临床常用药物对体外培养的复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制效果比较

背景翼状胬肉是眼科常见的眼表疾病，临床上常用的防治翼状胬肉复发的药物包括地塞米松（DXM）、干扰素α-2b（IFN—α2b）、丝裂霉素c（MMC）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、环孢素A（CsA）和他克莫司（FK506），但鲜见关于这6种药物对复发性翼状胬肉成纤维细胞生物学行为抑制作用的比较研究。目的观察DXM、IFN—α2b、MMC、5-FU、CSA和FK506对体外培养的人复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用，筛选治疗复发性翼状胬肉的最佳药物。方法收集2015年5月至2016年7月在天津医科大学眼科医院行复发性翼状胬肉切除术的患者术中切除的组织标本7例7眼，采用组织块培养法分离和培养成纤维细胞，采用免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定。分别在培养液中添加DXM、IFN—α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506作用48h，未添加药物的培养细胞作为对照组。采用CCK-8法检测各种药物对培养细胞的生长抑制率，分别计算药物的半数抑制浓度（IC50）。在药物IC50剂量下作用48h，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡比例和细胞周期的变化；采用免疫组织化学法检测细胞中增生细胞核抗原（PCNA）的表达变化。结果培养的细胞为长梭形，呈旋涡状排列，细胞中波形蛋白表达阳性，角蛋白无表达。DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506对成纤维细胞的IC50分别为（3．5×10^3±2．83×10^-2）、（6．1×10^2±3．6×10^-3）、（3．2×10^-1-I-1×10^-4）、（2．2×10^1±1．2×10^-3）、（6．3×10^1±2．5×10^-3）和（6．0×10^1±0．0×10^0）mg／L。在IC50剂量下分别作用后48h，IFN—α2b组、CsA组、MMC组、FK506组、DXM组和5-FU组凋亡细胞比例分别为（35．00±3．21）％、（30．37±1．67）％、（26．11±0．75）％、（22．01±0．07）％、（20．95±1．68）％和（19．85±0．52）％，与对照组的（11．38±2．18）％比较细胞凋亡比例均明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。对照组G0／G1期、S期和G2／M期细胞比例分别为（85．64±2．62）％、（5．29±1．56）％和（2．73±2．66）％，各药物组G0／G1期细胞比例明显下降，S期和G2／M期细胞明显升高，差异均有统计学意义（均P〈0．05），对细胞周期阻滞效果由强到弱依次为MMC、CsA、5-FU、DXM、IFN—α2b和FK506。对照组细胞中可见有大量PCNA阳性表达，各药物组细胞中PCNA表达强度均弱于对照组。对照组、FK506组、DXM组、5-FU组、IFN—α2b组、CsA组和MMC组细胞中PCNA的阳性表达率分别为（95．00±2．00）％、（82．67±5．04）％、（80．00±2．78）％、（64．00±6．55）％、（38．00±3．00）％、（32．00±4．36）％和（29．67±3．02）％，总体比较差异有统计学意义（F=25．995，P=0．000），各药物组细胞中PCNA阳性表达率均明显低于对照组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论DXM、IFN—α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506均可抑制复发性翼状胬肉成纤维细胞的增生并促进细胞凋亡，其中MMC和CsA的作用更为显著。