老鼠簕来源内生真菌Diaporthe pseudomagiferae的聚酮类化合物分离鉴定及体外抗氧化、抗炎活性研究

目的:研究老鼠簕来源的内生真菌Diaporthe pseudomagiferae中聚酮类化合物分离纯化及其抗氧化、抗炎活性。方法:利用正相硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱等色谱技术进行分离纯化,结合高分辨质谱、核磁共振波谱技术等综合谱学技术对化合物进行结构解析,对部分化合物进行抗炎活性评价和抗氧化活性筛选。结果:从Diaporthe pseudomagiferae大米发酵产物中分离鉴定得到7个聚酮类化合物,分别为:[(8-methyl-9-oxabicyclo [4.2.1] nona-2,4-dien-7-yl)-(5-oxo-2H-furan-2-yl)methyl] acetate(1)、2,3-Dihydromycoepoxydiene(2)、Dothiorelone A(3)、Dothiorelone B(4)、Cytosporone B(5)、5,6-dihydroxy-2,3,6-trimethylcyclohex-2-enone(6)、3-(4-Methylphenoxy)propanoic acid(7)。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除实验结果显示,化合物1~5均未表现出抗氧化活性。酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,化合物1~5对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞释放的炎症因子白细胞介素-6(IL-6)有一定的抑制作用。结论:化合物1、3、4和6首次从老鼠簕内生真菌Diaporthe pseudomagiferae中分离得到,化合物1~5具有一定的抗炎活性,为进一步探索相关活性物质的抗炎机制奠定基础。

广西小花老鼠簕可培养细菌多样性及促生、防病、产酶活性分析

【目的】分析广西小花老鼠簕可培养细菌多样性及促生、防病、产酶活性,为小花老鼠簕种群恢复及筛选可利用菌种资源提供参考依据。【方法】采用稀释涂布法对小花老鼠簕根、茎、叶及根际土壤可培养细菌进行分离、纯化;对菌株的16S rRNA序列进行PCR扩增,测序结果经EzBioCloud比对确定菌株的分类地位;通过功能培养基对菌株的促生[溶磷、固氮、产吲哚乙酸(IAA)和分泌铁载体]、防病(香蕉枯萎病)及产酶(蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶)活性进行分析。【结果】从小花老鼠簕根、茎、叶及根际土壤共筛选获得细菌159株,根据菌落形态及16S rRNA测序结果排除重复后为65株,隶属于8目7科14属,其中芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌属,占分离菌株的64.62%,同时发现1株潜在新种(Gxun-T66),与已发现菌株相似性仅为98.49%;植物促生防病活性结果显示,溶磷菌株34株、固氮菌株31株、产IAA菌株20株、分泌铁载体菌株17株,其中北澳伯克霍尔德氏菌(Burkholderia territorii)Gxun-T33的溶磷和分泌铁载体能力最强;29株对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.Cubense)有明显抑制作用,其中暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis)Gxun-T25的抑菌效果最好,抑菌率达69.67%;产酶活性结果显示,产蛋白酶菌株56株,产淀粉酶49株,产纤维素酶48株,同时产3种酶活性的菌株有34株,占分离菌株的52.31%。【结论】红树植物小花老鼠簕富含微生物资源且具备促生、防病及产酶活性,同时发现1株潜在新种。

红树老鼠簕内生真菌Aspergillus terreus GXIMD 03158次级代谢产物研究

文章对红树老鼠簕(Acanthus ilicifolius L.)内生真菌Aspergillus terreus GXIMD 03158的抑菌活性次级代谢产物进行研究。采用多种色谱技术对该菌次级代谢产物进行分离纯化,结合核磁氢谱、碳谱和高分辨率质谱数据综合解析鉴定单体化合物结构。从A.terreus GXIMD 03158代谢产物中共分离出10个化合物,经鉴定分别为dankasterones A(1),(14α,22E)-14-hydroxyergosta-4,7,22-triene-3,6-dione(2),steresterone B(3),ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one(4),herbarulide(5),demethylincisterol A3(6),isochaetochromin B1(7),isochaetochromin B2(8),(E)-7,9-二烯-11-羰基硬脂酸(9)和aspergilfuranone A(10)。并采用微量肉汤稀释法检测所有化合物对白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC),结果显示化合物6对S.albus、S.aureus和S.epidermidis的MIC分别为3.12、6.25和3.12μg·mL^(−1);化合物9对S.albus和S.aureus的MIC分别为1.56和3.12μg·mL^(−1)。

基于高通量测序和纯培养技术解析海南东寨港红树植物老鼠簕根际放线菌多样性及其潜在的功能

根际是土壤-植物根系-微生物进行物质交换的活跃地带。根际放线菌是根系放线菌的重要组成部分,是生物活性物质的主要来源之一。本研究从海南东寨港红树林自然保护区采集了5份红树植物老鼠簕根际土壤样品,采用高通量测序和传统纯培养相结合的策略探究样品中根际放线菌的多样性和产生生物活性物质的潜力。利用Illumina Novaseq6000测序平台对老鼠簕根际样品细菌的16SrRNA基因的V3~V4区域进行测序与分析,结果显示:(1)老鼠簕根际细菌共注释到32个门(包括25个有效鉴定的门),其中优势门是变形菌门;α多样性分析表明老鼠簕根际细菌群落多样性非常丰富;(2)对放线菌门的微生物群落进行分析,注释到33个有效鉴定的属、4个暂定的属和28个未培养的新放线菌属,KEGG功能预测分析显示老鼠簕根际放线菌主要参与次级代谢产物的生物合成。同时,利用传统纯培养方法分离放线菌,经形态特征分群和排重,通过PCR扩增、测序并比对16SrRNA基因序列后进行放线菌多样性分析,利用琼脂扩散法筛选抑菌活性,通过基于PCR的基因筛选技术检测代表菌株可能存在的PKS-Ⅰ、PKS-Ⅱ和NRPS抗生素生物合成基因,结果显示:(1)共得到4个属的33株放线菌代表菌株,其中链霉菌属为优势菌属,有2个属未被高通量测序分析结果注释到;(2)代表菌株的NRPS和PKS-Ⅱ基因阳性率很高(90%以上),24.24%根际放线菌具有抗1种及以上指示菌的活性。本研究利用高通量测序和纯培养方法得出东寨港红树植物老鼠簕的根际放线菌多样性非常丰富,并具有较好的合成次生代谢产物的潜力,因此,该研究结果可为具有生物活性化合物的筛选提供丰富的菌种资源,同时也为后续新药的开发提供重要参考依据。

基于多环境因子条件下老鼠簕的生长适应性

【目的】基于前人研究得出的适合老鼠簕生长的环境因子变量,研究老鼠簕在多环境因子交互作用下的生长适应性。【方法】分别模拟在盐度2.5‰、5.0‰、7.5‰,光照强度30%、45%、60%,潮汐时间3、9、15 h的环境条件下对老鼠簕幼苗进行正交设计栽培,揭示不同环境下老鼠簕的生长状况以及土壤理化性质对老鼠簕生长的影响。【结果】1)老鼠簕株高在正交设计下得出的主次顺序为光照强度(%)>淹水时间(h)>盐度(‰)。在环境条件为9 h淹水时间、盐度为5‰和7.5‰、光照强度为45%的情况下最高。2)老鼠簕基径在正交设计下得出的主次顺序为淹水时间(h)>盐度(‰)>光照强度(%)。在环境条件为9 h淹水时间、盐度为7.5‰、光照强度为30%的情况下最粗。3)土壤中氮、磷成分和p H值对老鼠簕的生长影响显著(显著性水平)。【结论】光照是影响老鼠簕株高生长的主要因素,淹水时间次之,淹水时间和光照强度对老鼠簕的基径生长有显著差异,但其仍能在较低光照下正常生长,说明红树植物老鼠簕属于一般耐淹浸、不耐盐以及有较强耐阴性的红树植物,且土壤中氮磷成分和pH值对老鼠簕的生长影响显著。本研究结果可以佐证近年来珠三角区域老鼠簕过度生长的原因有可能是无瓣海桑等高大真红树乔木大量生长所创造出空旷的林缘和林窗环境以及珠三角水域中氮磷含量的增加,进而导致红树林土壤中氮、磷含量上升,加速了老鼠簕的生长。

小花老鼠簕可培养细菌多样性及其生物学活性研究

小花老鼠簕(Acanthus ebracteatus)是一种生长在红树生态系统的珍稀真红树植物,具有较高的药用价值。为研究小花老鼠簕内生及根际可培养细菌多样性,挖掘其潜在新物种及具有特殊生物学活性的菌株,该文利用7种不同培养基,通过传统稀释涂布法对小花老鼠簕各植物组织及根际土壤可培养细菌进行分离,基于16S rRNA基因序列解析其内生及根际细菌群落结构和多样性特征,应用植物病原菌平板对峙实验和平铺捕食活性测试分析其可培养细菌的抗菌活性。结果表明:(1)基于16S rRNA基因序列分析,发现从小花老鼠簕的根、茎、叶、花及根际土壤中分离得到144株可培养细菌,这些细菌隶属于18目26科37属66种,芽孢杆菌属(Bacillus)和链霉菌属(Streptomyces)为优势菌属,分别占细菌种数的15.1%和13.6%;(2)拮抗多种植物病原菌试验结果显示,获得29株具有拮抗植物病原菌活性的细菌,10株具有广谱抑菌活性,其中链霉菌属菌株拮抗作用最强且菌株Y129为潜在新物种。(3)捕食活性测试结果显示,有5株细菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(multi-drug resistance Staphylococcus aureus)及大肠埃希氏菌(Escherichia coli)具有捕食活性,假单胞菌属菌株捕食活性最强,其中菌株Y90为潜在新物种。综上表明,红树植物小花老鼠簕及其根际土壤中蕴含着丰富的细菌种质资源且具有多种生物活性,可作为生防菌和药源菌的来源之一,该研究结果为提高红树植物小花老鼠簕的药效和栽培提供了理论参考。

老鼠簕真菌病病原的分离鉴定及生物学特性

【目的】明确老鼠簕(Acanthus ilicifolius)叶斑病的病原种类及其生物学特性。【方法】从福建省漳江口红树林国家级自然保护区采集病叶,采用离体组织分离法对病叶病原菌进行分离,采用形态学与分子生物学(ITS和EF1-α基因序列分析)的方法鉴定其病原菌种类,并对该病原菌的菌丝在不同温度、pH、碳源和氮源等条件下的生物学特性进行研究,以及对过氧化氢酶(CAT),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、漆酶、纤维素酶(CL)、β-葡萄糖苷酶(β-GC)进行活性检测。【结果】经鉴定该病原菌为真菌界子囊菌门镰刀菌科的轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides)。这是轮枝镰刀菌侵染老鼠簕引发叶斑病的首次报道。生物学特性研究显示该病原菌生长的最适温度25℃,最适pH为10,最佳碳源为淀粉,最佳氮源为酵母粉。3种氧化还原酶中,过氧化物酶(POD)活性最高;3种水解酶中,纤维素酶(CL)活性最高。【结论】分离鉴定了福建省漳江口老鼠簕叶斑病病原菌为轮枝镰刀菌(Fusarium verticillioides),明确了病原菌的生物学特性。

覆盖无纺布对老鼠簕再萌发和木榄、桐花树生长的影响

为控制无瓣海桑纯林林下老鼠簕疯长蔓延问题,对林地覆盖无纺布占林地面积50%、30%和0%的试验表明:覆盖无纺布能够持续控制老鼠簕再萌发;覆盖无纺布占林地面积为50%时木榄和桐花树的生长最好,覆盖无纺布占林地面积为30%的次之,覆盖无纺布占林地面积为0的最差;无纺布是环保材料,不会产生次生污染,可供生产参照应用。

泉州湾桐花树和老鼠簕根际土壤细菌和真菌群落特征比较

红树植物根际土壤微生物对近海生物地球化学循环及其生物多样性等起着重要作用,受地上部和土壤性质影响,两种不同药用红树植物桐花树(Aegiceras corniculatum)和老鼠簕(Acanthus ilicifolius)根际土壤微生物群落组成可能存在独特性。本研究分别以细菌16S rRNA基因和真菌ITS基因为分子标记,采用高通量测序技术分析比较了桐花树和老鼠簕根际土壤微生物多样性特征及其与土壤理化性质之间的关系。结果表明:①老鼠簕根际土壤细菌和真菌多样性与丰富度均显著高于桐花树,且两者之间的细菌和真菌组成皆存在明显差异(P<0.05);②两者根际土壤细菌和真菌门和属的优势(大于1%)物种组成皆相似;在门水平,桐花树根际土壤主要优势物种变形菌门(Proteobacteria)和未分类门(unclassified_k_Fungi)的相对丰度显著高于老鼠簕,而拟杆菌门(Bacteroidota)、脱硫杆菌门(Desulfobacterota)、子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)则相反;在属水平,桐花树的主要优势物种硝化螺菌属(Nitrospira)和Denitromonas属的相对丰度显著高于老鼠簕,而枝孢菌属(Cladosporium)和囊状担子菌属(Cystofilobasidium)则相反;③桐花树根际土壤pH、总碳和总酚含量皆显著高于老鼠簕,pH和总酚显著影响细菌群落组成,而总碳和总硫则显著影响真菌群落组成;此外,pH、总碳和总氮是影响细菌物种的主要因素,而总酚、pH和总碳是影响真菌物种的主要因素。本研究揭示了桐花树和老鼠簕根际土壤细菌和真菌多样性存在明显差异并与土壤理化性质密切相关,可为今后从不同红树物种所具备的独特功能根际微生物菌群来开发相关资源及保护近海的生态环境提供新的视角。

老鼠簕内生真菌及其次生代谢产物研究进展

老鼠簕是一种药用红树植物,具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和保肝等药理作用,然而其资源匮乏,发展与应用受到限制。已有研究表明,内生真菌可与宿主植物产生相似或相同的次生代谢产物,利用其次生代谢产物发现药理活性分子或先导化合物是解决药用植物资源匮乏问题的重要举措之一。本文系统地总结了过去20年老鼠簕内生真菌的国内外研究文献,从内生真菌分类及其次级代谢产物的化学成分与药理活性方面进行综述,旨在为老鼠簕内生真菌进一步开发和利用提供参考。

药用红树植物小花老鼠簕繁育研究

为实现小花老鼠簕种群恢复和药用资源开发,对小花老鼠簕繁育方法进行了研究。以小花老鼠簕成熟无病虫害叶片为水培材料,以霍格兰营养液为水培基质,以IAA和NAA的浓度梯度及浸泡时间为试验因素,设计三因素四水平正交试验,经比较诱导生根率、根系形态建成及根系活力探究最优水培条件。比较叶片水培苗和种子土培苗药用成分(生物碱)差异,评价叶片水培效果。结果表明,小花老鼠簕叶片水培易生根。水培液最优激素浓度和处理时间为:1 mg/L IAA+1.5 mg/L NAA+24 h,生根率达80%,成活率为73.3%。小花老鼠簕水培苗和土培苗生物碱成分无明显差异。通过水培进行小花老鼠簕药用资源的综合利用是经济有效的方式。

海洋老鼠簕化学成分及药理作用研究进展

为响应我国越来越严格的“减抗限抗”新环境和新政策,寻找绿色、无残留兽药新前体,已成为当前研究的重点。海洋老鼠簕(Acanthus ilicifolius L.Sp.)属于爵床科老鼠簕属多年生草本植物,生长在高温、高辐射、高盐碱的海岸带的红树植物,蕴藏着极为独特的天然活性化合物,包括生物碱、黄酮、三萜及三萜皂苷、苯乙醇、甾醇和多糖类等,具有清热解毒,散瘀化痰之功效,主治哮喘、咳嗽、痰壅以及肝纤维化。本文就老鼠簕主要化学成分和药理作用的研究进行综述,为我国海洋老鼠簕进一步开发与利用提供借鉴。

红树植物老鼠簕扦插生长影响因子研究

为优化红树植物老鼠簕的扦插繁殖技术,培育优质种苗,建立老鼠簕育苗技术体系,为红树林群落恢复和保护提供理论基础。以老鼠簕当年生半木质化茎段为插条,通过正交试验设计采用3因素4水平,研究基质、外源激素和激素浓度对老鼠簕扦插生根率等8个生长指标的影响。结果表明:基质对老鼠簕扦插生长指标有显著影响,外源激素和激素浓度无显著影响;不同处理间生长指标差异极显著。基质泥炭土比河沙更适合老鼠簕扦插的生长。老鼠簕扦插的最优处理为基质为泥炭土+珍珠岩(3∶1),激素种类和浓度为ABT 200 mg·L^(-1)。

药用红树植物老鼠簕(Acanthus ilici folius)乙醇提取物的化学成分研究

目的探讨老鼠簕的化学成分。方法将老鼠簕全株粉碎后,用95%乙醇浸提3次,合并浓缩,浸膏的石油醚部位经反复硅胶柱层析分离,结合波谱学数据鉴定化合物结构。结果从石油醚部位分离得到8个化合物,分别为β-谷甾醇(Ⅰ)、豆甾醇(Ⅱ)、正十六烷酸(Ⅲ)、正二十八烷酸(Ⅳ)、4,22-二烯-3-酮豆甾烷(stig-masta-4,22-dien-3-one)(Ⅴ)、4-烯-3-酮豆甾烷(stigmast-4-en-3-one)(Ⅵ)、5,22-二烯-7-酮-3β-羟基豆甾烷(3β-hydroxystigmasta-5,22-dien-7-one)(Ⅶ)、2-唑啉酮(2-benzoxazolinone)(Ⅷ)。结论其中Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ为首次从该植物中分离得到。

老鼠簕植物内生真菌Aspergillus terreus (W-8)抗肿瘤活性成分的研究

对红树林植物的枝干、枝叶样品进行微生物分离,以P388细胞为模型进行活性评价得到14株具有抗肿瘤活性的真菌。采用溶剂萃取、柱色谱及半制备HPLC等分离手段对来源于红树林植物老鼠簕Acanthus ilicifolius Linn.的菌株Aspergillus terreus(W-8)发酵产物进行了活性追踪分离,共得到5个化合物。通过理化性质及波谱技术,结合文献,鉴定其结构分别为aspulvinone H1(1)、aspulvinone H(2)b、utyrolactone I(3)t、errein(4)和3-propylbenzene-1,2-diol(5),其中化合物1的核磁数据为首次报道。采用MTT法初步评价了单体化合物的抗肿瘤活性,结果表明化合物4、5对A549、K562和Hela细胞均具有中等强度的细胞毒活性。

盐度对药用红树植物老鼠簕种子萌发和幼苗生长的影响

利用不同的盐度(0、5、15、25)培养老鼠簕(Acanthus ilicifolius)种子,测定了老鼠簕种子的萌发、幼苗株高、生物量以及过氧化物酶、脯氨酸含量和根系活力等生理生化指标.结果表明,提高盐度会推迟老鼠簕种子的萌根及萌苗时间,并使萌根率与萌苗率降低,幼苗根系活力下降.在盐度较高的处理中(15、25),幼苗生物量明显下降,根冠比增加.植物体内脯氨酸含量与盐度呈正相关,但随盐度升高增幅逐渐减小.过氧化物酶活性则呈现低盐促进、高盐抑制的规律,在盐度5时活性最高.表明老鼠簕种子萌发及幼苗生长能适应较低盐度环境,但盐度较高时将受到抑制.

老鼠簕对大鼠中毒性肝纤维化的影响

目的:观察老鼠簕治疗中毒性肝纤维化的效果,初步探讨其作用机制。方法:四氯化碳(CCl4)皮下注射制作大鼠中毒性肝纤维化模型,在病理检查证明造模大鼠肝组织出现肝纤维化后,分为模型对照组、秋水仙碱对照组和老鼠簕高剂量(2g/kg)、低剂量(1g/kg)组。连续给药4周后,检测血清ALT、AST、TP、ALB、HA、LN、MDA、SOD水平,肝组织行HE染色,光镜下观察病理学改变,并行肝纤维化的病理学评分。结果:与模型对照组比较,老鼠簕治疗组能明显降低肝纤维化时异常升高的ALT、AST、HA、LN、MDA;提升肝纤维化时异常降低的血清TP、ALB、SOD水平;明显改善CCl4所致大鼠肝纤维化的病理学改变,肝纤维化病理学评分明显降低。结论:老鼠簕具有治疗大鼠中毒性肝纤维化作用,抗脂质过氧化损伤可能是其重要的作用机制。

中国爵床科老鼠簕属一新组合

提出爵床科一新组合―厦门老鼠簕Acanthus illicifolius Linn.var.xiamenensis(R.T.Zhang)Y.F.Deng,N.H.Xia & H.B.Chen。

药用红树植物老鼠簕多糖的抗氧化性研究

比较老鼠簕粗多糖(CAP)、老鼠簕酸性多糖B组分(AAPB)和老鼠簕中性多糖(NAP)的体外抗氧化能力。从采自广东省汕头市澄海区的老鼠簕树枝提取老鼠簕多糖,测定多糖的还原力,及其对DPPH自由基、邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2-.)和Feton体系产生的羟基自由基(.OH)的清除能力。CAP、AAPB和NAP均具有较强的抗氧化性和良好的还原力,AAPB的抗氧化能力远高于中性多糖NAP。层析纯化后的老鼠簕酸性多糖AAPB清除自由基的效果有明显提高,特别是对羟基自由基。0.2 mg/ml AAPB可以除去80.0%的DPPH自由基,对超氧阴离子的抑制率为66.1%;0.5 mg/ml AAPB对羟基自由基的清除率达到48.5%。老鼠簕酸性多糖AAPB是老鼠簕粗多糖CAP中最重要的抗氧化成分。

老鼠簕生物碱A及其衍生物对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用

目的观察老鼠簕生物碱A及其衍生物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用,并探讨其疗效机制。方法用四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)-花生油溶液腹腔注射8周建立大鼠肝纤维化模型,将造模成功的大鼠随机分为5组,分别为模型对照组、阳性对照组(秋水仙碱0.4 mg.kg-1)、HBOA组(100 mg.kg-1)、TC-2组(100 mg.kg-1)、TC-3组(100 mg.kg-1)。用药物干预4周,检测肝纤维化大鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)活性以及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果 HBOA、TC-2、TC-3均能显著降低血清AST的活性(P<0.05),TC-3能降低肝匀浆MDA的含量(P<0.05),同时提高SOD的活性(P<0.05);HBOA可提高SOD活性(P<0.05)。结论HBOA及其衍生物对CCl4致大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其保护机制可能与清除自由基、抗脂质过氧化作用有关。