广东省2019—2023年耐万古霉素屎肠球菌检出率升高的时空变迀研究

目的分析近年广东省耐万古霉素屎肠球菌(VR-Efm)临床分离株的时空分布,探寻VR-Efm检出率上升的原因。方法回顾性分析2019—2023年广东省4个区域(珠三角、粤东、粤西、粤北)的38所医疗机构上报至广东省细菌耐药监测系统中VR-Efm检出情况、患者人口学特征及科室和标本分布等资料,同步分析世界卫生组织重点关注的ESKAPE中其他5种细菌的检出情况。结果广东省VR-Efm检出率从2019年1.4%(63/4543)上升至2023年21.3%(1351/6345),呈明显上升趋势,2023年44.7%(17所)的医疗机构VR-Efm检出率>20%;广东省4个区域VR-Efm检出率普遍上升,以珠三角地区为中心向周围辐射增长。ESKAPE整体由2019年10.1%升至2023年10.8%,其余5种病原体中,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌检出率从2019年8.0%上升至2023年15.0%,耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌和耐碳青霉烯类肠杆菌属检出率分别从2019年的61.6%、34.4%、21.2%、7.9%下降至2023年的58.2%、31.9%、21.0%、7.6%,皆有不同程度下降。ICU VR-Efm检出率(12.2%)高于门急诊(9.4%)、内科(9.2%)和外科(7.0%)等非ICU科室(均P<0.05)。VR-Efm检出率较高标本分别为尿(9.8%)、血(9.1%),其余标本检出率介于6.9%~9.6%。青少年患者VR-Efm检出率(4.4%)低于中老年患者(>9.4%,P<0.05)。结论近5年广东省VR-Efm检出率明显上升,可能与社区和医院获得的优势克隆传播有关。有条件的医疗机构应对入院患者开展VR-Efm的筛查,并对检出VR-Efm的患者采取有效防控措施,以遏制VR-Efm检出率在该区域的上升。

耐万古霉素屎肠球菌的流行病学及耐药性分析

目的探讨本中心耐万古霉素屎肠球菌的流行病学及耐药性,为临床合理用药及感控防治提供科学依据。方法回顾性分析中山大学附属第一医院2017年1月—2023年6月临床分离的104株非重复的耐万古霉素屎肠球菌(vancomycin-resisitant Enterococcus faecium,VRE-fm),分析患者的基本资料、标本类型分布及对不同抗生素的耐药率、菌株携带的耐药基因及毒力基因。结果共分离104株非重复的VRE-fm菌株,≥60岁患者占63.4%(66/104);VRE-fm菌株主要分离自尿液54.8%、引流液14.4%和血液7.7%;微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,104株VRE-fm对利奈唑胺全部敏感,替加环素的敏感率为98.1%,对其他抗菌药物敏感性较差;本中心47株VRE-fm菌株进行全基因组测序结果显示,均携带vanA耐药基因,未检出vanB和vanM耐药基因;47株VRE-fm菌株全部携带acm毒力基因,仅有1株VRE-fm菌携带esp毒力基因,其余毒力基因均为阴性。结论目前VRE-fm菌株的耐药性严峻,VRE-fm菌株通常同时携带耐药基因和毒力基因,临床可用于治疗VRE-fm感染的药物非常有限。因此,应当加强对万古霉素等糖肽类抗菌药物的使用管理,努力开发和实施感染控制方法,以有效地防止VRE-fm的进一步发生和蔓延。

乙酰唑胺对万古霉素耐药肠球菌体内外抗菌活性作用和机制

目的探讨乙酰唑胺对万古霉素耐药肠球菌(VRE)体内外抗菌活性作用和可能的作用机制。方法实验菌株为医院临床分离的肠球菌菌株,经鉴定为VRE菌株,分别进行体外和体内抗菌活性研究。采用琼脂平板稀释法测定乙酰唑胺对VRE的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),杀菌曲线实验测定待测菌株的时间杀菌变化曲线,检测胞外碱性磷酸酶(AKP)含量评估对细胞壁的破坏作用,计算相对电导率测定评估细胞膜渗透性。使用临床分离的VRE菌株建立腹膜炎小鼠模型,分为对照组(正常小鼠),模型组(腹膜炎小鼠)和乙酰唑胺组(30 mg/kg/5 h干预),每组10只。干预30 h后统计各组小鼠死亡情况,进行腹膜液、脾脏、肝脏菌落计数,HE染色观察脾脏、肝脏病理改变。结果乙酰唑胺对VRE的抑菌活性检测显示,MIC和MBC分别为1.45 mg/L和4.62 mg/L。Time-Kill曲线分析乙酰唑胺杀菌动力学显示,乙酰唑胺杀菌活性与时间和浓度呈正相关,乙酰唑胺浓度越大,细菌死亡率越高,时间越长,杀死的细菌越多。当乙酰唑胺浓度达到16×MIC,作用时间达到12 h时,VRE细菌生长被完全抑制。干预30 h后,对照组小鼠均存活,存活率100%;模型组小鼠7只陆续死亡,存活率30%;乙酰唑胺组小鼠2只出现死亡,存活率80%,存活率明显高于模型组(P<0.05)。相较于对照组,模型组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显提高(P<0.05);相较于模型组,乙酰唑胺组小鼠腹膜液、肝脏、脾脏菌载量均明显降低(P<0.05)。与对照组比较,1×MIC组和4×MIC组AKP含量显著升高(P<0.05);与1×MIC组比较,4×MIC组AKP含量显著升高(P<0.05),乙酰唑胺对VRE细胞壁的破坏作用呈现剂量依赖。与对照组比较,1×MIC组和4×MIC组电导率显著升高(P<0.05);与1×MIC组比较,4×MIC组相对电导率显著升高(P<0.05),乙酰唑胺对VRE细胞渗透性的提高作用呈剂量依赖。结论乙酰唑胺对VRE具有较好的体内、体外抗菌活性,其作用机制可能与破坏细胞完整性有关。

2012~2017年北京某医院耐万古霉素屎肠球菌临床分布及分子特征变迁分析

目的对我院6年间分离的耐万古霉素屎肠球菌(VREfm)进行临床分布和分子特征变迁分析。方法收集2012年1月至2017年12月从我院住院患者临床标本中分离的168株VREfm,采用多重PCR法检测vanA和vanB基因。采用另一种多重PCR法检测常见5种毒力基因(esp、gelE、asa1、cylA和hyl)。同源性分析采用多位点序列分型(MLST)。结果所有菌株均携带vanA基因,且同时对万古霉素和替考拉宁耐药,基因型和表型均属于高水平耐药。分离自尿液标本的菌株最多(58.9%),其次是肛拭子(16.1%)和血液(15.5%)。esp和hyl的检出率分别为89.2%和27.9%,且hyl在血液来源菌株的检出率显著高于肛拭子(42.3%vs 14.8%,P<0.05)。MLST分型共检出21个ST型,均属于同一个group,其中ST78占绝对优势(50.0%),在医院内广泛传播,其他ST型均处于散发状态,且呈动态变化。与全部168株VREfm相比,ST78型具有较高的esp检出率(97.6%vs 89.2%,P<0.05)和较低的hyl检出率(15.5%vs 27.9%,P<0.05)。hyl基因在ST78、ST571和ST389型菌株的检出率分别为15.5%、0和84.6%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论6年间流行于我院的VREfm呈多克隆模式,既有一个优势克隆型别(ST78),又有许多少量的独特型别(20种其他ST型),提示我院VREfm的传播模式是克隆传播与新克隆涌入共存。进一步对携带vanA基因的质粒进行研究,有助于更清晰地了解菌株的传播模式。

噬菌体裂解酶和抗菌肽协同对抗耐万古霉素粪肠球菌感染

粪肠球菌是机体肠道内广泛存在的一种条件性致病菌,可引起人和动物的心内膜炎、尿路感染、败血症等疾病。粪肠球菌能够在恶劣的环境条件下生存,是引发医院感染的主要病原菌之一。耐药粪肠球菌在全球范围内的传播,特别是耐万古霉素粪肠球菌(VREF)的出现,导致治疗失败和死亡的风险增加,严重威胁公共卫生和人类健康。世界卫生组织(WTO)和美国疾病控制和预防中心(CDC)将VREF列为严重威胁等级病原菌。治疗VREF感染的可选抗生素非常有限,并且侵袭性VREF往往产生生物被膜,加大治疗难度而导致高死亡率。因此,研究和开发对抗侵袭性VREF感染的新策略刻不容缓。

万古霉素耐药肠球菌的同源性及耐药机制分析

目的探讨万古霉素耐药肠球菌(VRE)的同源性及主要耐药机制。方法收集我院临床分离的9株VRE,采用E-test法检测其对万古霉素等10种抗菌药物的最低抑菌浓度值,脉冲场凝胶电泳技术进行同源性分析,多重PCR技术扩增万古霉素耐药基因并测序。结果9株VRE均为屎肠球菌,共分为6个克隆,耐药表型和基因型均为vanA型。结论本院VRE为vanA基因型,VRE的增加与局部克隆传播、耐药基因的水平转移以及抗菌药物的选择压力有关。

耐万古霉素肠球菌感染流行病学多中心研究

目的了解我国综合医院重症监护病房(ICU)耐万古霉素肠球菌(VRE)感染的流行特点,为感染预防和控制提供科学依据。方法以多中心研究的方式,选取全国12个省及直辖市46所医院,按照统一的诊断标准和方法,前瞻性调查2013年10月—2014年9月ICU住院患者VRE感染情况。结果共调查58个ICU住院患者33 443例,检出感染/定植肠球菌936株,VRE36株,VRE检出率3.85%。VRE医院发病的感染(HOI)26例次,VRE HOI发病率0.78‰,VRE HOI日发病率0.09‰。VRE社区发病的感染(COI)9例次,VRE COI发病率0.27‰。VRE感染标本类型主要为尿(占42.86%),感染部位以及HOI部位均以泌尿道为主,分别为45.71%、50.00%。不同类型ICU以呼吸ICU VRE检出率(20.00%)、VRE HOI发病率(8.04‰)和日发病率(0.47‰)最高;不同地区以西南地区VRE检出率(9.74%)、VRE HOI发病率(3.68‰)、日发病率(0.35‰)最高。结论我国VRE检出及感染发病率较低,不同ICU、地区分布不同,应继续加强监测,根据感染特点指导临床抗菌药物使用及防控措施的落实。

利奈唑胺对万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的抗菌活性

目的评价利奈唑胺对临床分离万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的体外抗菌活性。方法多重PCR法鉴定屎肠球菌万古霉素耐药基因类型，平皿二倍稀释法测定利奈唑胺等11种抗菌药物MIC值。结果75株临床分离万古霉索耐药屎肠球菌均携带vanA基因。万古霉素敏感及耐药屎肠球菌对利奈唑胺均敏感，MIC范围1-2mg／L。与红霉素、氨苄西林、左氧氟沙星和利福平相比，万古霉素敏感及耐药屎肠球菌的耐药率均在80％以上。万古霉素敏感屎肠球菌对高浓度庆大霉素、高浓度链霉素、四环素和氯霉素的耐药率分别为80．2％、13．9％、38．6％和37．6％；万古霉素耐药屎肠球菌对上述4种药物的耐药率分别为64．5％、8．0％、18．5％和5．3％。结论利奈唑胺对我国临床分离万古霉素敏感和耐药屎肠球菌均具有很好的体外抗菌活性。

耐万古霉素肠球菌表型测定及基因分型

目的对耐万古霉素肠球菌(VRE)的确证试验,同时对VRE进行基因分型。方法采用浓度梯度法及含6μg/ml万古霉素的脑心浸液琼脂平板上点种,确证6株VRE,聚合酶链反应检测vanA、vanB、vanC,并对1株vanB的屎肠球菌进行测序,聚合酶链反应检测ermB、qacE△1-sul1基因。结果160株肠球菌属用微量肉汤稀释法粗筛出17株最低抑菌浓度(MIC)≥4 mg/L的肠球菌属,用浓度梯度法只有6株MIC≥4 mg/L的肠球菌属,并在含6μg/ml万古霉素的脑心浸液琼脂平板上都有不同程度的生长;17株肠球菌属对红霉素ermB耐药基因检测,有10株含有ermB基因;未检测到qacE△1-sul1基因。结论VRE确认试验以及准确检测其MIC值是筛查VRE的可靠方法,对VRE的基因分型,为VRE的进一步研究及流行病学分析提供有价值的信息。

黄连和五倍子对耐万古霉素肠球菌的体外抗菌活性

目的检测中药黄连和五倍子对耐万古霉素肠球菌(VRE)的体外抗菌活性。方法用新的中药抗菌实验方法进行五倍子、黄连对20株VRE的体外抗菌活性检测。结果与结论黄连和五倍子对VRE的抑菌作用均较好,其中黄连的MIC90为0.644,五倍子的MIC90为0.105。

耐万古霉素肠球菌表型检测及基因分型

目的 研究对万古霉素耐药或中介的肠球菌株的表型和基因型 ,以了解本院耐万古霉素肠球菌 (VRE)的流行状况 ,指导临床合理用药。方法 收集 2 0 0株临床分离的肠球菌株 ,用琼脂筛选法筛选VRE ,并分别用Etest和多重PCR检测和分析对万古霉素耐药或中介肠球菌株的表型和基因型。结果 共检出 10株对万古霉素耐药或中介的肠球菌株 ,其中 5株为天然耐万古霉素肠球菌。基因型分析的结果为 1株vanA型 ,4株vanC1型 ,3株vanC2型 ,2株基因型不明。结论 已发现 5株VRE(1株VANA型 ) ,提示临床上须合理使用抗生素 ,以防止VRE等多重耐药细菌的爆发流行。

万古霉素耐药肠球菌基因及水平转移研究

目的研究我国临床分离万古霉素耐药肠球菌中万古霉素耐药基因及其水平转移情况。方法用多重PCR法检测vanA、vanB及粪肠球菌和屎肠球菌特异的ddl基因；用质粒酶切图谱分析耐药菌同源性，用液体转移和滤膜转移法研究万古霉素耐药基因水平转移情况。结果在12株万古霉素耐药肠球菌中，有11株VanA型屎肠球菌vanA基因阳性，有1株VanB型粪肠球菌vanB基因阳性。ZB18和ZB22菌株的万古霉素耐药性可在液体环境中于肠球菌间转移，转移频率分别为3．1×10^-4和1．9×10^-5。在其余屎肠球菌中，万古霉素耐药性可通过滤膜转移试验在肠球菌间水平转移，转移频率为1．4×10^-3～1．6×10^-6；有1株VanB型粪肠球菌的万古霉素耐药性在肠球菌间不能水平转移。结论VanA型万古霉素耐药肠球菌中均为屎肠球菌，其万古霉素耐药基因可在肠球菌间水平转移。

猪源万古霉素耐药肠球菌分离及表型和基因型检测

本研究旨在调查3个猪场不同猪群粪便中万古霉素耐药肠球菌(VRE)的分离率并进行耐药表型、基因型的测定,为万古霉素耐药肠球菌的流行病学提供基础数据。根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的方法进行耐药表型的测定,采用PCR法鉴定肠球菌并进行耐药基因的扩增,比较表型与基因型的一致性。结果从3个猪场250个粪便样本共分离出30株VRE。不同猪场不同猪群的分离率以哺乳仔猪最高,其次为保育仔猪、怀孕母猪和哺乳母猪,以大猪和公猪的分离率最低。耐万古霉素肠球菌均以土霉素的耐药率最高,为93.3%;以氨苄西林的敏感率最高,为80%。耐药基因检测2株为VanA阳性,12株为VanB阳性,7株为VanC1阳性,5株为VanC2/3阳性,4株未扩增出Van基因。本研究显示3个猪场均能分离到耐万古霉素肠球菌,各猪群耐药菌分离率与猪群接触抗菌药物的程度有一定的相关性,分离的VRE对6种抗生素具有不同程度的耐药,耐药表型与基因型基本一致。

耐万古霉素肠球菌医院感染危险因素分析

目的探讨耐万古霉素肠球菌(VRE)产生并发生VRE医院感染的危险因素,及发生VRE医院感染后采取的有效隔离预防措施。方法采用病例对照研究方法,收集2003年7月-2005年12月发生的VRE引起的医院感染21例,并随机选择同时期敏感肠球菌属医院感染28例作为对照,采用单因素(t检验,χ2检验)及多因素Logistic回归进行分析,对所有发生VRE医院感染的病例实施严密的隔离措施。结果单因素分析发现,高龄、住ICU、侵入性操作、高APACHEⅡ评分、住院时间长(>30 d)、合并≥2种细菌的混合性感染及分离出VRE前接受氟喹诺酮抗菌药物、万古霉素/去甲万古霉素治疗8种因素与VRE感染有关。结论侵入性操作及使用万古霉素/去甲万古霉素是VRE感染的危险因素,严格的隔离措施可以有效控制VRE的蔓延。

耐万古霉素肠球菌血流感染的危险因素分析

目的了解分析四川大学华西医院耐万古霉素肠球菌(VRE)血流感染菌株、科室分布及感染的危险因素,为防治VRE引起的血流感染提供参考。方法采用病例对照研究方法,选择2010年8月—2014年8月该院住院的31例VRE引起的血流感染患者作为研究组(VRE组),另选择同期同区域54例万古霉素敏感肠球菌(VSE)引起的血流感染作为对照组(VSE组)。采用SPSS 19.0分析软件进行单因素(t检验,χ2检验)及多因素Logistic回归分析。结果 31例VRE血流感染患者,其中由万古霉素耐药粪肠球菌(VREfa)引起的5例(16.1%),万古霉素耐药屎肠球菌(VREfm)引起的26例(83.9%);4年中VREfa和VREfm血流感染占粪肠球菌和屎肠球菌血流感染的比率分别为1.5%、1.6%、1.8%、1.2%和3.8%、4.4%,5.8%、7.1%;科室分布以重症监护病房(ICU)和神经外科为主,分别占41.9%和12.9%;VRE对氨苄西林、红霉素的耐药率超过90%,对奎奴普丁-达福普汀和利奈唑胺的耐药率低于20%。单因素分析发现:住院时间、入住ICU、静脉置管、碳青霉烯类暴露、万古霉素/去甲万古霉素暴露与VRE血流感染相关。Logistic回归分析发现静脉置管是VRE血流感染的独立危险因素。结论静脉置管是引起VRE血流感染的独立危险因素,临床应加强感控措施,防止VRE血流感染的暴发。

利奈唑胺耐药而万古霉素敏感的屎肠球菌1例

患者,男,32岁,既往体健。因车祸致左小腿毁损伤、右侧胫腓骨骨折、失血性休克、肺挫伤、成人呼吸窘迫综合征（ARDS）而于2008年5月25日急诊收住。予抗休克综合急救措施并急诊行左小腿截肢及双下肢清创缝合术等处理后转入ICU监护加强治疗。入科后，生化及血气检查结果显示患者存在心、肝、肾功能损害及ARDS、凝血功能障碍而一直予机械通气辅助通气，

万古霉素耐药肠球菌耐药基因检测及分子流行病学调查

目的：了解我院分离的万古霉素耐药肠球菌的耐药相关基因及流行情况。 方法：收集2012－2013年间分离的7株经E-test确认的万古霉素耐药肠球菌（VRE），提取基因组DNA，PCR检测van耐药基因型，多重PCR检测asal，gelE，cylA，esp，hyl 5个毒力基因；多位点序列分型（MLST）及脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行流行病学调查。 结果：7株VRE耐药基因型van均为A型；有6株检测到毒力基因esp、hyl，其余为阴性；MLST及PFGE均显示菌株2、4、5、7为主要型别（ST 17），其余3株各不相同。 结论：我院分离的VRE耐药基因型为vanA型，毒力基因esp、hyl检出率较高，2013上半年有小规模VRE流行，应加强对于VRE的管控工作。

37株耐万古霉素屎肠球菌基因型及同源性分析

目的检测37株耐万古霉素屎肠球菌（VREFm）的基因型以利于临床治疗选药，重复基因外回文序列-聚合酶链反应（REP-PCR）同源性分析为分子流行病学提供依据。方法依据2006年美国临床实验室标准化研究所（CLSI）推荐的纸片扩散法和琼脂稀释法对VREFm进行药敏试验；PCR方法检测万古霉素的耐药基因；用REP-PCR进行同源性分析。结果37株屎肠球菌对万古霉素、替考拉宁、红霉素和氨苄西林均100．0％耐药，万古霉素MIC〉512μg／ml，基因型均为vanA；耐药率左氧氟沙星为89．2％、庆大霉素为86．5％、环丙沙星为91．9％、呋喃妥因为59．5％、氯霉素为5．4％；37株VREFm扩增出3～14条带，大小在100～2000bp之间，分为6个型。结论37株VREFm表型与基因型一致；VREFm对多种抗菌药物耐药；REP-PCR方法简便、快速、花费低，可用于肠球菌属同源性检测。