双缩脲法与考马斯亮蓝法测定母乳总蛋白的应用比较

双缩脲法与考马斯亮蓝法测定母乳总蛋白的应用比较宋景秋王以立（南京鼓楼医院检验科，南京２１０００８）关键词双缩脲考马斯亮蓝消化定氮母乳总蛋白母乳喂养已被广泛认同，其中蛋白质是主要营养成份，因此母乳总蛋白的测定显得非常重要。母乳中乳糖浓度较高，实验发现乳...

福林酚法与考马斯亮蓝法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量的比较

目的:分别建立福林酚法与考马斯亮蓝法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量并做比较。方法:分别对两种方法的检出限、线性范围进行考察,并进行精密度、重复性、回收率和样品含量的测定。结果:福林酚法检出限为0.2μg,蛋白质浓度线性范围为0~112.0μg(r=0.999 0),平均回收率为105.2%(RSD=1.9%),精密度RSD均<1%,样品测定结果分别为47.45,58.34,40.99μg·ml^(-1)。考马斯亮蓝法检出限为0.8μg,蛋白质浓度线性范围0~99.6μg(r=0.998 0),平均回收率为102.0%(RSD=2.7%),精密度RSD均<1%,样品测定结果均为未检出。结论:福林酚法测定甘露聚糖肽口服溶液中蛋白质含量可靠而有效。

三种酶纯化常用试剂对Bradford法的干扰研究

为了研究常用酶纯化试剂对考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量的影响,试验以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白,探索硫酸铵、乙醇和丙酮对该方法的干扰规律和消除这些干扰的方法,然后在丙酮沉淀脂肪酶试验中进行验证。结果表明:硫酸铵对蛋白质含量测定值影响较小,而高浓度的丙酮、乙醇造成测定值偏高数倍;将蛋白质样品稀释5倍可基本消除丙酮、乙醇的干扰。在验证试验中,将上清液稀释5倍,然后测定蛋白质含量,解决了随着丙酮浓度升高,沉淀和上清液蛋白质含量测定值同时增加的问题。说明稀释是解决高浓度乙醇、丙酮对Bradford法干扰的有效方法。

凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白质的含量

目的:建立一种快速、简单、准确测定方格星虫多糖中蛋白质含量的方法。方法:分别采用凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,并进行稳定性、精密度、重复性和回收率测定。结果:凯氏定氮法和考马斯亮蓝法测定方格星虫多糖中蛋白的含量分别为2.40%,2.22%,其回收率分别为98.69%,100.97%,2种方法测得蛋白质含量基本相同,无显著性差异(P>0.05)。结论:综合考虑,凯氏定氮法简便、快速、准确,可用于方格星虫多糖中蛋白质的质量控制。

4种蛋白质分析方法在液态乳中的适用性研究

分别利用凯氏定氮法、三氯乙酸-双缩脲比色法、考马斯亮蓝法和福林-酚法等4种方法,对液态乳中添加尿素、甘氨酸、硝酸铵、亚硝酸钠、水解蛋白、三聚氰胺等非蛋白含氮物后的蛋白质量浓度进行了测定,并与其理论值进行了比较。结果表明:凯氏定氮法和福林-酚法测定的液态乳蛋白质量浓度与其理论值存在显著差异,而考马斯亮蓝法和三氯乙酸-双缩脲比色法则能较好地反映其真实的蛋白含量。考马斯亮蓝法灵敏度高,适合测定蛋白含量较低的样品;而三氯乙酸-双缩脲比色法的测定结果与液态乳中真实蛋白质量浓度更加接近。

类人胶原蛋白3种测定方法的比较

以凯氏定氮法为基准方法,采用考马斯亮蓝法、Folin-酚法、双缩脲法对从重组大肠杆菌发酵产物中提取的类人胶原蛋白含量进行了测定.结果表明,这种类人胶原蛋白和牛血清白蛋白与明胶的特性存在差异,在考马斯亮蓝法、Folin-酚法、双缩脲法3种比色分析方法中,采用双缩脲法得出的类人胶原蛋白与牛血清白蛋白的回归方程系数相差最小,并得出回归方程的校正系数α和β,其中α表示类人胶原蛋白与牛血清白蛋白的特性差异(α=0.676 1),β为类人胶原蛋白样品中蛋白的百分含量(g/g).

N-V蛋白酶含量检测方法的准确度评价

目的:采用多种方法测定N-V蛋白酶含量,并比较实验结果,选择出最适合N-V蛋白酶含量测定的方法。方法:从沙蚕体内提取的N-V蛋白酶,以凯氏定氮法为基准方法,采用考马斯亮蓝法、Lowry法和紫外吸收法测定N-V蛋白酶的含量。结果:考马斯亮蓝法得到N-V蛋白酶含量为(5.150±0.028)g.L-1,紫外吸收法(A280-A260)测得蛋白酶含量为(5.202±0.001)g.L-1,这两种方法均与凯氏定氮法测得的结果(5.164±0.013)g.L-1存在较小差异;Lowry法测得的结果为(1.12±0.014)g.L-1,明显偏低,存在较大差异。结论:凯氏定氮法、考马斯亮蓝法和紫外吸收法(A280-A260)均可测定出N-V蛋白酶含量。但N-V蛋白酶不适合采用Lowry法进行测定。

猴头菌浸膏多糖及蛋白质含量测定方法的比较

为了更好地控制猴头菌浸膏的质量,试验分别采用3,5-二硝基水杨酸法、蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法测定猴头菌浸膏中多糖的含量,分别采用福林酚法和考马斯亮蓝法测定猴头菌浸膏中蛋白质的含量,从中筛选出适合猴头菌浸膏的多糖及蛋白质含量的测定方法。结果表明：用蒽酮-硫酸法测定多糖含量时,结果高于其他两种方法,且稳定性、精密度、加标回收率、重复性的相对标准偏差（RSD）均小于5. 00%;用福林酚法测定蛋白质含量时,结果高于考马斯亮蓝法,且稳定性、精密度、重复性及加标回收率的RSD均小于5. 00%。说明蒽酮-硫酸法操作简便、稳定可行,是最适合测定猴头菌浸膏中多糖含量的方法;福林酚法操作简便、稳定可行,是最适合测定猴头菌浸膏中蛋白质含量的方法。

微柱离心结合双波长考马斯亮蓝法/酶标仪法测定牛血清白蛋白脂质体的包封率

目的:测定牛血清白蛋白(BSA)脂质体的包封率。方法:采用微柱离心结合双波长考马斯亮蓝法/酶标仪法测定,即先用葡聚糖凝胶DEAE-Sephadex A50微柱离心法将游离药物与脂质体进行分离,再筛选样品与染料体积比及反应时间,确定了双波长(595、450nm)考马斯亮蓝法/酶标仪法的测定条件并进行了方法学考察;考察了微柱对空白脂质体的回收率和微柱的分离效率;对BSA脂质体的包封率进行了测定。结果:确定的测定条件为样品与染料体积比为1∶3、反应时间10min,该法平均回收率为99.56%,RSD小于2.73%;微柱对空白脂质体的平均回收率为97.78%,分离效率大于90%;BSA脂质体的平均包封率为32.91%(n=3)。结论:本法实现了游离蛋白质与脂质体快速有效的分离,方法简单易行,与普通凝胶层析柱分离法相比,本法对样品的稀释倍率大大降低,适用于测定痕量大分子蛋白质脂质体的包封率。

不同方法对大鲵不同部位的蛋白质含量测定

采用考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、福林—酚试剂法,对人工养殖大鲵(Andrias davidianus)的前胸、中胸、尾部的背部及腹部肌肉的蛋白质含量进行了测定。结果表明,大鲵肌肉中不同部位的蛋白质含量存在差异,考马斯亮蓝法、紫外分光光度法、福林—酚试剂法均测得大鲵中胸腹部肌肉的蛋白质含量最高,分别为214.58、219.20、251.41 mg/g;在尾腹部最低,分别为88.05、85.71、105.28 mg/g。尽管3种方法含量测定存在差异,但其均显示蛋白质含量在大鲵体中分布为中胸>前胸>尾部。

大米中蛋白质含量测定方法初探

大米蛋白是优质蛋白,然而,当前存在着严重的掺假现象。为降低生产成本,向大米产品中添加非蛋白含氮物质。采用大米蛋白作为研究对象,以尿素等为干扰物,利用Lowry、CBB、凯氏定氮法,研究干扰物对蛋白质含量测定方法的影响。研究发现,三聚氰胺的加入量低于300g/kg时,对测定结果无明显干扰作用,误差基本保持在3%以内;尿素的含量在低于100g/kg时,对测定结果无明显干扰作用,而随着加入量的继续增大,使CBB法和Lowry法的测定数据均有一定程度的下降,其中CBB法表现更为明显;硫酸铵对蛋白质含量的测定的影响最为微弱,添加量超过50g/kg时,蛋白质的测定结果反而呈现下降的趋势。分析表明,相比较凯氏定氮法、CBB法,Lowry法准确度更高,但由于蛋白质所含的氨基酸种类和比例不同,因而适合蛋白质的测定方法也不同,应根据情况选择最优方法,力求达到最佳效果。

凯氏定氮法在蛋白质测定含量标准中的应用

奶粉是以新鲜牛乳为原料,添加一定含量的植物或动物蛋白质、脂肪、维生素、矿物质等元素,经过消毒、浓缩、干燥等多道工序,去除牛乳中含有的大量水分后制成的粉末状物质。奶粉中脱除了水分,这使其中的营养物质得到很好的保存。奶粉中含有丰富的营养物质,基本可以满足婴幼儿在哺乳期的营养需求。近年来,由于人们的工作压力加大,很多婴幼儿都是喂养奶粉,这导致奶粉需求量大大增加。但是,制造奶粉的原料价格高,导致很多不法生产商在制造奶粉时加入可以提高营养物质含量的、价格相对较低的替代物。基于此。

甘草水溶性蛋白质不同测定方法比较研究

本研究采用紫外280 nm光吸收法、紫外238 nm光吸收法、紫外A215与A225光吸收差法、考马斯亮蓝G-250法及双缩脲法分别测定甘草水溶性蛋白质的含量,比较各种测定甘草水溶性蛋白质方法的优缺点.结果显示,考马斯亮蓝G-250法测定结果偏低,而紫外法测定结果数据稳定.

波吉卵囊藻蛋白质提取方法比较及提取条件优化

【目的】探究基于考马斯亮蓝染色法的波吉卵囊藻(Oocystis borgei)蛋白质提取方法,以快速测定波吉卵囊藻的蛋白质含量。【方法】以凯氏定氮法为基准,以考马斯亮蓝法测定经反复冻融法、超声波破碎法和碱提法提取的波吉卵囊藻(鲜品)蛋白含量,比较各提取方法的提取效果;通过单因素和响应面实验,考察碱提法中提取温度、NaOH浓度和提取时间对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响。【结果】碱提法显著优于其他提取方法(P<0.01);碱提法中,各因素对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响显著性由大到小依次为提取温度、NaOH浓度、提取时间;最佳提取条件:提取温度74.5℃、NaOH浓度0.35mol/L、提取时间69min,此时蛋白得率为1.726%,与模型预测值1.731%接近,以凯氏定氮法测定的藻体蛋白质含量为基准,蛋白提取率高达99.20%。【结论】碱提法是波吉卵囊藻(鲜品)蛋白的最佳提取方法,采用响应面法建立的模型可较好地预测提取温度、NaOH浓度和提取时间对波吉卵囊藻蛋白提取率的影响。

口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量测定方法的比较

口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量的测定，可以反映出疫苗生产工艺的优劣以及疫苗质量。采用凯氏定氮法、改良Lowry法和考马斯亮蓝法三种较常见的蛋白质含量测定方法，对全国六个不同口蹄疫灭活疫苗生厂家共计15批疫苗的总蛋白质含量进行测定，并对测定结果进行比较，同时采用SDS—PAGE对样品中蛋白质含量进行定性，验证以上三种方法测定结果。结果表明，这些疫苗的总蛋白质含量差异比较大，1mL水相样中蛋白质含量在50—2000μg范围内。三种检测方法比较表明，改良Lowry法能较真实的反映口蹄疫灭活疫苗中蛋白质含量；与凯氏定氮法相比，此方法操作简单，工作效率高，而且低耗。

慢性肾衰竭大鼠24h尿液总蛋白定量的方法学研究

目的通过5/6肾切除法制备慢性肾衰竭大鼠模型,考察双缩脲法和考马斯亮蓝法进行尿总蛋白定量。方法应用双缩脲法和考马斯亮蓝法同时进行测定,针对后者测定结果偏低的缺陷,采取提高染色液磷酸量,增加质子化程度的方法进行改进。结果同一条件下双缩脲法的测定值比标准值高,改良考马斯亮蓝法的测定值与标准值较接近。结论双缩脲法不适用于检测尿蛋白含量,改良考马斯亮蓝法是检测蛋白含量的理想方法。

低浓度小分子多肽含量测定方法的比较研究

采用考马斯亮蓝法、双缩脲法及紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽含量测定进行比较研究,结果表明,紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽的测定结果较考马斯亮蓝法和双缩脲法均要好。通过紫外分光光度法进行稳定性、精密度、重现性及回收率试验,结果显示,4个验证试验的相对标准偏差均小于5%。通过乙酸、乙醇和Na Cl 3种干扰物试验分析,研究发现:乙酸对还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量测定结果影响较大,其次是乙醇,而Na Cl对还原型GSH含量无影响,表明酸和醇类物质均会影响紫外分光光度计法对低浓度小分子多肽含量测定结果。

蛋白质含量测定方法

蛋白质与生命的起源、存在和进化都密切相关,蛋白质测定涉及到生产和科研的众多领域。本实验用定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝法分别对牛奶、酸奶、豆浆进行蛋白质含量的测定。依此分析比较各种测定蛋白质的方法,总结出各方法的特点及适用条件。