF=88;北方兴凯湖群体的核型公式为2n=22sm+26m,NF=96。研究表明,翘嘴鲌南方淀山湖与北方兴凯湖群体在受精卵的特征及染色体核型上存在一定的差异,且北方兴凯湖水系翘嘴鲌可以在南方地区正常的繁育,其繁育性能不会因为环境变化而产生较大改变。

水库网箱养殖翘嘴红鲌Erythroculter ilishaeformis (Bleeker)的初步试验

利用二只5m×5m×2.5m无结节PE封闭式网箱,投放平均尾重0.24g,全长70～100mm翘嘴红苗种计11,000尾,放养密度为220尾/m2;经304d饲养,平均尾重达到200g,最大个体350g;群体净增43.98倍,饲料系数1.51,成活率92%,净增产1,797kg,每m2利润801.6元,投入与产出之比为1:2.94。翘嘴红俗称太湖白鱼、白条。该品种具有肉质鲜美,营养价值高,生长快,适温范围广,抗病力强等特点,是适合水库网箱养殖的淡水名优品种之一。

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因定位、克隆及表达分析

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)是大型淡水鱼类鳊鲌亚科(Abramidinae)中最大的一种鱼,具有较高的经济价值。但其饲料转化率及抗病性研究相对较少,相关基因信息缺乏。本研究以翘嘴红鲌为对象,利用RACE技术克隆翘嘴红鲌果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(ALDO-C)基因,该基因cDNA全长1945bp,其中ORF区975bp,编码325个氨基酸,5′非编码区933bp,3′非编码区37bp。通过实时荧光定量PCR检测了ALDO-C在不同组织中相对表达水平。发现ALDO-C基因在翘嘴红鲌的肾、肝、肌肉、性腺中均有表达,且在肾中表达量最高,显著高于其他组织。同时采用石蜡切片、H.E染色和原位杂交染色,观察分析翘嘴红鲌的肾组织显微结构和ALDO-C基因的表达定位,结果表明,ALDO-C在鱼类肾单位和集合管结构、调节肾组织水平衡及抗病性方面有重要作用。可以考虑将翘嘴红鲌醛缩酶C基因作为生长发育及抗病性相关的候选基因,用于翘嘴红鲌鱼的分子辅助育种,以期为今后的研究提供理论基础。