翻译延伸因子1A的研究进展

翻译延伸因子1A(EF1α)是一个主要的翻译因子,EF1α.GTP催化氨酰tRNA结合到核糖体的A位点。EF1α不仅仅是翻译必须的蛋白,而且是一个重要的多功能蛋白。EF1α参与许多重要的细胞过程和疾病,包括信号传导、翻译控制、凋亡、细胞骨架组成、病毒复制及癌基因转化等。

真核翻译延伸因子1A蛋白家族功能位点的进化踪迹分析

真核翻译延伸因子1A(eEF1A)是真核生物蛋白质翻译过程中能将氨酰tRNA运送到核糖体A位点参与多肽延伸反应的多功能蛋白质.本文主要利用多种生物信息学分析工具进行地中海涡虫翻译延伸因子1A(SmEF1A)蛋白序列的查找与eEF1A直系同源蛋白的搜索,并基于90条直系同源蛋白进行eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析和SmEF1A蛋白功能位点的比较研究.结果表明,在eEF1A蛋白家族中共识别到338个踪迹残基位点和20个踪迹残基富集区域,SmEF1A蛋白的功能位点与踪迹残基位点密切相关,与GTP/Mg2+结合相关的S21、T72、D91、G94等重要位点均为全家族保守的踪迹残基,N-糖基化、磷酸化等蛋白修饰位点中踪迹残基位点往往是被修饰的部位或修饰功能发挥的关键辅助位点,而位于分子表面的配基结合口袋则与20个踪迹残基富集区域在分子表面形成的踪迹残基簇关系密切.eEF1A蛋白家族的进化踪迹分析为eEF1A蛋白重要功能区域关键残基的确定和未知功能位点的预测提供了重要信息.

真核翻译延伸因子1家族成员在肺腺癌发生发展中的作用

目的基于公共数据库,分析真核翻译延伸因子1(EEF1)家族成员在肺腺癌中的作用和机制。方法利用UCSC Xena下载癌症基因组图谱项目的人类肺腺癌转录组表达数据,并通过临床蛋白质组肿瘤分析联盟数据库下载人类肺腺癌蛋白质表达数据,通过Mann-Whitney U检验分析EEF1D、EEF1A1和EEF1A2基因和蛋白表达水平及其与临床变量间的相关性,应用Kaplan-Meier生存分析检测EEF1D、EEF1A1、EEF1A2对肺腺癌总生存期的影响。利用单样本基因集富集分析算法探讨EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平与肿瘤免疫细胞浸润的关系,采用Spearman和Pearson相关分析评估EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路的相关性。采用免疫组织化学方法分析肺腺癌(n=75)和癌旁组织(n=75)中EEF1D、EEF1A1、EEF1A2的表达水平。结果EEF1D、EEF1A1、EEF1A2基因和蛋白的表达水平在肺腺癌和非癌组织间的差异均有统计学意义(P均<0.001)。EEF1A1蛋白高表达患者的总生存期预后较差(P=0.039),EEF1A2蛋白高表达患者的总生存期预后较好(P=0.012),在一些临床病理特征上,患者的EEF1D基因表达水平与总生存期的预后有关。EEF1D、EEF1A1、EEF1A2表达水平与多种免疫细胞浸润和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路中的关键基因表达显著相关。结论EEF1D、EEF1A1、EEF1A2与肺腺癌进展相关,为肺腺癌候选的预后相关标志分子。

真核翻译延伸因子eEF1A功能研究进展

总结了近年来对于真核翻译延伸因子eEFlA生物学功能和作用机制研究的一些新进展,具体包括:eEFlA参与介导受损或错误折叠的蛋白质的降解;对微丝、微管骨架系统的组织与调控;参与调控细胞凋亡;参与细胞核输出氨酰-tRNA;与病毒基因组和RNA依赖性RNA聚合酶类(RNA-dependent RNA polymerase,RdRP)互作,参与病毒繁殖.阐述了对eEFlA进行研究的意义和价值,并提供了新的见解和展望.

真核翻译延伸因子1A1通过调控cyclin D2表达促进肝癌细胞增殖

目的 :研究真核翻译延伸因子1A1(eukaryotic translation elongation factor1A1,eEF1A1)表达对原发性肝癌细胞周期和增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 :免疫组织化学法检测101例肝癌及癌旁组织中eEF1A1的表达水平,并进一步分析肝癌组织中eEF1A1表达与肝癌患者临床病理参数的相关性。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测肝癌细胞Huh7、SMMC7721、MHCC97H、Hep3B和正常肝细胞HL-7702中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平。在肝癌Huh7和SMMC7721细胞中分别转染特异性针对eEF1A1基因的shRNA-1/2(即eEF1A1-shRNA-1/2)和过表达质粒pcDNA3.1-eEF1A1,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证eEF1A1表达的变化,然后采用EdU法和FCM法分别检测肝癌细胞增殖和细胞周期的变化。另外,蛋白质印迹法检测转染eEF1A1 shRNA-1/2的肝癌Huh7细胞和转染pcDNA3.1-eEF1A1的SMMC7721细胞中cyclin D2以及信号转导与转录激活子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)通路蛋白的表达变化。结果 :肝癌组织中eEF1A1表达水平明显高于癌旁组织(P <0.001),肝癌细胞中eEF1A1表达水平明显高于正常肝细胞(P <0.001),并且eEF1A1高表达与肝癌大小及TNM分期密切相关(P <0.01,P <0.05)。eEF1A1-shRNA-1/2转染后,肝癌Huh7细胞中eEF1A1 mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P值均<0.01),G_1期细胞所占比例明显升高(P <0.01),肝癌细胞的增殖活性明显降低(P <0.01);pcDNA3.1-eEF1A1转染后肝癌SMMC7721细胞中eEF1A1 mRNA及蛋白的表达水平明显升高(P值均<0.01),G_1期细胞所占比例明显降低(P <0.05),肝癌细胞的增殖活性明显增高(P <0.05)。随着eEF1A1基因表达下调,Huh7细胞中cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均明显下降(P值均<0.05);而过表达eEF1A1后,SMMC7721细胞中cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均明显升高(P值均<0.05);过表达eEF1A1基因的同时加入STAT1抑制剂作用后,cyclin D2、STAT1总蛋白和核蛋白水平均无明显变化(P值均> 0.05)。结论 :eEF1A1通过STAT1通路调控cyclin D2表达,从而促进肝癌细胞周期进展和细胞增殖。

eEF1A1调控水疱性口炎病毒和单纯疱疹病毒复制的初步研究

目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点。方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(sieEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型。用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平。用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功。与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%~80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%~60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01)。poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异。结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路。

YAP通过调控EEF1A2的表达促进肝癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究Yes相关蛋白(yes-associated protein,YAP)通过调控真核细胞翻译延伸因子1A2(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)的表达促进肝癌细胞迁移和侵袭的机制。方法:通过建立YAP和EEF1A2干扰表达或过表达的SMMC-7721和SK-HEP1肝癌细胞模型,采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;应用反转录和实时定量PCR(reverse transcription-quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测相关基因的mRNA和蛋白表达水平;利用染色质靶向酶切检测(cleavage under targets and release using nuclease,CUT&RUN)-qPCR实验检测YAP能否与EEF1A2基因的启动子序列结合。结果:EEF1A2在肝癌组织中高表达,并与肝癌细胞的迁移能力呈正相关;EEF1A2可以促进低迁移能力的SMMC-7721细胞和高迁移能力的SK-HEP1细胞迁移和侵袭,调控细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物Snail和E-cadherin的表达;YAP可以上调EEF1A2的表达而促进肝癌细胞的迁移和侵袭;CUT&RUN-qPCR实验结果显示YAP可以与EEF1A2基因的启动子序列结合。结论:YAP可以通过与EEF1A2基因的启动子序列结合,促进EEF1A2的表达,进一步促进肝癌细胞的迁移和侵袭。

eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达。结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复。与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少;随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高。结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。

酵母双杂交技术鉴定FAT10新的结合蛋白:eEF1A1

目的:利用酵母双杂交技术筛选类泛素蛋白FAT10(HLA-F adjacent transcript 10)在肝癌细胞Hep3B中相互作用的蛋白,为探讨FAT10蛋白在肝癌发生中的作用机制提供依据。方法:利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选人肝癌细胞系Hep3B的cDNA文库,以获得与FAT10相互作用的蛋白分子;通过回交实验、免疫共沉淀和激光共聚焦细胞内共定位实验验证两者之间的相互作用;通过RNA干扰降低FAT10表达观察真核翻译延伸因子1α1(eEF1A1)的表达情况。结果:酵母双杂交筛选得到相互作用蛋白eEF1A1,激光共聚焦细胞内共定位确定FAT10和eEF1A1均位于细胞质内,存在共定位;回交实验和免疫共沉淀实验再次确认eEF1A1能够与FAT10相互作用;FAT10表达降低伴随着eEF1A1的表达下调。结论:FAT10能够与eEF1A1相互作用;FAT10可能通过eEF1A1来实现其部分功能。

锌指基因217和翻译延伸因子1α在病理性瘢痕组织中的表达和意义

目的探讨锌指基因217（ZNF217）和翻译延伸因子1α（EF1α）在病理性癜痕中的表达及其相互关系，以及它们在瘢痕形成中的作用及机制，为瘢痕防治提供实验依据。方法利用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）法、蛋白质免疫印迹（Western印迹）法检测正常皮肤、成熟瘢痕、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中ZNF217和EF1a的ITIRNA、蛋白相对表达水平。结果正常皮肤、成熟瘢痕、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中ZNF217的mRNA及蛋白质相对表达量分别为1．46±0．397、1．45±0．265、4．49±0．999、5．47±0．808；0．276±0．0211、0．299±0．0150、0．743±0．0509、0．747±0．0377。EF1α的mRNA及蛋白质相对表达量分别为1．474±0．469、1．47±0．218、5．10±1．680、5．74±1.920；0．505±0．0371、0．5184±0．0153、0．780±0．0369、0．792±0．0290。病理性瘢痕组织中ZNF217的mRNA及蛋白质表达显著高于正常皮肤、成熟瘢痕（P〈0．01）；病理性瘢痕组织中EF1α的mRNA及蛋白质表达增高，与正常皮肤、成熟瘢痕对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；病理性瘢痕组织中ZNF217的mRNA及蛋白质表达与EF1α的tuRNA及蛋白质表达呈正相关。结论ZNF217在病理性瘢痕组织中表达增高，可能通过调节EFlα等细胞周期调控因子而促进瘢痕组织中细胞的增生，对病理性瘢痕的形成可能起着重要作用。

氯化镉诱发16HBE细胞恶变过程中TEF-1δ p31异常表达的研究

背景与目的:探讨氯化镉(CdCl2)诱发人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中不同阶段人翻译延伸因子TEF-1δ p31 mRNA表达的变化,以进一步阐明CdCl2致癌的分子机制。材料与方法:应用RT与PCR技术,以及Taqman荧光定量PCR方法,检测不同浓度CdCl2诱发16HBE恶性转化3个不同阶段细胞(转化期间细胞、转化细胞和成瘤细胞)的TEF-1δ p31 mRNA表达量的变化。结果:①相对于非转化16HBE对照细胞,CdCl2诱发恶性转化3个不同阶段细胞的TEF-1δ mRNA表达水平均显著升高(P<0.01或P<0.05),5μmol/L CdCl2处理组各阶段细胞内的TEF-1δ平均表达量分别是对照细胞的3.4、5.2和6.9倍;10μmol/L CdCl2处理组各阶段细胞内的TEF-1δ平均表达量分别是对照细胞的4.1、6.9和6.3倍;15μmol/L CdCl2处理组各阶段转化细胞内的TEF-1δ平均表达量分别是对照细胞的1.4、2.9和8.4倍。提示TEF-1δ的异常表达量与CdCl2诱发16HBE细胞恶变程度之间有正相关关系(r>0.799,P<0.01)。②16HBE细胞恶变不同阶段TEF-1δp31的异常表达水平与CdCl2的剂量相关(P=0.001)。结论:氯化镉在诱发16HBE细胞恶变过程中,存在明显的人翻译延伸因子TEF-1δ p31异常表达的现象,其表达水平与细胞恶性转化程度和CdCl2的剂量密切相关,这可能是氯化镉诱发人细胞肿瘤的重要分子致癌机制之一。

ZNF217、EF1α在病理性癜痕中的表达及相关性研究

目的:探讨锌指基因217(ZNF217)、翻译延伸因子1α(EF1α)在病理性瘢痕中的表达及相关性。方法:通过蛋白质免疫印迹法(WB)以及荧光定量聚合酶链式反应法(PCR)检测正常皮肤、病理性瘢痕、成熟瘢痕组织中ZNF217、EF1α的mRNA以及蛋白质的表达水平。结果:增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中ZNF217、EF1α的mRNA以及蛋白质呈现高表达,正常皮肤与成熟皮肤ZNF217、EF1α的mRNA以及蛋白质呈现低表达,增生性瘢痕与瘢痕疙瘩中ZNF217、EF1α的mRNA以及蛋白质表达水平较正常皮肤与成熟皮肤,差异有统计学意义(P<0.05);ZNF217与EF1αmRNA的表达呈现正相关(r=0.827);ZNF217与EF1α蛋白的表达呈现正相关(r=0.964)。结论:ZNF217、EF1α在病理性瘢痕中的表达增高,可通过调节上述因子的表达来促进瘢痕组织细胞增生水平,在病理性瘢痕的形成中具有重要作用。

敲低EEF1A2增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞的药效

探究乳腺癌中翻译延伸因子1α2(EEF1A2)与HER2之间的潜在关系。通过TCGA(TheCancerGenomeAtlas)分析EEF1A2mRNA在乳腺癌中的表达情况;利用MTT(噻唑蓝)、克隆形成和Transwell实验方法检测了HER2+乳腺癌细胞SKBR3和MDA-MB-453在EEF1A2蛋白表达敲低及拉帕替尼处理后的增殖、迁移和凋亡情况。结果表明EEF1A2 mRNA在HER2+乳腺癌组织中高表达,并降低了HER2+乳腺癌患者的总生存率;同时,SKBR3和MDA-MB-453细胞中EEF1A2敲低会增强拉帕替尼对细胞体外增殖、迁移和侵袭的抑制,以及对凋亡的促进。Western blot实验结果表明,下调EEF1A2会增强拉帕替尼对HER2+乳腺癌细胞中HER2/AKT通路的抑制。EEF1A2蛋白可成为改善拉帕替尼治疗HER2+乳腺癌效果的潜在靶标。

42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异

青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。

mRNA差异显示技术分离羊草基因体外培养过程中特定基因及特性分析

羊草种质资源中储存着潜在的优良基因,本研究从分子生物学角度,对来自羊草基因型W4不同幼穗的愈伤组织中差异表达的基因进行了研究。采用DDRT-PCR技术对其差异表达的基因进行了分离,通过银染技术显示差异片段。将得到的差异片段进行回收、克隆测序,得到2个差异片段序列,经过序列分析表明,其中1个片段是与水稻翻译延伸因子eEF-1基因高度同源;另一差异片段与水稻谷胱甘肽转移酶GST基因高度同源。

连续3次基因抓捕构建人EEF1A1-人凝血因子Ⅶ杂合基因座

目的利用人类真核翻译延伸因子1A1(Human eukaryotic translation elongation factor 1A1,hEEF1A1)基因座完整的上下游调控序列和人凝血因子Ⅶ(Human coagulation factorⅦ,hFⅦ)基因组序列构建hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座。方法首先构建连入6个同源臂的pBR322作为连续3次基因抓捕的载体;然后通过Red同源重组系统,在大肠杆菌内进行缺口修复。第一步将hEEF1A1基因3′端侧翼序列亚克隆至抓捕载体上,第二步将hFⅦ完整基因组序列亚克隆至抓捕载体上,第三步将hEEF1A1基因5′端完整侧翼序列亚克隆至抓捕载体上。结果经3次基因抓捕,3个基因片段在抓捕载体上无痕连接,形成一条长约50 000 bp的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座。经PCR、酶切及测序验证,构建的hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座中,原hEEF1A1基因组编码序列从起始密码子到终止密码子被hFⅦ基因组序列精确置换。结论成功构建了hEEF1A1-hFⅦ杂合基因座,为哺乳动物细胞表达大载体的制备提供了实验依据。

生防长枝木霉菌培养特性及形态学与系统发育学鉴定

采用宏观观察法和显微镜镜检的方法,在PDA和MEA培养基上对1株自我采集的具有生防价值的木霉菌株T05进行了培养特性和形态学研究。结果表明：该菌株在PDA平板培养基上生长较快,产分生孢子较早且多,也能产生厚垣孢子;在MEA上能产生分生孢子,但不产生厚垣孢子。该菌株产孢簇为松散羊毛状到紧实的疱状结构;分生孢子梗具有较简单的分枝系统,通常呈直角的1～2次分枝,单生或有时成对。瓶梗不规则地在侧面分布,时常单生,安瓿形或柱形,基部常缩缢但不明显;分生孢子单细胞、长方形到椭圆形、绿色、光滑,大小为（2.0～3.0）μm×（2.0～6.0）μm。根据这些形态特征将菌株T05鉴定为长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）。在此基础上,对T05的r DNA转录间区序列ITS和翻译延伸因子基因tef1-α的第5内含子序列进行了扩增、测序。系统发育学的研究表明,该菌株的ITS序列和tef1-α的第5内含子序列与长枝木霉的多个菌株都具有最大的相似性,因此属于长枝木霉。

紫云英结瘤受体激酶靶蛋白的筛选与鉴定

利用酵母双杂交技术,以结瘤受体激酶(NORK)蛋白的跨膜结构域(TM)为诱饵,进行了与其相互作用靶蛋白的筛选鉴定。结果获得41个候选阳性克隆,通过测序和在NCBI中进行Blast比对分析,发现其中一个具有重要生物学功能的互作蛋白翻译延伸因子AsEF1-α,并将该蛋白相应的编码基因命名为AsEF1-α。进一步的验证表明靶蛋白AsEF1-α与诱饵互作的关键结构域是EF1-α-Ⅲ。

白藜芦醇对裸鼠H22移植瘤的抑瘤作用

目的探讨白藜芦醇对肝癌的体内抑瘤作用及其机制。方法裸鼠皮下注射H22肝癌细胞建立移植瘤模型，随机分为对照组[生理盐水10ml／kg，灌胃（ig）]、白藜芦醇高剂量组（20mg／kg，ig）、低剂量组（10mg／kg，ig）和5-氟尿嘧啶（5．Fu）组[10mg／kg，腹腔注射（ip）]，连续给药10d，游标卡尺测量裸鼠体内肿瘤大小，绘制肿瘤生长曲线，处死裸鼠后称量瘤重并计算抑瘤率。采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测瘤组织中真核翻译延长因子1A1（eEF1A1）、第10号染色体磷酸酶和张力蛋白同源丢失基因（PTEN）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3和Caspase-9mRNA表达水平，采用Westernblot检测eEF1A1的蛋白表达以及磷脂酰肌醇激酶（P13K）p85、蛋白激酶B（Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的蛋白磷酸化水平。结果白藜芦醇可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长，高、低剂量组的抑瘤率分别为46．1％和25．8％。Real—timePCR结果显示，白藜芦醇组瘤组织中eEFlAl的mRNA表达水平（10ms／kg：86．2±24．9；20ms／kg：63．7±14．2）较对照组（100．0±25．6）显著下降（P〈0．05），PTEN（10ms／kg：129．3±33．0；20mg／kg：174．7±31．9）、Caspase-3（10mg／kg：139．6±27．2；20mg／kg：168．8±32．3）和Caspase-9（10mg／kg：121．2±37．3；20mg／kg：184．6±46．2）的mRNA表达较对照组（PTEN：100．0±33．1；Caspase-3：100．0±29．6；Caspase-9：100．0±22．7）显著增加（P〈0．05）。Westernblot结果显示白藜芦醇组瘤组织中Akt、P13Kp85和mTOR的总蛋白表达水平无明显变化，但磷酸化水平（p-Akt：10mg／kg：89．3±19．8；20mg／kg：72．3±18．3；p-p85：10mS／kg：91．3±12．9；20mg／kg：81．2±13．2；p-mTOR：20ms／kg：64．24-13．7）均较对照组（p-Akt：100．0±27．1；p-p85：100．0±22．5；p-mTOR：100．0±27．4）显著下降（P〈0．05），eEF1A1的蛋白表达（10ms／kg：77．6±22．0；20ms／kg：65．2±19．6）也较对照组（100．0±29．5）明显下降（P〈0．05）。结论白藜芦醇可显著抑制H22移植瘤的生长，其机制可能涉及抑制eEFlAl表达以及PBK／AkVmTOR信号通路，阻滞肿瘤细胞增殖并诱导凋亡有关。