双向电泳分析快速老化痴呆鼠脑蛋白质的异常表达及针刺的影响

目的:从整体上观察快速老化及伴随的痴呆对脑蛋白质组的影响以及针刺对其的调节作用。方法:以8月龄快速老化痴呆鼠SAMP10和同源正常老化鼠SAMR1为材料,分为P10针刺组、P10非穴组、P10对照组和R1对照组。针刺组施以“益气调血,扶本培元”针法,针刺“膻中”“中脘”“气海”“血海”“足三里”;非穴组针刺双胁下非穴固定点。双向电泳展示各组小鼠大脑蛋白图谱。结果:双向电泳显示,伴随着快速老化和痴呆,3个蛋白发生了质的变化,其中一个蛋白为P10所特有,两个为R1所特有;9个蛋白发生了量的变化,其中7个蛋白伴快速老化和痴呆高表达,2个低表达。针刺穴位具有良性调节作用,可明显改善上述某些蛋白的表达异常,减缓衰老;而非穴无特异性。结论:伴快速老化,SAMP10痴呆鼠大脑某些蛋白的表达发生了异常,针刺可改善其中某些蛋白的异常,并具有穴位特异性。

针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的改善作用

目的探讨针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的影响。方法选取SAMP8小鼠分为SAMP8对照组,针刺组,非穴组,并设SAMR1对照组。针刺组采用“益气调血,扶本培元”针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果与SAMR1对照组比较,SAMP8小鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05)。针刺组第5天的逃避潜伏期为(48.34±13.01)s,与SAMP8对照组比较显著缩短(P<0.05);反向试验中第3天的逃避潜伏期为(55.03±15.49)s,比SAMP8对照组亦显著缩短(P<0.05);探索试验中针刺组原平台象限的停留时间为(20.19±5.85)s,显著多于SAMP8对照组和非穴组(P<0.05),与SAMR1对照组比较无显著差异。结论针刺可以改善快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8的认知功能。

三种针法对快速老化痴呆模型小鼠老化度评分及行为学影响研究

目的探讨三种针刺方法对快速老化痴呆模型小白鼠(senescence-accelerated mice prone 8,SAMP8)认知功能的影响并进行针法优选。方法选取SAMP8小鼠60只随机分为SAMP8对照组、针刺腹穴组、针刺背俞穴组、针刺腹背穴组和针刺非穴组,每组12只,并设抗快速老化亚系小鼠(senescence accelerated mouse resistance1,SAMR1)对照组12只。针刺腹穴组采用"益气调血,扶本培元"针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;针刺背俞穴组采用双侧肺俞、脾俞和肾俞;针刺腹背穴组采用针刺腹穴加背穴组穴;针刺非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点;SAMP8对照组与SAMR1对照组均不做任何治疗。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果 (1)三种针刺方法均能显著性降低老化度评分,而腹穴组和腹背穴针刺有肯定、显著的疗效优势。(2)SAMP8小鼠存在学习记忆的获得、巩固、保留和再学习方面的认知损害,而三个针刺方法都能显著地改善这种认知功能损害且具有穴位特异性;其中,在隐蔽平台中,针刺背俞穴组起效早但疗效不稳定,针刺腹背穴组起效稳定且从第三天保持最短的平均潜伏期时间;反向试验中,SAMP8针刺腹穴组显示更快和更稳定的作用。结论三种不同针法均能抵抗SAMP8快速老化进程,改善SAMP8认知功能障碍,而改善特点不同。动物实验支持原有"益气调血、扶本培元"针法处方。

三七总皂苷对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中NF-κB/p50表达的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8脑组织中大脑转录因子NF-κB/p50表达的影响。方法将60只SAMP8随机分为对照组、PNS高剂量组、PNS低剂量组、石杉碱甲(Huperzine A)组,每组15只。PNS高、低剂量组分别给予PNS 200 mg/kg、100 mg/kg灌胃,Haperzine A组给予Huperzine A 0.03 mg/kg灌胃,对照组给予相同容积生理盐水灌胃,均每天1次,连续给药2个月。灌胃结束后,取小鼠脑组织。分别采用real-time PCR技术、Western blotting、免疫组化法检测小鼠脑组织中的NF-κB/p50 mRNA、NF-κB/p50蛋白、NF-κB/p50阳性细胞。结果 PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50 mRNA的相对表达量分别为1.61±0.05、1.72±0.19、1.36±0.24、1.85±0.08;PNS高剂量组与对照组相比,P<0.05;Huperzine A组与对照组相比,P<0.01。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50蛋白的相对灰度强度分别为0.696±0.029、0.910±0.038、1.315±0.014、1.436±0.025;PNS高剂量组、PNS低剂量组对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。PNS高剂量组、PNS低剂量组、Huperzine A组、对照组NF-κB/p50阳性细胞数分别为(35±6)、(5±7)、(63±4)、(71±11)个/HP;PNS高剂量组、PNS低剂量组与对照组相比,P均<0.01;Huperzine A组与对照组相比,P<0.05。结论 PNS能降低SAMP8脑组织中NF-κB/p50 mRNA和蛋白的表达,可能是其下调淀粉样前体蛋白基因表达的作用机制。

快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化

目的对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8学习记忆能力的增龄性变化进行较系统的研究,为利用该模型进行其他研究提供实验依据。方法此实验选用1、4、8、12月龄的快速老化痴呆模型小鼠SAMP8,与同龄的正常老化小鼠SAMR1作对照,从老化度评分、避暗实验、Morris水迷宫实验和自主活动实验等方面观察了SAMP8小鼠学习记忆能力的增龄性变化。结果与对照组SAMR1相比,SAMP8小鼠随月龄增加老化度评分呈增高趋势,在8、12月龄的老化度评分值显著高于同龄对照组(P<0.05);避暗实验中,8、12月龄的SAMP8小鼠在电击24h后进入暗箱的潜伏期比同龄SAMR1小鼠显著缩短(P<0.05);Morris水迷宫实验中,1、4月龄SAMP8小鼠找到暗台的潜伏时间与同龄SAMR1小鼠相比差异无显著性,而8、12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比,潜伏时间显著延长(P<0.05);从自主活动实验看,1、4、8月龄SAMP8小鼠单位时间内自主活动次数与同龄SAMR1小鼠相比无显著变化,而12月龄SAMP8小鼠与同龄对照组相比单位时间内自主活动次数显著减少(P<0.05)。结论SAMP8小鼠随月龄增长学习记忆能力逐渐减退;与同龄对照组相比,8、12月龄SAMP8小鼠出现明显衰老特征,表现出学习记忆能力明显低下,故可作为老化痴呆的动物模型用于痴呆有关研究。

“三焦针法”对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响

目的：观察针刺对快速老化痴呆鼠SAMP10血脂代谢的影响,并从血脂代谢角度探讨针刺改善痴呆的机制。方法：以快速老化痴呆鼠SAMP10和正常老化鼠SAMR1为模型,随机分为R1对照组和P10针刺组、P10非穴组、P10对照组,通过Morris水迷宫隐蔽平台试验检测小鼠的学习记忆能力,采用全自动生化分析仪检测血脂中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL-C）含量。结果：P10对照组与R1对照组比较,逃避潜伏期明显延长,两者有显著性差异（P〈0.05）;P10针刺组与P10对照组比较,逃避潜伏期明显缩短,有显著性差异（P〈0.05）;P10针刺组与R1对照组比较,第1～3天有显著性差异（P〈0.05）,第4、5天无显著性差异（P〉0.05）;P10非穴组与P10对照组比较,无显著性差异（P〉0.05）。P10对照组与R1对照组相比,血中TC、HDL-C、LDL-C含量明显降低,有显著性差异（P〈0.05）,TG、VLDL-C含量无显著差异（P〉0.05）;针刺后P10针刺组与P10对照组相比,TC、TG、VLDL-C、HDL-C明显升高,有显著性差异（P〈0.05）;与R1对照组相比亦有显著差异（P〈0.05）,但有接近趋势,与P10非穴组比较,TG、HDL-C有显著性差异（P〈0.05）。结论：＂三焦针法＂能调节SAMP10血脂代谢,这可能是该针法改善SAMP10痴呆状况的机制之一。

淀粉样前体蛋白在快速老化痴呆小鼠P8海马中表达的免疫组化学研究

目的:观察淀粉样前体蛋白(APP)在快速老化痴呆小鼠P8(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法:选用1、4、8、12月龄的SAMP8,用同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)作为对照组,每组各8只,用免疫组化方法检测海马区APP的表达。结果:APP主要在SAM鼠海马神经元胞浆内表达,海马不同区域均有表达。定量结果显示对照组SAMR1小鼠海马各区域APP的表达随月龄增加无显著性改变(P>0.05);而SAMP8小鼠APP的表达则随月龄增加而增加,8月龄和12月龄SAMP8小鼠CA1区的表达量显著高于1月龄组(P<0.05),也分别显著高于同月龄对照组(P<0.05),CA3区APP的改变稍晚于CA1区,与同品系1月龄小鼠及同龄对照组比较,12月龄时显示有显著性增加(P<0.05)。结论:SAMP8小鼠海马APP的表达随月龄增加而增加,提示APP表达量的增加与SAMP8小鼠的快速老化相关。

金属硫蛋白3对快速老化痴呆小鼠海马胶原纤维酸性蛋白表达的影响

目的研究金属硫蛋白3(MT3)对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构的胶原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用免疫组化和免疫印迹方法检测海马结构GFAP的表达。结果 8月龄的SAMP8小鼠海马结构内可见大量浓染的GFAP阳性星形胶质细胞,GFAP含量最多。随着给予MT3浓度的增加,SAMP8小鼠海马结构内的GFAP阳性细胞减少,GFAP含量减少。结论 SAMP8小鼠海马结构星形胶质细胞增生,GFAP表达增多。MT3有减低GFAP表达的作用,随着浓度增加作用增强。

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠行为学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)水迷宫行为学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,进行Morris水迷宫检测。结果与快速老化小鼠对照系(SAMR1)小鼠相比,SAMP8逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨越原平台次数明显减少(P<0.05);3种浓度MT3组当中高浓度MT3组逃避潜伏期最短,跨越原平台次数最多(P<0.05);高浓度MT3组与SAMR1相比,逃避潜伏期仍延长,跨越原平台次数减少(P<0.05)。结论高浓度MT3可以提高SAMP8小鼠的学习能力和记忆能力,其作用效果与浓度有关。

开心散对快速老化痴呆小鼠SAMP8炎症因子及β-APP影响随机平行对照研究

[目的]观察开心散对快速老化痴呆小鼠SAMP8炎症因子及β-APP影响。[方法]使用随机平行对照方法,将40只SAMP8小鼠按随机数字标法分为4组,10只/组,模型对照组、开心散组(高、低剂量组)、艾地苯醌组。正常对照组10只SAMR1小鼠。采用ELISA双抗体夹心法测定干预后脑组织及血清TNF-α、IL-8和β-APP含量。[结果]与正常对照组比较,模型组小鼠脑组织TNF-α、IL-8和β-APP含量明显升高(P<0.01),血清TNF-α、IL-8和β-APP浓度明显降低(P<0.01);与模型组比较,开心散低剂量组、开心散高剂量组小鼠脑组织TNF-α、IL-8和β-APP含量明显降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-8和β-APP浓度明显升高(P<0.01)。[结论]开心散可减少脑组织的β-APP含量,降低炎症因子TNF-α、IL-8水平。

加味温胆汤对SAM-P/10老化痴呆鼠三个脑区抑制性氨基酸的影响

目的 探讨中药加味温胆汤改善脑功能的中枢机制。方法 采用高效液相技术系统观察SAM P/ 10鼠脑内皮层、海马、纹状体等与学习记忆关系密切的脑内 4种氨基酸水平的变化。结果 加味温胆汤 1号方对于海马、纹状体异常升高的γ 氨基丁酸 (γ GABA)水平表现出明显降低作用 ;加味温胆汤预防方对皮层降低的牛磺酸 (Tau)水平有明显的升高作用(P <0 .0 1) ,1号方亦有明显升高作用 (P <0 .0 5 ) ,2号方和西药组仅表现上升趋势。结论 加味温胆汤对于快速老化的SAM P/

金属硫蛋白3对快速老化痴呆模型小鼠海马组织学变化的影响

目的研究金属硫蛋白(MT)3对快速老化痴呆模型小鼠(SAMP8)海马结构CA1区神经元组织学变化的影响。方法给小鼠不同浓度MT3及盐水腹腔注射28 d,处死小鼠后应用光镜和电镜观察制备标本海马结构神经元的变化。结果快速老化小鼠对照小鼠(SAMR1)海马CA1区锥体细胞排列较整齐、均匀,胞膜完整,染色质分布均匀,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁清楚,细胞器清晰可见。SAMP8组海马CA1区可见锥体细胞稀疏、排列紊乱,大部分神经元肿胀、空化,出现凋亡细胞,很多胞核固缩深染,胶质细胞增多,有较多脂褐素沉积。低、中、高浓度MT3组海马CA1区锥体细胞较空白对照组结构较清晰,排列较整齐均匀。神经元核基质呈轻度空化改变,胞质内都可见线粒体、粗面内质网及脂褐素,胶质细胞减少。高浓度MT3组的超微结构最接近于SAMR1组,但仍处于老化状态。结论 SAMP8海马有组织结构和超微结构的改变。MT3对SAMP8海马锥体细胞有保护的作用。

三七总皂苷对老年性痴呆动物模型快速老化小鼠大脑Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42)表达的影响

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对快速老化小鼠SAMP8大脑Aβ1-40、Aβ1-42表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法,随机选取快速老化小鼠大脑顶叶皮层、海马周围白质连续五个视野在高倍显微镜下观察,并计数五个视野下Aβ1-40、Aβ1-42免疫阳性细胞的平均个数。结果:PNS能明显减少快速老化小鼠大脑Aβ1-40、Aβ1-42免疫阳性神经元的数量。结论:PNS对SAMP8小鼠大脑Aβ1-40及Aβ1-42的表达有明显的抑制作用。

利用生物信息学工具分析“益气调血扶本培元”针法治疗老化痴呆的关键靶点

目的分析"益气调血扶本培元"针法治疗老化痴呆的关键靶点,阐明针刺治疗老化痴呆的细胞生物学机制。方法 60只7月龄快速老化痴呆SAMP8小鼠,随机分为对照组、针刺组和非穴组,每组各20只。针刺组以"益气调血扶本培元"针法针刺处理,非穴组处以非经非穴点针刺处理,对照组以单纯捉抓处理。采用Morris水迷宫方法观察各组小鼠学习记忆能力;提取各组小鼠海马组织的基因差异表达模式,利用GEO2Enrichr网络在线分析工具,分析差异表达基因的主要KEGG代谢网络途径,以及差异表达基因主要的细胞定位;提取各组小鼠海马组织的蛋白质组,利用DAVID在线注释工具,在蛋白质组水平分析各组小鼠海马组织差异表达蛋白质中线粒体相关蛋白质的数量。结果针刺组小鼠逃避潜伏期成绩从(79.90±14.82)s缩短到(28.64±12.71)s,较对照组和非穴组成绩显著缩短(P<0.01);针刺组和非穴组中均有多条代谢网络途径被活化,与非穴组比较,"氧化磷酸化"、"帕金森病"以及"蛋白质在内质网的加工"这3条代谢网络途径是针刺组特异的;针刺组表达上调的基因主要定位于神经元突起、线粒体和细胞骨架,非穴组的表达上调的基因主要定位于神经元突起;各组小鼠海马组织差异表达蛋白质中,表达上调的线粒体相关蛋白质数量,针刺组有32个,非穴组有5个。结论 "益气调血扶本培元"针法治疗老化痴呆的靶点很广泛,神经元线粒体是针刺疗效的关键靶点。

"益气调血、挟本培元"针法对SAMP10鼠痴呆状况和大脑总胆固醇的影响

目的观察快速老化痴呆鼠SAMP10痴呆状况与大脑总胆固醇异常的相关性,并探讨"益气调血、挟本培元"针法改善痴呆的机制。方法设立正常老化鼠SAMR1对照组,SAMP10对照组、针刺组及非穴组,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习记忆功能,Folch法和比色法测量大脑总胆固醇的含量。结果与SAMR1对照组相比,SAMP10对照组小鼠出现明显的学习记忆障碍,其大脑总胆固醇含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而针刺组可降低大脑总胆固醇含量,改善其学习记忆能力与SAMP10对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论调节大脑胆固醇的稳态可能是"益气调血、扶本培元"针法改善SAMP10鼠痴呆状况的机制之一。

针刺抑制p53mRNA过表达并改善SAMP8小鼠的认知能力

[目的]探讨针刺延缓脑衰老的机制。[方法]将快速老化痴呆小鼠(SAMP8)及其正常同源对照小鼠(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8对照组、SAMP8针刺组和SAMP8非穴组。针刺组给予"益气调血,扶本培元"针法治疗;非穴组针刺双胁下两个固定非穴位点;其余两组给予等量的捉抓刺激;每天1次,持续15 d。采用Morris水迷宫测定动物的学习记忆能力;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定海马p53mRNA表达。[结果]与SAMR1对照组相比,SAMP8各组的学习能力及记忆保持能力出现明显损伤,表现为思维僵化、学习过程减慢;其海马p53mRNA表达明显升高。针刺明显改善SAMP8的认知能力,并降低海马p53mRNA表达,甚至低于正常组。[结论]SAMP8的认知损害与p53基因表达异常有关,针刺通过调节p53mRNA表达延缓SAMP8脑衰老的进程,是针刺改善衰老后认知能力下降的原因之一。

糖代谢酶与阿尔茨海默病关系的研究进展

目前为止，阿尔茨海默病（AD）的具体机制仍不十分明确。研究表明，AD患者脑中普遍存在葡萄糖利用降低和代谢异常，并且代谢能力的下降与痴呆程度成正比。AD患者在出现认知功能减退以前，大脑皮层的糖代谢就已经出现异常。Wang等也认为糖代谢下降是AD的早期标志，且下降的幅度与痴呆的程度有关。糖代谢障碍与AD关系密切，是导致神经元退变的共同通路，它与AD脑神经元的丢失、老年斑的形成、神经纤维缠结等都有密切的联系。

开心散对SAMP8小鼠神经递质的影响

目的观察开心散对快速老化痴呆模型小鼠SAMP8神经递质的影响。方法将40只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、开心散高剂量组、开心散低剂量组、艾地苯醌组,每组10只,选10只SAMR1小鼠为正常组。灌胃给药干预8 w后,取血浆及组织上清,采用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织及血浆5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量。结果与正常组比较,各组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,开心散高剂量组和低剂量组脑组织5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著升高(P<0.01),血浆5-HT、5-HIAA、NE、DA含量显著降低(P<0.01)。结论开心散可以通过改善快速老化痴呆模型小鼠单胺类神经递质的含量,调整神经递质的不平衡状态,进而改善阿尔茨海默病(AD)的行为和精神症状。

调补气血针法对SAMP10脑中枢神经递质含量影响的研究

目的 :旨在揭示调补气血针法治疗痴呆的中枢作用机制。方法 :采用HPLC -ECD法对SAMP10及SAMR1脑组织单胺类神经递质和乙酰胆碱 (Ach)含量进行测定。结果 :①SAMP10脑组织DA、5 -HT、Ach的含量显著低于SAMR1的含量 ;②调补气血针法可使脑组织降低的DA、5 -HT、Ach的含量显著提高。结论 :①SAMP10小鼠的学习、记忆障碍发病机制之一可能是脑组织Ach和单胺类神经递质的代谢异常出现了神经损害 ;②调补气血针法改善了SAMP10的学习。