DW-3000呼吸机所致老年大鼠急性肺损伤模型的建立

目的建立DW-3000呼吸机所致老年大鼠急性肺损伤的动物模型。方法将20只健康老年雄性SD(Sprague Dawley,SD)大鼠随机分为2组(A组为致伤组,B组为对照组),实施麻醉和气管术切开后,吸入空气进行机械通气,通气时间4h。A组大潮气量通气(30mL/kg),B组小潮气量通气(8mL/kg)。根据动脉血气结果计算氧合指数、肺系数。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-8含量及肺组织匀浆中丙二醛(MDA)总抗氧化能力(T-AOC)水平。观察肺组织病理学改变。结果 A组大鼠氧合指数较B组显著下降,肺系数较B组显著增高。A组大鼠BALF中IL-1β、IL-8[(123.4±7.31)ng/L,(68.10±10.20)ng/L]含量较B组[(54.70±8.04)ng/L,(37.70±7.10)ng/L]显著增高。A组大鼠肺组织匀浆中MDA水平较B组显著增高,T-AOC水平较B组显著下降。病理学结果,A组大鼠肺组织中可见较多的炎性细胞浸润和肺泡壁结构的破坏。结论 DW-3000呼吸机大潮气量通气4h后,能够造成老年大鼠的急性肺损伤。

建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制

目的摸索相关参数建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型并探讨高原低氧肺组织损伤机制。方法1.建立急性高原低氧肺组织损伤雄性大鼠模型的方法:采用随机数字表法将雄性大鼠分为5组,即空白对照组,高原低氧6h组、24h组、48h组、72h组,适应性喂养7 d后进低压氧舱(模拟海拔7000 m),以肺组织纹理模糊、肺泡壁变厚、肺泡间隔增宽判断造模成功。2.探讨高原低氧肺损伤机制的方法:分别比较各组大鼠动脉血血气分析(ABG)结果、肺组织血管紧张素II(Ang II)含量、肺组织内皮素1(ET-1)含量和肺组织血管紧张素转化酶(ACE)m RNA的表达情况及肺组织超微结构,并作相关性分析。结果1.各组雄性大鼠ABG相关指标的变化:与对照组比较,高原低氧6 h、24 h、48 h、72 h组氧分压(PaO_(2))、动脉血氧饱合度(SaO_(2))、二氧化碳分压(PaCO_(2))和酸碱度(p H)值均下降,在一定时间范围内缺氧时间越长下降越明显(P<0.05)。2.各组雄性大鼠肺组织形态学的变化:与对照组比较,光镜下可见高原低氧各组出现不同程度的肺纹理模糊、肺泡壁增厚、肺泡间隔增宽;随着缺氧时间延长,肺组织损伤逐渐加重。3.各组雄性大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量变化:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织AngⅡ、ET-1含量明显升高(P<0.01),在一定时间范围内随缺氧时间延长而增加,72 h组达到高峰。4.各组雄性大鼠肺组织ACE m RNA表达比较:与对照组比较,高原低氧各组大鼠肺组织ACE m RNA表达均上调,6h组升高显著,72h组达到峰值(P<0.01)。结论利用低压氧舱模拟海拔7000 m环境,可以有效建立大鼠肺组织损伤模型;高原低氧肺损伤机制可能与ET-1、AngⅡ及ACE m RNA的表达水平上调,肾素-血管紧张素系统(RAS)失衡有关。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路探索小鼠急性肺损伤动态时间模型的建立

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡通路,建立随时间变化的脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,观察不同时间点小鼠肺损伤情况,根据不同时间伤情的变化和焦亡通路相关蛋白的表达,综合筛选出最佳造模时间点,为后续实验奠定动物模型基础。方法 54只6~8周龄SPF级雄性BALB/c小鼠,随机分为9组,空白对照组(Con组)和造模时间组(1、3、6、12、18、24、48和72 h组),分别检测体重、肺组织大体、病理观察及半定量评分、肺指数、肺含水量及湿干重比;取肺泡灌洗液检测白细胞计数,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18及BCA蛋白浓度;使用Western Blot检测肺组织中经典焦亡通路相关NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、GSDMD蛋白的表达。结果 根据体重统计,各组均有下降,24及48 h组下降最为明显;通过肺组织大体、病理观察及评分发现,24~72 h肺组织损伤严重,每组与Con组比较均有统计学意义;肺指数、肺含水量及湿干重比在24~72 h明显升高;肺泡灌洗液中白细胞从造模后6 h开始升高,48 h可达峰值,至72 h均维持上升状态;灌洗液中IL-18在24 h开始升高,72 h仍然持续升高;TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子在6 h时均保持最高水平状态,在48 h明显降低;灌洗液中蛋白浓度在24、48及72 h与Con组相比均有明显升高;通过Western Blot检测发现,ALI模型各个时间组焦亡通路蛋白NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1与GSDMD蛋白表达均有上调,24~72 h组的通路蛋白表达与Con组相比明显增强。结论综合分析不同时间组中各项实验指标、炎症因子及Western Blot中通路蛋白的表达,发现焦亡机制与ALI的发生与进展密切相关,并随时间迁移。从实验结果得知24~48 h肺损伤程度严重,肺损伤相关指标及通路蛋白具有研究意义,可作为造模时间参考。也为后续研究ALI的具体机制及干预靶点提供了模型参考与实验基础。

基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路研究枇杷叶提取物对急性肺损伤模型大鼠炎症因子的影响

目的 基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路研究枇杷叶提取物对急性肺损伤(ALI)大鼠炎症因子的影响及潜在机制。方法 60只SPF级Wistar大鼠按照随机数字表法分为空白组(NC组)、模型组(ALI组)、阳性对照组(Dex组)、枇杷叶提取物低剂量组(EJLE-L组)、枇杷叶提取物中剂量组(EJLE-M组)和枇杷叶提取物高剂量组(EJLE-H组),每组10只。ALI组、Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组气管内均滴注2 mg/kg脂多糖建立大鼠ALI模型。建模后,Dex组腹腔注射5 mg/kg地塞米松,EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组分别腹腔注射50、100、150 mg/kg枇杷叶提取物,NC组和ALI组腹腔注射5 mg/kg生理盐水。观察各组大鼠肺组织病理组织学及细胞超微结构变化,比较各组大鼠肺组织湿重/干重值,外周循环、肺组织炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平及肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB累积光密度值(IOD)及蛋白、mRNA表达量。结果 与ALI组比较,Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组、EJLE-H组肺组织湿重/干重值[(6.12±0.14)、(5.76±0.11)、(5.09±0.12)、(4.67±0.10)比(6.89±0.17),P<0.05],肺组织病理评分[(7.79±0.65)分、(5.45±0.43)分、(3.23±0.29)分、(1.02±0.20)分比(13.23±1.00)分,P<0.05],外周循环炎症因子IL-1β[(102.32±11.23)ng/L、(87.86±9.09)ng/L、(64.54±6.74)ng/L、(43.11±5.63)ng/L比(147.87±15.64)ng/L,P<0.05]、IL-6 [(114.43±15.34)ng/L、(99.07±11.23)ng/L、(78.43±9.02)ng/L、(55.46±6.12)ng/L比(156.65±19.98)ng/L,P<0.05]、TNF-α[(156.64±19.09)ng/L、(107.64±12.32)ng/L、(69.09±9.09)ng/L、(49.98±5.46)ng/L比(201.98±24.43)ng/L,P<0.05]水平,肺组织炎症因子IL-1β[(172.21±17.68)ng/L、(123.32±14.35)ng/L、(95.54±10.76)ng/L、(70.94±8.75)ng/L比(223.42±28.76)ng/L,P<0.05]、IL-6[(154.43±17.65)ng/L、(100.23±11.43)ng/L、(76.42±8.93)ng/L、(66.75±6.55)ng/L比(198.90±22.34)ng/L,P<0.05]、TNF-α[(164.58±18.97)ng/L、(110.23±14.53)ng/L、(90.23±10.98)ng/L、(61.65±6.57)ng/L比(223.42±34.52)ng/L,P<0.05]水平,肺组织HMGB1[IOD值:(232.32±34.42)、(197.87±29.09)、(123.23±15.46)、(69.98±8.98)比(398.89±45.53),蛋白:(2.32±0.29)、(2.00±0.17)、(1.78±0.10)、(1.35±0.20)比(2.76±0.21),mRNA:(2.10±0.17)、(1.85±0.19)、(1.53±0.14)、(1.29±0.20)比(2.90±0.21),P <0.05]、TLR4 [IOD值:(214.34±22.35)、(168.98±18.90)、(100.34±11.23)、(77.85±8.45)比(453.34±52.32),蛋白:(2.54±0.23)、(2.04±0.22)、(1.61±0.18)、(1.46±0.14)比(2.98±0.34),mRNA:(2.03±0.25)、(1.76±0.21)、(1.54±0.14)、(1.25±0.10)比(2.76±0.22),P<0.05]、NF-κB [IOD值:(200.97±28.87)、(159.09±16.57)、(102.32±14.35)、(67.84±7.98)比(323.43±39.98),蛋白:(1.87±0.20)、(1.34±0.19)、(1.00±0.15)、(0.88±0.09)比(2.00±0.16),mRNA:(2.67±0.20)、(2.21±0.19)、(1.97±0.17)、(1.54±0.12)比(3.02±0.22),P<0.05]均明显降低;与Dex组、EJLE-L组、EJLE-M组比较,EJLE-H组上述指标改善更明显(P<0.05)。结论枇杷叶提取物可明显抑制ALI大鼠外周循环及肺部炎症,其可能通过HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路逆转肺损伤。

甲基莲心碱通过调控NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤

【目的】探讨甲基莲心碱对脓毒症大鼠急性肺损伤的治疗作用及机制。【方法】采用盲肠结扎穿刺(GLP)法制备脓毒症大鼠模型,造模成功后,将大鼠分为模型组,甲基莲心碱低、高剂量组和甲基莲心碱高剂量+PMA[核转录因子κB(NF-κB)激活剂佛波酯]组,同时设置假手术组,每组15只。术后6 h,给予相应干预,连续2 d。采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态学改变,并进行损伤病理评分;检测肺组织湿干质量比;血气分析仪检测动脉血氧分压(PaO_(2))和动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))水平;酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western Blot法检测肺组织中NF-κB p65、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)p65(Ser536)、环氧合酶2(COX-2)蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠肺组织损伤严重,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著升高(P<0.01),PaO_(2)水平显著降低(P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,甲基莲心碱低、高剂量组大鼠肺组织损伤明显改善,肺组织损伤病理评分、湿干质量比及PaCO_(2)水平显著降低(P<0.05或P<0.01),PaO_(2)水平显著升高(P<0.05或P<0.01),BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及肺组织中p-NF-κB p65/NF-κB p65比值、COX-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。然而,PMA干预后,甲基莲心碱对脓毒症大鼠肺组织损伤的改善作用被明显逆转(P<0.01)。【结论】甲基莲心碱可改善大鼠脓毒症急性肺损伤及肺功能,其作用可能与抑制NF-κB信号通路激活,进而减少体内炎症因子释放有关。

重型颅脑损伤机械通气输血患者发生急性肺损伤的影响因素及其列线图模型的构建

目的探究重型颅脑损伤(STBI)机械通气输血患者急性肺损伤(ALI)发生影响因素,并构建列线图模型。方法收集2020年5月至2023年5月河南大学第一附属医院收治的258例STBI机械通气输血患者的临床资料进行回顾性研究,根据有无发生ALI分为ALI组(n=67)和N-ALI组(n=191),比较两组患者的一般资料和早期预警标志物,采用Logistic回归方程筛选ALI的影响因素,采用R软件构建列线图预测模型,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)、校准曲线、决策曲线(DCA)分析列线图预测模型区分度、一致性、临床有效性,同时基于列线图模型建立危险分层系统。结果ALI组患者的输血量、Murray评分、机械通气时间及血清C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)、含热蛋白结构域6的NOD样受体(NLRP6)、含热蛋白结构域3的NOD样受体(NLRP3)水平分别为(600.24±180.18)mL、(0.30±0.12)分、(7.30±1.34)d、(20.24±6.07)μg/L、(53.96±4.48)μg/L、(42.41±5.54)μg/L,明显高于N-ALI组的(418.18±125.12)mL、(0.10±0.03)分、(5.52±1.00)d、(14.14±4.18)μg/L、(45.56±5.29)μg/L、(36.61±4.48)μg/L,低氧血症发生率为56.72%(38/67),也明显高于N-ALI组的34.56%(66/191),差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归方程分析结果显示,输血量、Murray评分、机械通气时间、低氧血症及血清CXCR4、NLRP6、NLRP3均是ALI发生的影响因素(P<0.05);基于Logistic回归方程结果构建列线图预测模型,AUC为0.955,且预测概率与实际概率一致性较高,在阈值0~100%概率内,该模型临床获益率高;在整个研究人群中,低风险、中等风险、高风险患者ALI发生率分别为8.75%、24.00%、40.78%。结论含血清CXCR4、NLRP6、NLRP3的列线图模型预测STBI机械通气输血患者ALI效能较高,可帮助临床医生识别高风险人群,采取合理治疗措施,降低ALI发生风险。

基于JAK2-STAT3信号通路探讨热毒宁注射液治疗大鼠急性肺损伤的作用机制

目的:探讨热毒宁注射液通过调节JAK2-STAT3信号通路干预急性肺损伤(ALI)大鼠作用机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为五组,分别为模型对照组、空白对照组、地塞米松组、热毒宁高剂量组和热毒宁低剂量组。每组大鼠均进行腹腔注射给药,每日1次,连续5 d,末次给药后,采用脂多糖滴注咽后壁气管建立ALI大鼠模型。造模24 h后,比较各组大鼠动脉氧分压,HE染色法观察肺组织的病理学改变,ELISA法检测大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平,Western blot测定各组大鼠肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PaO 2水平明显下降,病理评分升高,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型对照组比较,地塞米松组和热毒宁高剂量组大鼠PaO 2水平升高,病理评分下降,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:热毒宁注射液对ALI大鼠有保护作用,其机制可能与调节JAK2-STAT3信号通路的活化、降低炎症反应有关。

清肺通络方对急性肺损伤后大鼠肺纤维化的影响

目的:探索清肺通络方对内毒素诱导的急性重度肺损伤大鼠早期肺纤维化的抑制作用。方法:大鼠随机分为6组:空白组,模型组,地塞米松组、清肺通络方低、中、高剂量组(10,20,30g·kg^(-1))。苏木素-伊红染色观察肺组织病变,Masson染色分析肺纤维化程度。ELISA实验检测各组大鼠血浆中IL-1β和TNF-α的水平。结果:急性肺损伤大鼠血浆中TNF-α和IL-1β表达水平显示:模型组大鼠IL-1β和TNF-α水平高于空白组(P<0.05),清肺通络方各组(10,20,30g·kg^(-1))大鼠血浆中IL-1β和TNF-α水平均低于模型组(P<0.05),清肺通络方各组(10,20,30g·kg^(-1))大鼠血浆中IL-1β和TNF-α水平均低于地塞米松组(P>0.05),清肺通络方各组(10,20,30g·kg^(-1))之间无显著统计学差异(P>0.05)。苏木素-伊红染色检查显示:地塞米松组和清肺通络方各组肺组织病理损伤程度明显较模型组减轻,肺泡腔及肺泡隔结构尚存,肺泡间隔存在局部变厚,肺泡较少存在融合。Masson染色结果显示:模型组大鼠肺组织中可见大量被染成蓝色的胶原纤维沉积区域,其纤维化程度相较于地塞米松组和清肺通络方各组明显增加,地塞米松组大鼠肺组织仅有少量的区域被染成蓝色,纤维化程度最轻,地塞米松组和清肺通络方各组其纤维化程度与空白组相比无明显差异或差异较小。结论:清肺通络方可降低急性肺损伤后大鼠血浆炎性因子IL-1β和TNF-α水平,抑制急性肺损伤后早期肺纤维化程度。

个体化预测老年妇科恶性肿瘤术中急性压力性损伤风险Nomogram模型的构建及验证

目的:构建个体化预测老年妇科恶性肿瘤患者术中急性压力性损伤的风险Nomogram模型,并验证模型的预测能力。方法:选取2018年6月至2023年6月于江苏省人民医院行手术治疗的505例老年妇科恶性肿瘤患者,其中术中发生急性压力性损伤51例(损伤组)。采用单因素和多因素logistic回归分析老年妇科恶性肿瘤发生术中急性压力性损伤的危险因素,并建立相关Nomogram预测模型。结果:损伤组和非损伤组患者的肿瘤分期、术前Munro量表评分、术前ALB、术前血红蛋白(Hb)、手术时间、术中出血量和术中体温波动情况比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,Ⅲ~Ⅳ期肿瘤、术前Munro量表评分高、术前白蛋白(ALB)<35g/L、术前Hb<110g/L、手术时间≥180min、术中出血量≥500mL和术中体温波动较大是老年妇科恶性肿瘤患者发生术中急性压力性损伤的独立危险因素(P<0.05)。Nomogram模型验证结果,C-index指数为0.809(95%CI为0.781~0.836),Hosmer-Lemeshoe拟合优度检验显示,模型拟合较好(χ^(2)=4.308,P=0.117),ROC曲线的AUC为0.811(95%CI为0.783~0.839),在1%~80%的列线图可预测范围内,模型获益值均为正值。结论:老年妇科恶性肿瘤患者发生术中急性压力性损伤的危险因素包括Ⅲ~Ⅳ期肿瘤、术前Munro量表评分高、术前ALB<35g/L、术前Hb<110g/L、手术时间≥180min、术中出血量≥500mL和术中体温波动较大,基于上述因素构建的Nomogram模型对老年妇科恶性肿瘤患者术中急性压力性损伤发生风险具有较高的预测价值。

大黄素对脂多糖诱导的新生大鼠急性肺损伤的保护作用

目的 探索大黄素对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的新生大鼠急性肺损伤的保护作用。方法 新生大鼠腹腔注射LPS制作建立急性肺损伤模型,每天腹腔注射不同剂量大黄素(emodin, EMD),连续治疗7 d,对照组腹腔注射等体积生理盐水。通过HE、Masson染色进行组织病理学检测,免疫组织化学检测肺组织平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,原位末端标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡水平,Western Blot检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cleaved Caspase 3)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果 脂多糖使大鼠肺损伤评分、肺纤维化程度、α-SMA平均光密度、TUNEL阳性率、Collagen I、Collagen Ⅲ、cleaved Caspase3、IL-1β、TNF-α蛋白表达水平较对照组显著增加,大黄素处理能剂量依赖性抑制脂多糖引起的上述变化。结论 大黄素对LPS诱导的新生大鼠急性肺损伤具有保护作用。

七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能和NF-κB/NLRP3炎性体通路的影响

目的研究七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能及核因子-κB/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NF-κB/NLRP3)通路的影响。方法将75只大鼠随机分为对照组、模型组及1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组,每组15只。除对照组外,其余4组腹腔注射5 mg/kg脂多糖制备急性肺损伤模型,造模后1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组分别自由吸入1.5%、2.0%、2.5%七氟烷60 min,对照组和模型组自由呼吸空气。比较5组大鼠一般情况、肺功能状况(气道阻力、动态肺顺应性、用力肺活量)、肺湿/干比值(W/D)、氧合指数[动脉血氧分压(PaO_(2))/吸入氧浓度(FiO_(2))]、肺组织病理变化、肺泡灌洗液中炎性因子水平[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)],采用蛋白免疫印迹法检测并比较5组大鼠肺组织NF-κB、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)表达水平。结果脂多糖作用96 h后,对照组、模型组及1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组大鼠生存率分别为100%(15/15)、60.00%(9/15)、66.67%(10/15)、80.00%(12/15)、73.33%(11/15),2.0%七氟烷能明显提高大鼠生存率。HE染色显示,模型组肺组织病理改变明显,包括大量炎性细胞浸润、肺泡壁增厚且肺泡血管阻塞等,相较于模型组,1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组肺组织病理改变有程度不同的减轻,其中以2.0%七氟烷改善效果最佳。与对照组比较,模型组气道阻力、肺W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1显著升高(P<0.05),动态肺顺应性、用力肺活量、PaO_(2)/FiO_(2)显著降低(P<0.05);与模型组比较,1.5%、2.0%、2.5%七氟烷组气道阻力、肺W/D、TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1显著降低(P<0.05),动态肺顺应性、用力肺活量、PaO_(2)/FiO_(2)显著升高(P<0.05)。结论七氟烷对急性肺损伤大鼠肺功能具有保护作用,以2.0%七氟烷肺保护效果最佳,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3炎性体通路有关。

脓毒症并发急性肺损伤风险列线图模型的建立及验证

目的建立并验证脓毒症并发急性肺损伤(ALI)风险的列线图模型。方法选取257例脓毒症患者为建模组,另以7∶3的比例收集同期110例脓毒症患者为验证组。两组均根据是否并发ALI分为ALI组与无ALI组。Logistic回归分析脓毒症患者并发ALI的影响因素,R软件构建脓毒症并发ALI风险的列线图模型并进行验证。结果建模组ALI发生率为33.85%,验证组ALI发生率为31.82%。肺部感染(OR=16.505)、降钙素原(PCT,OR=2.640)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α,OR=1.098)、氧合指数(OR=0.867)、APACHEⅡ评分(OR=1.750)是脓毒症并发ALI的影响因素(P<0.05)。基于以上5个指标构建列线图预测模型,建模组和验证组列线图预测ALI发生风险的AUC分别为0.858、0.877,H-L检验显示一致性较好,校准曲线预测概率与实际概率接近,提示模型预测ALI发生风险具有良好准确度。结论脓毒症并发ALI影响因素包括APACHEⅡ评分、肺部感染、PCT、TNF-α、氧合指数,据此构建ALI发生风险的列线图模型预测价值较好,可为个体化预防脓毒症患者并发ALI提供参考。

大黄素调节NLRP3/IL-1β/CXCL1信号通路改善急性呼吸衰竭大鼠炎症反应和肺损伤的实验研究

目的 探究大黄素对急性呼吸衰竭大鼠炎症反应、肺损伤的影响以及对NOD样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)/CXC趋化因子配体1(CXCL1)信号通路的调控作用。方法 支气管滴入大肠杆菌脂多糖构建急性呼吸衰竭大鼠模型,成功造模70只,随机分成模型组,大黄素低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,大黄素+NLRP3激动剂[40 mg/kg大黄素+10 mg/kg NLRP3激动剂(BMS-986299)]组;每组14只。另取14只健康大鼠以相同方法支气管滴入等量生理盐水设为对照组。各组大鼠以相应方法连续干预7 d(每日1次)。肺功能仪和全自动血气分析仪检测大鼠呼吸频率、动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))、动脉血氧分压(PaO_(2));酶联免疫吸附法检测肺组织炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)];苏木素-伊红染色观察肺组织病理学;荧光定量PCR和蛋白印迹法检测肺组织NLRP3、IL-1β、CXCL1信使RNA(mRNA)和蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组肺组织结构被破坏,肺泡壁充血,大量炎性细胞浸润,肺泡水肿,呼吸频率、PaCO_(2)及肺组织TNF-α、IL-8、NLRP3、IL-1β、CXCL1 m RNA和蛋白表达显著升高,PaO_(2)显著降低(P <0.05);与模型组比较,大黄素低、中、高剂量组肺组织病变逐渐减轻,肺泡结构逐渐完整,炎性细胞浸润逐渐减少,呼吸频率、PaCO_(2)及肺组织TNF-α、IL-8、NLRP3、IL-1β、CXCL1 mRNA和蛋白表达呈剂量依赖性降低,PaO_(2)呈剂量依赖性升高(P <0.05);大黄素高剂量组比较,大黄素高剂量+NLRP3激动剂组肺组织损伤明显加重,炎性细胞浸润增加,呼吸频率、PaCO_(2)及肺组织TNF-α、IL-8、NLRP3、IL-1β、CXCL1 mRNA和蛋白表达显著升高,PaO_(2)显著降低(P <0.05)。结论 大黄素可能通过抑制NLRP3/IL-1β/CXCL1信号通路,改善急性呼吸衰竭大鼠血气指标、炎症反应和肺损伤,发挥对肺的保护作用。

输注异基因耐受性DC产生的外囊泡体引发输血相关急性肺损伤风险的研究

目的探讨利用耐受性的树突状细胞(dendritic cell,DC)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)干预感染后输血相关急性肺损伤(transfusion-related acute lung injury,TRALI)策略的风险。方法体外诱导小鼠骨髓来源的DC细胞用雷帕霉素处理诱导成耐受性DC,收集其培养上清,通过梯度离心法收获EVs。利用LPS和抗H2Kd抗体诱导Balb/c小鼠为TRALI疾病模型,并尝试用同基因的雷帕霉素-DC或者异基因的雷帕霉素-DC分泌的EV对TRALI小鼠进行干预,观察并记录发病小鼠的一系列数据。结果与TRALI发病组相比,使用雷帕霉素处理后的同基因耐受性DC对TRALI发病小鼠进行干预后,小鼠的死亡率显著下降。当用异基因耐受性DC(雷帕霉素处理后)产生的EVs进行干预组的肺湿/干比率、胸腔积液和体温与仅用LPS和H2Kd抗体处理组小鼠没有显著性差异。来源于耐受性细胞异基因EVs与LPS联合后不诱发小鼠的TRALI,但是EVs干预后的死亡率与注射浓度呈正相关。结论雷帕霉素处理后的同基因DC对感染后TRALI具有保护作用,并且该耐受细胞的异基因细胞外囊泡联合LPS后本身并不引起呼吸窘迫现象,当这种异基因外囊泡体输注联合抗白细胞抗体时,却加重了TRALI的死亡风险。本研究数据提示,异基因外囊泡体的应用与输血同时进行时,也许可能会加重TRALI死亡风险。

沉默cFLIP在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用机制研究

目的探讨沉默细胞型Fas相关死亡区域蛋白样白介素-1β转换酶抑制蛋白(cFLIP)对重症急性胰腺炎(SAP)导致的肺损伤的影响及其可能的作用机制。方法分别取12只SD大鼠,随机分为对照组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA1组、cFLIPL(或cFLIPS)siRNA2组和cFLIPL(或cFLIPS)siRNA3组,筛选抑制率最高的cFLIPL siRNA和cFLIPS siRNA。50只SD大鼠随机分成假手术组、模型对照组、cFLIP siRNA-NC组、cFLIPS siRNA组、cFLIPL siRNA组,每组各10只。通过胰胆管内逆行注射3%牛磺胆酸钠溶液建立SAP模型,建模成功后,cFLIPS siRNA、cFLIPL siRNA和cFLIP siRNA-NC组大鼠尾静脉注射对应siRNA溶液,其余组注射等量0.9%NaCl溶液。HE染色检测肺组织病理学变化;ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α含量;全自动分析仪检测静脉血白细胞数、中性粒细胞数;流式细胞术检测中性粒细胞凋亡;Western blotting检测中性粒细胞RIP1和caspase-8蛋白表达。结果cFLIPL siRNA2组以及cFLIPS siRNA1组干扰效率最明显,因此选择这2组进行后续实验(后续称为cFLIPL siRNA组和cFLIPL siRNA组)。与模型对照组大鼠相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组大鼠肺泡结构损伤减轻,肺泡壁变薄,炎症细胞浸润减少;与模型对照组相比,cFLIPL siRNA组和cFLIPS siRNA组IL-6、IL-1β和TNF-α含量均明显降低,静脉血白细胞数、中性粒细胞数明显降低,中性粒细胞凋亡率明显升高,cFLIPL、cFLIPS和RIP1蛋白表达量明显降低,caspase-8蛋白表达量明显升高;以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究结果表明,靶向沉默cFLIP可能通过上调caspase-8和抑制RIP1的表达,促进中性粒细胞凋亡,减少炎症介质IL-6、IL-1β和TNF-α释放,抑制肺组织中的中性粒细胞浸润,缓解SAP导致的肺损伤,在SAP中发挥保护作用。

人参皂苷Rg1对重症急性胰腺炎模型大鼠肺损伤的治疗作用及其机制

目的探讨人参皂苷Rg1对重症急性胰腺炎(SAP)模型大鼠肺损伤的治疗作用及其可能的分子机制。方法SD大鼠75只,分为假手术组、模型对照组、乌司他丁组和人参皂苷Rg1低、高剂量组(10、40 mg·kg-1),每组15只。采用ELISA法检测大鼠血清脂肪酶活性和BALF炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的水平;全自动生化分析仪检测血清淀粉酶活性;HE染色观察大鼠胰腺及左肺组织病理学改变;取右肺组织测肺组织W/D比;全自动血气分析检测仪检测动脉OI;qRT-PCR和Western blot法检测肺组织中炎症小体NLRP3、caspase-1、ASC的mRNA和蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型对照组血清脂肪酶和淀粉酶活性、胰腺组织和肺组织病理学评分,BALF中炎症细胞因子IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的水平、肺组织W/D值、动脉血中OI值以及肺组织中炎症小体NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,人参皂苷Rg1高剂量组和乌司他丁组的上述检测指标水平均明显下降(P<0.05),人参皂苷Rg1低剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制炎症小体NLRP3的激活,降低肺组织炎症因子水平,有效地减轻急性胰腺炎大鼠肺损伤。

急性肺损伤大鼠模型评价

目的:建立脂多糖(LPS)和海水淹溺(SW)两种诱因所致急性肺损伤大鼠模型,在造模后不同时间点观察肺组织的病理改变,检测血清及支气管肺泡灌洗液中炎症因子浓度、支气管肺泡灌洗液中总蛋白浓度以及肺组织湿重/干重比。方法:将28只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组(Control组)4只、脂多糖组(LPS组)12只和海水淹溺组(SW组)12只,大鼠气管内分别注入LPS溶液和海水建立急性肺损伤模型。造模后6 h、12 h、24 h LPS组和SW组各取4只大鼠,麻醉后取静脉血、支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织,Control组4只大鼠一次性进行相同实验。采用ELISA法测定血清及BALF中IL-1、IL-6、TNF-α浓度,BALF中总蛋白含量。取左肺下叶计算肺湿重/干重比,左肺上叶行病理切片HE染色,观察肺组织病理学改变。结果:造模后24 h内LPS及SW组大鼠肺组织均出现中性粒细胞聚集及肺损伤病理学改变。造模后6 h、12 h、24 h LPS组和SW组血清IL-1浓度高于Control组,造模后6 h LPS组血清IL-6及TNF-α浓度高于Control组,SW组IL-6浓度高于Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后6 h、12 h、24 h LPS组和SW组BALF中TNF-α和IL-6浓度高于Control组,造模后12 h、24 h LPS组BALF中IL-1浓度高于Control组,造模后24 h SW组BALF中IL-1浓度高于Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。造模后6 h、12 h、24 h 3组肺泡灌洗液中总蛋白含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。造模后6 h、12 h、24 h LPS与SW组肺组织湿重/干重比大于Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。LPS与SW组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但若同时考虑血浆和肺泡灌洗液中3种促炎因子的表达情况,LPS组和SW组与Control组相比出现统计学差异的时间分别是12 h和24 h。结论:脂多糖及海水淹溺均可诱导大鼠发生急性肺损伤,但其炎症因子升高的时间点各有不同,LPS诱导的ALI比SW诱导的ALI炎症反应发生的更迅速。

老年鼠急性肺损伤模型的建立

目的 复制老年鼠急性肺损伤 (AL I)模型 ,为进一步探讨其发病机制奠定基础。 方法 将 2 10只 2 4月龄Wistar大鼠随机分为油酸 +脂多糖组 (O+L PS组 )、油酸组 (O组 )、脂多糖组 (L PS组 )。 O+L PS组注射油酸 0 .175 ml/kg,8h后再注射脂多糖 2 .5 mg/ kg。 O组和 L PS组分别注射油酸 0 .175 ml/ kg和脂多糖 2 .5 mg/ kg。注射后持续 1.5 L /min给氧 4 h(伤后 lh组除外 )。观测伤前及伤后 1、6、12、2 4、72、12 0 h的动脉血气变化、肺组织病理改变、全身炎症反应发生率、AL I发生率及死亡率。结果 O+L PS组 Pa O2 低于 O组和 L PS组 (P<0 .0 1) ,O+L PS组肺组织病理学评分高于O组和 L PS组 (P<0 .0 1)。 O+L PS组的 SIRS发生率、AL I发生率、死亡率分别为 6 4 .9%、5 9.4 %、38.3% ,均高于 O组和 L PS组 (P<0 .0 1)。结论 本模型较好地模拟了肺脏损伤后继发感染发展为 AL I的过程 ,是用于老年 AL I发病机制研究较好的动物模型。

不同时点急性肾缺血再灌注损伤大鼠模型的构建与评价

目的:通过构建大鼠急性肾缺血再灌注损伤(IRI)模型,评价不同时点急性肾IRI大鼠的肾损伤程度。方法:将30只SPF级SD大鼠随机分成6组,每组5只,适应性饲养1周后,以2%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉,以背侧入径夹闭双侧肾蒂的方式构建急性肾IRI模型,不同的分组按照不同的缺血时间(0、5、15、30、45和60 min)进行处理,再灌注24 h后,腹主动脉采血2 mL用于检测肾功能(血尿素氮、血清肌酐和胱抑素C),取出肾脏,观察肾脏组织病理形态学、肾小管上皮细胞超微结构及细胞凋亡水平变化。结果:随着肾缺血时间延长,急性肾IRI模型大鼠肾功能进行性减退(P<0.05),肾组织病理损伤愈加严重(P<0.05),肾小管上皮细胞超微结构凋亡指数和细胞凋亡率显著升高(P<0.05),而大鼠肾缺血60 min再灌注的肾损伤程度最严重。结论:大鼠肾脏控制缺血时间45 min再灌注时间24 h时构建的急性肾IRI模型较为合适。

射干止咳胶囊对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的实验研究

目的探讨射干止咳胶囊对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠的影响。方法选择70只大鼠,按体质量随机分为7组,即空白组、模型组、射干止咳胶囊低、中、高剂量组(30.00 mg、60.00 mg、120.00 mg提取物/kg)、中阳及西阳组,每组10只,连续给药7 d,实验第5天灌胃给药后1 h,除空白组外,将其他各组大鼠气管内滴注LPS(5 mg/kg)制作ALI大鼠模型,空白对照组滴注相同剂量0.9%氯化钠溶液。造模48 h后大鼠腹主动脉采血测定血清中IL-1β、TNF-α含量。取全肺,称重计算肺指数,取大鼠左肺组织测肺湿/干质量比,取右肺中叶组织进行病理观察。结果与模型对照组比较,射干止咳胶囊低、中、高剂量组(30.00 mg、60.00 mg、120.00 mg提取物/kg)IL-1β、TNF-α含量明显减少,差异有统计学意义(P<0.01);与模型对照组比较,射干止咳胶囊高剂量组大鼠肺指数、大鼠肺湿/干质量比明显减少,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);与空白对照组比较,模型对照组大鼠肺泡间隔增宽、肺泡腔内渗出、肺泡损伤破坏程度明显增加,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论射干止咳胶囊对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与减轻肺水肿及抑制炎性因子合成释放有关。