真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。

线粒体翻译延伸因子Ts对心肌肥大的作用及机制

目的探究线粒体翻译延伸因子Ts(EF-Ts)通过影响线粒体损伤调控病理性心肌细胞肥大的分子机制。方法使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)制备小鼠心肌肥大的细胞模型与动物模型,采用蛋白免疫印迹(WB)方法检测心肌肥大时EF-Ts的蛋白表达。用EF-Ts干扰慢病毒干扰小鼠原代心肌细胞中EF-Ts的表达,同时用AngⅡ处理,借助四甲基罗丹明甲酯(TMRM)与钙黄绿素乙酰氧基甲酯(Calcein AM)染色,应用激光共聚焦显微镜观察心肌细胞线粒体膜电位和线粒体通透性转换孔(MPTP)水平,并采用WB法检测心肌肥大标志物心房钠尿因子(ANF)和钠尿肽B(NPPB)的变化情况。结果心肌肥大的细胞模型和动物模型中EF-Ts蛋白表达量均明显降低(t=2.95、14.93,P<0.05)。与对照组相比,AngⅡ诱导的心肌肥大细胞模型中TMRM和Calcein AM染色荧光强度均明显减弱,在心肌肥大细胞模型中敲低EF-Ts后TMRM和Calcein AM染色荧光强度进一步减弱(F=4.22~22.88,P<0.05),而心肌肥大标志物ANF、NPPB蛋白表达量进一步上升(F=6.52、20.96,P<0.05)。结论EF-Ts缺失可能引起线粒体功能损伤而导致心肌肥大,因此EF-Ts有可能成为干预心肌肥大的重要靶标。

翻译延伸因子1A的研究进展

翻译延伸因子1A(EF1α)是一个主要的翻译因子,EF1α.GTP催化氨酰tRNA结合到核糖体的A位点。EF1α不仅仅是翻译必须的蛋白,而且是一个重要的多功能蛋白。EF1α参与许多重要的细胞过程和疾病,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成、病毒复制及癌基因转化等。

扩展莫尼茨绦虫不同体节翻译延伸因子和引发酶mRNA转录水平研究

本研究以β微管蛋白基因作为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节和孕节中的表达差异。标准曲线分析显示,翻译延伸因子、引发酶基因和β微管蛋白基因标准质粒实时定量扩增Ct值与标准质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.99。同时实验结果显示,翻译延伸因子和引发酶基因在虫体各发育阶段中的转录水平存在差异。其中,翻译延伸因子和引发酶基因在扩展莫尼茨绦虫头节和幼节的转录水平均较高,提示这2个基因可能在头节和幼节的发育中有重要作用。

番鸭细小病毒非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1的体外互作分析

旨在探讨番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白NS1与水禽真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)之间的互作关系。根据GenBank中已发表的北京鸭和浙东白鹅eEF1A1基因序列,经大肠杆菌偏爱密码子优化,人工合成的质粒分别命名为pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1;对含有MDPV YL08株NS1基因的重组质粒pUC57-NS1、pUC57-DeEF1A1和pUC57-GeEF1A1进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,回收目的片段后分别插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a中,构建了重组质粒pGEX-DeEF1A1、pET-GeEF1A1、pET-NS1和pGEX-NS1;重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的表达;采用HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-DeEF1A1、HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-GeEF1A1;采用HRP标记的His单克隆抗体鉴定TRX-NS1、HRP标记的GST单克隆抗体鉴定GST-NS1,采用MDPV感染番鸭血清鉴定TRX-NS1和GST-NS1的抗原性;采用GST pull-down试验验证GST-DeEF1A1与TRX-NS1、GST-NS1与TRX-GeEF1A1的互作。结果表明,获得的重组蛋白GST-DeEF1A1、TRX-GeEF1A1、TRX-NS1和GST-NS1的分子量分别为76.9,67.9,89.5,98.6 ku;GST-DeEF1A1和GST-NS1可与HRP标记的GST单克隆抗体特异性结合,TRX-GeEF1A1和TRX-NS1可与HRP标记的His单克隆抗体特异性结合;GST-NS1和TRX-NS1可与MDPV感染番鸭血清特异性结合,抗原性良好;GST pull-down试验中,GST-DeEF1A1可与TRX-NS1互作,GST-NS1不与TRX-GeEF1A1互作。本研究表明,MDPV NS1蛋白可以和北京鸭eEF1A1在体外相互作用而不能和浙东白鹅eEF1A1在体外相互作用,互作结果差异性可能与二者的102-106 aa,108 aa的氨基酸残基有关。

真核翻译延伸因子1A2及真核延长因子1A2在肿瘤中的作用

癌基因一般是信号传导通路中重要的基因或细胞表面受体激酶，以往的研究主要集中在这些调节基因，相对忽略了管家基因（翻译因子、转录因子和一些维持细胞最基本功能的酶等）可能具有的致癌作用。通常认为管家基因蛋白水平和功能相对稳定保守，主要维持细胞基本结构和功能。

线粒体蛋白质翻译延伸因子(TUFM)在不同毒力新城疫病毒感染的鸡胚成纤维细胞中的表达水平

为研究线粒体蛋白质翻译延伸因子Tu(TUFM)在不同毒力新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)中表达水平的变化,运用比较蛋白质组技术分析感染了NDV的CEF差异表达的蛋白点。与24 h的阴性对照组相比,感染NDV后24 h时TUFM表达量在毒力最弱的WX-10-07-Pi感染组中显著升高;毒力最强的JS-5-05-Go引起宿主表达TUFM量随感染时间增加逐渐增强。推测TUFM的表达水平与NDV毒力强弱具有一定相关性。

百脉根离子通道蛋白Pollux与翻译延伸因子EF1A的相互作用

利用酵母双杂交技术,以百脉根离子通道蛋白Pollux胞内结构域为诱饵,从百脉根AD-cDNA文库中筛选到与Pollux相互作用的多个阳性克隆,经DNA序列测定及NCBI数据库BLAST分析,其中有6个阳性克隆编码翻译延伸因子EF1A。进一步在大肠杆菌中表达与纯化Pollux和EF1A融合蛋白,通过Pull-down及Western杂交证实Pollux胞内结构域与EF1A的C-末端相互作用。

真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析

真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息.

拟南芥翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位研究

探讨了拟南芥的翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位.以Col野生型拟南芥的cDNA为模板,通过高保真KOD扩增酶获得2 363bp的拟南芥转录延伸因子EF1A基因片段,将其与GFP融合后共同连入p1300表达载体,利用农杆菌侵染法将p35S∶GFP和p35S∶EF1A∶∶GFP转入野生型拟南芥中,观察转基因植物细胞中GFP的表达情况.结果显示:p35S∶GFP转基因植物中,细胞核中GFP荧光强度显著高于细胞质中荧光强度,但是在p35S∶EF1A∶∶GFP转基因植物中,细胞核中荧光强度与细胞质中荧光强度无显著差异,说明在进行蛋白翻译时细胞质中的EF1A含量显著高于细胞核中,这也为翻译延伸因子EF1A的亚细胞定位提供了实验依据.

真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展

总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA依赖性RNA聚合酶类(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)互作,参与病毒繁殖.阐述了对eEFlA进行研究的意义和价值,并提供了新的见解和展望.

翻译延伸的顺式调控机理与生物学效应

翻译延伸是核糖体将信使RNA(mRNA)蕴含的遗传信息解码为蛋白质的有序过程,是细胞维持基本代谢活动的核心步骤。多种人类疾病(如神经退行性疾病、癌症等)都与翻译延伸的异常有关。翻译延伸作为中心法则的关键步骤曾是现代分子生物学研究的重点内容,然而方法学上的限制却阻碍了对其动态过程以及调控规律的进一步研究。近年来,对翻译延伸调控相关方法的突破让与其相关的生命科学研究获得了长足的发展,尤其是近10年来的研究揭示了翻译延伸的复杂调控机理和多种生物学效应,为理解蛋白表达调控和疾病发生的关联提供了新的理论视角。本文在总结翻译延伸研究方法的基础上,重点探讨了顺式调控元件(mRNA与新生肽链序列)对局部翻译延伸速率的调控作用,同时列举了翻译延伸调控对模板mRNA和蛋白质产物功能的影响,包括mRNA稳定性、蛋白质的合成与降解、蛋白质亚细胞定位以及蛋白质共翻译折叠等,以期吸引生命科学各领域的学者共同参与翻译延伸领域的研究。

真核翻译延伸因子eEF1A1在卵巢癌中表达升高及其与临床病理相关性

上皮性卵巢癌是妇科恶性肿瘤中致死率最高的肿瘤。研究卵巢癌早期诊断、化疗耐药相关的的生物标志物和治疗靶点对提高卵巢癌患者生存率有重要意义。真核翻译延伸因子1α1（eukaryotic translation elongation factor 1A1,eE F1A1）参与肽链延伸、蛋白质翻译后修饰及细胞骨架调节等功能,在细胞增殖、凋亡以及肿瘤细胞侵袭和转移等方面均发挥了重要作用。

人翻译延伸因子eEF1A1促进肺癌细胞H1299对紫杉醇和阿霉素药物耐受的研究

在已知人翻译延伸因子eEF1A的多功能性和与细胞存活相关的基础上,本文进一步研究eEF1A的变体蛋白eEF1A1对癌细胞耐药性的影响.eEF1A1基因的蛋白质编码区经过克隆,并瞬时转染了人肺癌细胞H1299,在确定eEF1A1蛋白的胞内表达后,采用MTT法测定高表达eEF1A1的H1299细胞对抗癌药物紫杉醇和阿霉素的耐受.相对于对照细胞,eEF1A1的高表达可显著提高H1299细胞对阿霉素和紫杉醇的耐受性.通过耐药性测试揭示出eEF1A可能参与肿瘤发生的潜在功能.

嗜根考克氏菌翻译延伸因子P基因的克隆、表达及其条件优化

为获得大量可溶性重组蛋白EF-P用以构建以EF-P蛋白为靶标的新型、高效抗细菌抗生素筛选模型,研究嗜根考克氏菌DC2201 efp基因的体外克隆、表达及表达条件的优化.首先对efp基因进行生物信息学分析,随后经PCR特异性扩增获得efp基因并将其插入表达质粒pET-29a(+)中,重组质粒(pET-29a(+)-efp)转化至表达宿主菌株E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,通过优化诱导表达条件(起始菌体浓度、温度、IPTG终浓度、时间)获得大量可溶性目的蛋白,最后对表达产物进行镍离子亲和层析柱纯化及SDS-PAGE、MALDI-TOF-TOF鉴定.结果获得相对分子质量大小约为25 kDa的蛋白条带,与预测的目的重组蛋白相对分子量大小相符.选择O_(D600 nm)

植物翻译延伸因子eEF1A的研究进展

真核翻译延伸因子eEF1A(eukaryotic translation elongation factor 1A)是参与蛋白质生物合成不可或缺的一部分,eEF1A可与一些蛋白互作参与植物病毒的复制和繁殖、介导细胞死亡和早叶衰老,同时也与植物抗逆性有关,且该基因在植物中表达较广泛且稳定,因此在某些条件下可做内参基因用于基因功能分析。简要阐述植物中eEF1A的保守型、与植物抗逆性的关系、与其他蛋白互作的关系,并进行了展望。

真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展

延伸因子(Elongation factors,EF)是在m RNA翻译时促进多肽链延伸的蛋白质因子,在原核生物和真核生物中并不相同。原核延伸因子分为EF-Tu、EF-Ts及EF-G3种,主要在原核细胞翻译时发挥作用。

mRNA序列固有特征与翻译延伸速率的统计相关性

统计了酿酒酵母基因组中mRNA密码子使用和茎环结构与翻译延伸速率的相关性。结果表明,所有稀有密码子都具有慢速解码的特点,富含GC比富含AU的密码子解码速度更慢。在密码子水平上,纯茎(环)结构对快慢翻译速率的偏好性不明显,而当一个密码子的前2位碱基处于茎结构中,以及第3位碱基处于环结构中时,这类杂合结构显著偏好慢翻译区,上述统计证据支持这样的观点,即mRNA的密码子使用和茎环结构是调节翻译延伸速率的关键因素。

线粒体翻译延伸因子Tu对烧伤大鼠心肌氧化损伤的影响

严重烧伤后，心脏自身的。肾素一血管紧张素系统迅即激活并引起心肌局部血流量下降，这一变化导致烧伤早期缺血缺氧性心肌损伤。前期研究显示，心肌局部血流量于烧伤后10min开始下降，并在伤后1、3h显著减少。烧伤后1h起心肌力学参数即显著下降，提示心肌损害。由于心脏是循环动力器官，心肌损伤促进了严重烧伤后其他器官的缺血缺氧损伤。线粒体是心肌组织中的重要细胞器，执行细胞包括能量生成、代谢调控、离子稳定、活性氧簇（ROS）产生等在内的核心功能。正常情况下，线粒体内0．2％～2．0％的氧在代谢过程中会转变为过氧化物，

利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。