华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的鉴定及其编码区序列克隆

目的 通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因 ,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX - 4T - 1和真核表达质粒 pcDNA3上 ,为进一步研究其功能奠定基础。 方法 将插入于 pBlue script质粒上的cDNA进行随机测序 ,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析 ,识别华支睾吸虫新基因 ,并应用Motifsan、Scan prosite等程序对其进行结构域分析。根据PGEX - 4T - 1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物 ,进行PCR扩增 ,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T - 1和真核表达载体 pcDNA3上。构建的PGEX4T- 1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实。 结果 发现华支睾吸虫新基因———csTCTP ,完整阅读框含 5 10个碱基 ,编码 16 9个氨基酸 ,理论分子量为 19 4 5 96Kd。序列分析表明 ,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性 ,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签。所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。结论 发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因 ,并成功构建原核和真核重组表达质粒。

日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因真核表达质粒的构建及其序列分析

目的 研究日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因的生物学功能。方法 根据已公布的日本血吸虫 TCTP(Sj TCTP)基因序列设计引物 ,从日本血吸虫成虫 c DNA文库中扩增出TCTP基因 ORF序列 ,并克隆到真核表达载体 pc DNA3.0中。结果 通过 PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实重组质粒 pc DNA3.0 - TCTP已正确插入 Sj TCTP基因 ORF序列 ,该序列具有 TCTP特征性 TCTP1和 TCTP2结构。结论 Sj TCTP基因真核表达质粒构建成功 ,为研究 Sj

恶性疟原虫海南株(FCC1)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的克隆及序列测定

为了获得翻译控制肿瘤蛋白 (TCTP)基因 ,提取恶性疟原虫海南株 (FCC1)总RNA ,直接用总RNA反转录成单链DNA ,再用长距PCR方法扩增出双链cDNA .根据小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列设计引物 ,以cDNA为模板合成了恶性疟原虫海南株TCTP基因 .以pMD18 T为载体 ,用大肠杆菌XL1 blue对基因克隆 .测序结果表明 ,此基因序列与小鼠约氏疟原虫TCTP基因序列有 85 %同源性 .由此基因序列推导出的TCTP氨基酸序列 ,与小鼠约氏疟原虫TCTP氨基酸序列有 88%同源性 .进入GenBank国际基因库 (美国 )检索 ,所克隆的基因与基因库中恶性疟原虫基因同源性为 97% ;由所克隆的基因序列推导的TCTP氨基酸序列 ,与国际基因库恶性疟原虫TCTP基因推导的TCTP氨基酸序列仅有 1个氨基酸差异 .

水稻干尖线虫翻译控制肿瘤蛋白基因的克隆及表达分析

根据转录组测序结果,结合RT–PCR及RACE技术,从水稻干尖线虫中克隆出翻译控制肿瘤蛋白(The translationally controlled tumor protein,TCTP)基因Ab–TCTP。该基因序列全长810 bp,开放阅读框长度为546 bp,编码181个氨基酸,预测蛋白相对分子质量为20 930,等电点为4.68;Ab–TCTP蛋白属于稳定性蛋白,没有信号肽和跨膜区域,亚细胞定位于细胞核中;该蛋白功能区域的氨基酸序列较为保守,含有TCTP保守结构域,属于TCTP超家族(TCTP superfamily)。多序列比对分析结果表明,Ab–TCTP蛋白与秀丽隐杆线虫TCTP蛋白(XP_003112086.1)的覆盖度为100%,相似度为78%。系统进化树分析结果表明,该蛋白与秀丽隐杆线虫TCTP蛋白(XP_003112086.1)在同一分支上,亲缘关系较近。原位杂交试验结果显示,杂交处理后的线虫在其食道腺附近颜色加深,TCTP基因主要在水稻干尖线虫的食道腺附近表达。利用鱼藤酮对水稻干尖线虫进行药剂处理试验,24 h时LC50值为2.20μg/m L。实时荧光定量PCR结果显示,鱼藤酮处理12 h和24 h后,TCTP基因的表达均上调,且处理24 h时的表达量大于处理12 h时的表达量。推测该基因参与了水稻干尖线虫的应激反应。

植物翻译控制肿瘤蛋白的分子结构特征与功能预测分析

翻译控制肿瘤蛋白(The translationally controlled tumor protein,TCTP)是一类广泛存在于动物、植物及酵母中的,在进化上高度保守、与其它任何蛋白家族均未显示出明显的序列同源性的蛋白。采用生物信息学的方法和工具对已在GenBank上注册的拟南芥(Arabidopsis thaliana)、牵牛(Ipomoea nil)、草莓(Fragaria x ananassa)、橡胶树(Heveabrasiliensis)、南瓜(Cucurbita maxima)、卷心菜(Brassica oleracea)的翻译控制肿瘤蛋白的核苷酸及氨基酸序列进行分析,并对其组成成分、转运肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质的二级及三级结构、分子系统进化关系等进行预测和分析。结果表明,该基因的全长包括5'、3'非翻译区和一个开放读码框,其编码的蛋白是一个无跨膜结构域,不具转运肽的亲水性蛋白,包括一个β-折叠核心区和一个主要的α-螺旋区,不规则卷曲散布于整个蛋白质中,具有TCTP-1和TCTP-2两个特征结构域。

申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白的结构分析与功能预测

【目的】从cDNA文库中识别申克孢子丝菌翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的基因并分析预测其结构功能和应用前景。【方法】利用NCBI和ExPASy网站中的各种基因和蛋白的序列结构信息分析工具,结合DNAstar和VectorNTI suite生物信息学分析软件包,从申克孢子丝菌全长cDNA质粒文库中识别TCTP的基因及其编码区,分析、预测该基因编码的蛋白结构特征和功能。【结果】TCTP基因全长621 bp,编码区具有207个氨基酸。在GenBank同源序列中,其与蓝菌属真菌(Grosmannia clavigera)TCTP氨基酸序列一致性达到78%。理论预测分子质量为64581.4 ku。无质体和线粒体定位序列。预测结果显示编码蛋白含有1个跨膜区、7个亲水性部位和5个主要B细胞表位。与蓝菌属真菌及球毛壳霉(C.globosum)的TCTP进化关系最近。【结论】应用生物信息方法筛选出申克孢子丝菌TCTP的cDNA全长序列并预测其结构与功能、潜在抗原表位,为进一步实验研究该蛋白生物学特性提供了依据。

TOR信号转导通路介导的翻译控制

TOR(target of rapamycin)是真核生物中高度保守的一种大分子的Ser/Thr激酶,是免疫抑制剂雷帕霉素的在体内的靶物质。TOR能够对营养状况和生长因子等因素的变化做出应答反应,通过介导磷酸化反应调节蛋白激酶4E-BP1,S6K, eEF2和磷酸酶等的活性,控制下游翻译因子的磷酸化水平,调节核糖体发生,蛋白质合成等生理过程,在细胞的生长,增殖的综合调控中起到中枢作用。

鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞中抗氧化蛋白6、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1和翻译控制肿瘤蛋白表达变化

目的:通过蛋白印迹技术验证鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞中抗氧化蛋白6(PRDX6)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SERPIN B1)和翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在不同时间点的表达情况。方法:将18只清洁级雄性成年Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、脓毒症6 h组(6 h组)和12 h组,每组6只。利用鲍曼不动杆菌腹腔注射制作鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠模型,提取N组、6 h组和12 h组大鼠的中性粒细胞总蛋白,用免疫印迹实验检测PRDX6、SERPIN B1和TCTP的表达变化,并与前期双向凝胶电泳结果做对比分析。结果:6 h组和12 h组中性粒细胞中PRDX6表达量均明显低于N组(P<0.01),12 h组较6 h组下降更明显(P<0.01);6 h组和12 h组SERPIN B1的表达量均高于N组(P<0.01),6 h组和12 h组差异无统计学意义(P>0.05);6 h组和12 h组TCTP的表达量均显著高于N组(P<0.01),而6 h组和12 h组差异无统计学意义(P>0.05),3种蛋白的表达与前期蛋白质组学实验结果基本一致。结论:鲍曼不动杆菌脓毒症组大鼠中性粒细胞中PRDX6、SERPIN B1和TCTP表达与正常组之间存在明显差异,PRDX6、SERPIN B1和TCTP可能会成为鲍曼不动杆菌脓毒症早期诊断和治疗的分子靶点。

翻译控制肿瘤相关蛋白

翻译控制肿瘤相关蛋白在细胞内和细胞外均起作用。它在翻译和转录水平受到胞外的各种信号调控,在肿瘤、凋亡、免疫等多个方面发挥重要作用。本文对该蛋白的结构组成、生物功能、受调控的机制等方面进行综述。

大竹蛏(Solen grandis)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的分子克隆和表达特征分析

本研究克隆得到了一个大竹蛏(Solen grandis)翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因(SgTCTP)的cDNA全长,其序列全长为1055bp,5′和3′端的非编码区(UTR)分别为54和461bp,开放阅读框(ORF)540bp,编码179个氨基酸,理论等电点为4.50,预测分子量大小19.96kDa。通过荧光定量PCR法检测了SgTCTP在健康大竹蛏各组织中和病原相关分子模式(PAMPs)刺激后的表达规律,结果表明:SgTCTP在检测组织外套膜、鳃、性腺、血细胞、肌肉和肝胰腺中都有表达,其中在肝胰腺中的表达量最高。脂多糖(LPS)、肽聚糖(PGN)和葡聚糖(β-1,3-glucan)刺激都能诱导SgTCTP的表达量上调,SgTCTP的表达量分别在LPS和PGN刺激后6和3h达到最高,为空白对照的3.64和3.36倍;β-1,3-glucan刺激后SgTCTP的表达量上升幅度最大,在12h达到最高,为空白对照的11.76倍。SgTCTP可能作为急性时相蛋白参与大竹蛏的免疫应答。

恶性疟原虫海南株翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因在M15中的表达

获得翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因后与表达载体pQE-30重组,然后转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导后表达TCTP融合蛋白,薄层扫描结果显示目的蛋白占菌体总蛋白的23.4%,目的蛋白中可溶性蛋白所占比例高于非溶性蛋白。Ni-NTA纯化后C端测序,结果C端13个氨基酸序列与由GenBank国际基因库中恶性疟原虫TCTP基因推导出的C端13个氨基酸序列及组成完全一致。结果表明成功地在M15中表达了恶性疟原虫海南株TCTP基因,为进一步研究提供了实验材料。

翻译控制肿瘤蛋白功能的研究进展

翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是一种在物种间高度保守、广泛表达和有多种功能的蛋白质,具有调节炎症反应、抗细胞凋亡、参与应激反应、调节细胞增殖和分化、肿瘤逆转等功能,并参与寄生虫、真菌感染和糖尿病的发展过程。本文主要就TCTP的生物学功能做一综述,以期临床借鉴。

内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因克隆及组织表达特性分析

旨在克隆内蒙古白绒山羊翻译控制肿瘤蛋白(Translationally controlled tumor protein,TCTP)基因并分析其表达模式。采用RT-PCR技术扩增TCTP基因编码区cDNA序列,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析,利用定量RT-PCR方法检测TCTP基因在绒山羊不同组织中的表达特异性。获得的内蒙古白绒山羊TCTP基因编码区cDNA序列全长519 bp,包含了完整的ORF,编码172个氨基酸残基组成的蛋白质。核苷酸序列与绵羊、牛、猪、人、猴及大鼠的同源性在99%-95%之间。生物信息学分析表明,编码的蛋白质理论分子质量19.6 kD,等电点(pI)4.673,含有一个N端糖基化位点,一个蛋白激酶C磷酸化位点,3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,定位于细胞质中。定量RT-PCR方法检测表明,TCTP基因在绒山羊肾脏、肌肉、胰腺、肝脏、睾丸和脑组织中均有表达,其中在肝脏中的表达量较高,在脑中表达量较低。

浅析翻译控制肿瘤蛋白生理功能的研究近况

翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）为肿瘤研究常涉及的一类高表达类蛋白质，又称P21、P23、Q23、组胺释放因子和Fortilin，同源性、保守性都很高，广泛存在于真核生物中。此类蛋白具有逆转肿瘤、调节细胞分化增殖、参与应急反应、对抗细胞凋亡、抑制炎症反应的功能，还与糖尿病、真菌感染、寄生虫病的产生发展相关。本文结合近年来国内外关于翻译控制肿瘤蛋白功能的研究报道资料，对TCTP功能的研究进行了综述。

植物翻译控制肿瘤蛋白研究进展

翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)广泛存在于各类真核生物中,是一类在进化上高度保守的同源蛋白家族。植物TCTP具有促进细胞增殖、分化和再生、对抗生物或非生物胁迫等功能,其表达受转录和翻译水平的调节,调控机理较复杂。本文从TCTP的发现与命名、研究领域与分布、植物TCTP基因的结构特点、表达特性及功能等方面进行了简要综述,旨在全面了解植物TCTP的生理生化功能,以期为进一步研究其调控机理,调控植物生长发育和培育抗逆新品种提供一定的理论参考。

肿瘤蛋白翻译控制1的反义RNA 1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨肿瘤蛋白翻译控制1的反义RNA 1(TPT1-AS1)在肺癌中的表达及其对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和作用机制。方法 收集于2017年1月至2018年12月在信阳市中心医院心胸外科行手术治疗的46例肺癌组织和对应的癌旁组织,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测组织中TPT1-AS1和微小RNA-671-5p(miR-671-5p)表达,Pearson相关性分析肺癌组织中TPT1-AS1和miR-671-5p表达的相关性。同时,于2019年5月至2020年4月期间,通过体外培养肺癌细胞A549,双荧光素酶报告基因实验验证了细胞中TPT1-AS1和miR-671-5p调控关系。另将A549细胞分为对照组、小干扰RNA阴性序列(si-NC)组、TPT1-AS1小干扰RNA(si-TPT1-AS1)组、si-TPT1-AS1+抑制剂阴性序列(anti-miR-NC)组和si-TPT1-AS1+miR-671-5p抑制剂(anti-miR-671-5p)组,甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹实验检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达。结果 肺癌组织中TPT1-AS1表达量较癌旁组织显著升高[(1.88±0.12)比(1.01±0.08),P<0.05],miR-671-5p表达量较癌旁组织显著降低[(0.45±0.04)比(1.01±0.06),P<0.05]。Pearson相关性分析显示,肺癌组织中TPT1-AS1和miR-671-5p呈负相关(r=-0.63,P<0.05)。TPT1-AS1在A549细胞中负调控miR-671-5p表达。si-TPT1-AS1组A549细胞存活率、迁移数和侵袭数分别为(53.24±2.81)%、(63.11±6.51)个和(33.78±3.23)个,均低于si-NC组[分别为(98.78±2.57)%、(147.44±11.08)个和(101.67±9.95)个,均P<0.05]。CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白在si-TPT1-AS1组的表达量分别为(0.43±0.05)、(0.21±0.03)、(0.43±0.04),较si-NC组均降低[分别为(0.86±0.04)、(0.55±0.05)、(0.48±0.07),均P<0.05]。si-TPT1-AS1+anti-miR-671-5p组A549细胞存活率、迁移数和侵袭数及CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达分别为(85.43±2.94)%、(125.78±10.59)个、(88.78±7.19)个、(0.75±0.03)、(0.48±0.03)、(0.43±0.04),较si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组均升高[分别为(54.36±2.95)%、(63.78±6.48)个、(33.56±3.54)个、(0.41±0.03)、(0.22±0.03)、(0.21±0.04),均P<0.05]。对照组与si-NC组、si-TPT1-AS1组与si-TPT1-AS1+anti-miR-NC组各检测指标比较均差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肺癌组织中TPT1-AS1表达升高,miR-671-5p表达降低,且两者呈负相关。TPT1-AS1可能通过靶向下调miR-671-5p的表达促进肺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

翻译控制肿瘤蛋白及其生物学功能研究进展

翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是一种在真核生物中广泛分布、序列上高度同源的蛋白.该蛋白功能多样,广泛参与细胞增殖与分化调控、细胞骨架调节、细胞凋亡抑制、肿瘤逆转和免疫应答等生物学过程.文章就国内外在TCTP的结构、分布及其功能方面的研究进展作一简要概述.

血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白表达的影响

目的 探讨血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）表达的影响.方法 健康清洁级成年雄性Wistar大鼠42只,随机取6只大鼠作为对照组；余36只按随机数字表法均分为脓毒症组和血必净组.通过腹腔注射鲍曼不动杆菌悬液制作脓毒症模型,30 min后血必净组尾静脉注射血必净注射液.脓毒症组和血必净组于制模后6、12和24 h随机取6只大鼠,处死取肝脏组织标本,苏木素-伊红（HE）染色,观察肝脏组织病理学改变；免疫组化法分析肝脏组织TCTP表达阳性细胞；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肝细胞TCTP的表达.结果 HE染色显示,脓毒症组肝脏炎性受损,血必净组肝组织炎性损伤较脓毒症组减轻.免疫组化结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24 h TCTP阳性细胞表达评分（分）明显升高（7.33 ± 0.82、10.67±1.21、7.67±1.21比2.50±1.05,均P＜0.05）；与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h肝组织TCTP阳性细胞表达评分（5.83±0.75、7.50±1.05、5.67±1.37）均降低（均P＜ 0.05）.Western blotting结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24hTCTP表达量明显增加（1.94±0.59、3.20±0.72、1.96±0.55比0.93±0.24,均P＜0.05）；与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h TCTP表达量（1.38±0.36、2.03±0.49、1.30±0.30）明显降低（均P＜0.05）.结论 血必净有利于减轻鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏的炎性损伤,其机制可能与降低肝细胞表达TCTP有关.

曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的原核表达、纯化及其免疫原性分析

目的原核表达、纯化曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(Sm TCTP),并分析其免疫原性。方法构建曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白重组表达质粒pGEX-4T-1-Sm TCTP,转化大肠埃希菌BL21菌株后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达TCTP蛋白,用GST树脂纯化表达产物,并进行SDS-PAGE电泳分析,通过Western blot鉴定重组蛋白的免疫原性。结果 PCR、双酶切、测序结果均表明pGEX-4T-1-Sm TCTP重组质粒构建成功,并在大肠埃希菌中表达可溶性目的蛋白,经GST树脂纯化后获得高纯度的重组目的蛋白。SDS-PAGE分析表达产物为GST融合蛋白,分子质量单位为45ku,与Sm TCTP和GST融合蛋白理论分子质量相符。Western blot显示重组融合蛋白能被相应大鼠抗血清识别。结论成功进行了Sm TCTP的原核表达并获得纯化的重组蛋白,重组蛋白具有良好的免疫原性,为研究Sm TCTP的功能奠定了基础。

曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的真核表达、虫体组织和亚细胞定位及免疫保护效果评价

目的了解曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(SmTCTP)的虫体组织定位,并以Vero细胞为代替模型观察其亚细胞定位,观察重组抗原在曼氏裂头蚴感染的小鼠中的免疫保护效果。方法构建pEGF-N1-SmTCTP真核表达质粒并转染Vero细胞,利用激光共聚焦荧光显微镜观察SmTCTP重组蛋白在Vero细胞中的分布及亚细胞定位;采用免疫组化法观察SmTCTP在曼氏迭宫绦虫成虫组织中的分布。利用重组抗原做动物免疫保护试验,免疫组小鼠注射重组SmTCTP与等体积完全佐剂混合物,空质粒对照组小鼠注射同重组SmTCTP蛋白等量的GST蛋白与等体积完全佐剂混合物,PBS对照组注射相同体积的PBS溶液。每组动物均免疫3次,采用腹腔内部注射,每次免疫注射量为100μl/只,抗原剂量为50μg/只。第3次免疫后的第2周,所有小鼠均经灌胃感染曼氏裂头蚴5条/只,感染后第6周处死并解剖,收集曼氏裂头蚴并计数,计算曼氏裂头蚴的减虫率。结果双酶切和DNA测序鉴定真核表达重组质粒pEGFN1-SmTCTP构建成功,激光共聚焦观察细胞质与细胞核中均有重组SmTCTP分布,但主要分布在细胞核;免疫组化检测SmTCTP主要分布于曼氏迭宫绦虫成虫的子宫、睾丸和卵黄腺处。动物实验显示,攻虫感染6周的重组质粒SmTCTP免疫小鼠检虫数为(1.00±0.816)条,空质粒组为(2.60±0.966)条,PBS对照组为(3.00±0.738)条,且重组SmTCTP免疫小鼠减虫率为66.7%。结论成功构建pEGF-N1-SmTCTP重组质粒,并在Vero细胞中获得了表达。SmTCTP主要定位于曼氏迭宫绦虫成虫的生殖系统,其引发的信号传递可能对曼氏迭宫绦虫生殖系统的发育和功能起调控作用。重组蛋白SmTCTP可诱导小鼠产生抗曼氏迭宫绦虫裂头蚴的免疫保护作用。