耐万古霉素金黄色葡萄球菌生物学特性改变与细菌鉴定

目的了解金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后生物学特性的变化及其对临床细菌鉴定结果的影响。方法使用万古霉素体外诱导试验将1株临床分离的异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(h-VRSA)逐渐诱导为万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(VISA),观察原代菌和诱导菌的生长特征和生化反应,并使用VITEK32和MicroscanWalkAway40进行细菌鉴定。结果h-VRSA和VISA的主要生物学特性改变为:菌落大小不等、色素由淡黄色变成灰白色、溶血环消失,血浆凝固酶、甘露醇、甘露糖等生化反应由阳性转为阴性;对杆菌肽由敏感变为耐药;仪器鉴定结果为溶血葡萄球菌或模仿葡萄球菌。结论金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后可表现出培养特征、生化反应等一系列表型特征的改变,并可导致临床细菌鉴定结果错误。

耐万古霉素金黄色葡萄球菌的耐药机制和检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)是引起医院感染的多重耐药菌 ,其有效的治疗药物为万古霉素。近年来已经发现对万古霉素敏感性降低的葡萄球菌 ,尤其是异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌 (hetero VRSA)和万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌 (VISA)的检出 ,在医学界引起关注。一旦hetero VRSA和VISA发展为耐万古霉素金黄色葡萄球菌 (VRSA) ,临床将面临无药可选择的被动局面。如果应用万古霉素治疗MRSA失败 ,临床医生应该考虑是否有hetero VRSA或VISA的存在。因此 ,对VRSA的耐药机制以及hetero

异源性耐万古霉素金黄色葡萄球菌的研究进展

MRSA是医院内感染的重要致病菌之一 ,万古霉素是唯一有效的药物 ,但万古霉素的应用未能明显降低极高的病死率 ,异源性耐万古霉素金葡菌的存在可能是重要原因。了解该菌的流行状况对监控和治疗MRSA感染具有重要意义。

分析总结耐万古霉素金黄色葡萄球菌生物学特性改变与细菌鉴定

目的：探讨耐万古霉素金黄色葡萄球菌的生物学特征改变对细菌鉴定的影响。方法：使用万古霉素体外诱导将一株异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）诱导为耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA），观察金黄色葡萄球菌耐万古霉素后生物学特征及变化规律。结果：金黄色葡萄球菌耐药后色素、溶血环消失，菌落变小，导致手工法和仪器法细菌鉴定错误，对PCR检测鉴定没有影响。结论：金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药后，生物学发生变化，容易导致细菌鉴定结果错误，应引起临床重视。

GraSR通过MurC促进金黄色葡萄球菌中等耐受万古霉素的作用研究

目的:探讨GraS(T136I)突变对万古霉素中等耐受金黄色葡萄球菌(vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus,VISA)耐药性的影响及机制。方法:采用同源重组技术将XN108(VISA)的GraS(T136I)突变位点引入到Newman(VSSA)构建突变菌株Newman-GraS(T136I),利用相同的方法在XN108中将突变位点进行回复,构建回复菌株XN108-GraS(I136T),利用E-test法测定各菌株对万古霉素的耐药性,通过透射电子显微镜观察各菌株细胞壁厚度,采用RT-qPCR检测了金葡菌细胞壁肽聚糖合成相关基因在XN108及其突变回复菌株XN108-GraS(I136T)中的表达水平变化,通过LacZ报告系统检测XN108和XN108-GraS(I136T)中murC基因启动子活性,通过结合位点分析和凝胶迁移阻滞实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)证实GraSR对murC基因的调控作用。结果:Newman-GraS(T136I)和XN108-GraS(I136T)替换菌株构建成功。回复株XN108-GraS(I136T)对万古霉素的MIC从原来的12μg/mL下降到8μg/mL,突变菌株Newman-GraS(T136I)对万古霉素的MIC从野生株的1.5μg/mL上升到4μg/mL。透射电子显微镜结果显示,XN108-GraS(I136T)的细胞壁(20.097±2.862) nm较野生株XN108(40.283±3.784) nm明显变薄(P=0.000)。通过RT-qPCR实验发现,金葡菌细胞壁肽聚糖合成相关基因murC、murD和mraY在回复菌株XN108-GraS(I136T)中表达下调(P=0.000),且murC的下降水平最多(约1.935倍),LacZ活性检测分析显示XN108中murC基因的启动子活性(2 182.333±104.580)明显强于其在XN108-GraS(I136T)(1 593.333±179.258)中的活性(P=0.008),结合位点检索分析及EMSA实验证实GraS激活的GraR具有直接结合murC基因调控区的功能。结论:金葡菌GraS(T136I)突变具有促进VISA的形成的作用,该作用可能是通过上调细胞壁合成关键基因murC的表达,导致细胞壁增厚来实现的。

金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药性及耐药基因检测分析

目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)对万古霉素的耐药性及耐药基因分布情况。方法收集平顶山市第一人民医院2020年4月至2022年3月临床送检样本分离的288株SA菌株,采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定和药敏系统以及纸片扩散法进行菌落鉴定与药敏试验;采用聚合酶链反应检测pbp4、mgrA、agr、vraS、vraR、icaA、icaR基因表达。结果288株SA菌株中筛选出25株万古霉素异质性耐药金黄色葡萄球菌(hVISA)菌株,hVISA阳性率为8.68%,未检测到万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(VISA)菌株和万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)菌株;万古霉素敏感金黄色葡萄球菌(VSSA)菌株万古霉素最小抑菌浓度(MIC)主要分布在0.50 mg/L和0.75 mg/L,占比为41.83%和28.90%;hVISA菌株万古霉素MIC主要分布在1.50 mg/L和2.00 mg/L,占比为56.00%和28.00%;VSSA菌株pbp4、agr、icaR的相对表达量均低于hVISA菌株(P<0.05),而mgrA、vraS、vraR、icaA的相对表达量均高于hVISA菌株(P<0.05)。结论本次调查hVISA两年总流行率为8.68%。与VSSA菌株比较,hVISA菌株pbp4、agr、icaR、mgrA、vraS、vraR、icaA基因表达存在差异,可能与万古霉素的耐药性有关。

百里香酚对犊牛源生物被膜阳性金黄色葡萄球菌耐药性的消除作用

为了了解内蒙古地区犊牛病料中生物被膜阳性金黄色葡萄球菌的流行情况、耐药情况及百里香酚对生物被膜阳性金黄色葡萄球菌耐药性的消除作用。本试验采用生化鉴定和PCR方法,对采集到的104份犊牛病料进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定;采用K-B法检测了金黄色葡萄球菌分离株对18种抗菌药物的敏感性;采用改良结晶紫染色法测定分离株的生物被膜形成能力;选取2株生物被膜强阳性菌株,采用微量肉汤稀释法测定百里香酚对分离株的最小抑菌浓度,并进行百里香酚耐药性消除试验。结果显示,在104份犊牛病料中共分离鉴定获得43株金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、头孢西丁、卡那霉素、复方新诺明和红霉素5种抗菌药物的耐药率达到50.0%以上;74.4%(32/43)的分离株为多重耐药株。生物被膜形成能力强、中、弱和无生物被膜形成能力的分离株分别占比23.3%(10/43)、16.3%(7/43)、32.6%(14/43)和27.9%(12/43);生物被膜阳性株中83.9%(26/31)为多重耐药株。百里香酚对2株生物被膜强阳性株的最小抑菌浓度均为256 mg/mL,经百里香酚处理后均恢复了对头孢噻肟的敏感性。结果表明,百里香酚对生物被膜阳性金黄色葡萄球菌具有一定的耐药消除作用。

骨折内固定术后感染金黄色葡萄球菌患者的耐药监测及临床分析

目的 分析金黄色葡萄球菌在骨折内固定术后感染患者中的耐药情况。方法 回顾性分析四川省骨科医院2016年1月至2020年12月骨折内固定术后确诊为金黄色葡萄球菌感染的临床病例,共收集金黄色葡萄球菌467株。根据药物敏感性实验分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)组(145株)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)组(322株),分析比较2组对常见抗菌药物的耐药情况。统计2016—2020年万古霉素对MRSA最低抑菌浓度(MIC)。结果 金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率达94.9%(443/467),对红霉素、克林霉素、苯唑西林、四环素耐药率较高,对左氧氟沙星、利福平、复方磺胺甲噁唑片、莫西沙星的耐药率较低[8.4%(39/467)、5.8%(27/467)、3.6%(17/467)、3.0%(14/467)],未发现对万古霉素、利奈唑胺、达托霉素耐药的菌株,万古霉素中介3株。MRSA组和MSSA组对克林霉素、苯唑西林、红霉素、左氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、利福平、复方磺胺甲噁唑片、四环素的耐药率比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。万古霉素对MRSA的MIC为2 mg/L的比例较高。结论 金黄色葡菌球菌引起的骨折内固定术后感染MRSA检出率较高,万古霉素MIC=2 mg/L的比例较高,降低了万古霉素治疗骨折内固定术后感染的达标率,且万古霉素骨组织渗透率不高,增加了临床治疗难度。因此万古霉素骨水泥植入,联合万古霉素静脉用药,或万古霉素静脉用药与利福平、喹诺酮类、磺胺类、利奈唑胺等联合用药可能是治疗骨折内固定术后感染的较好选择。

生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全基因组序列分析

目的了解生牛乳中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的全基因组序列特征,分析其耐药基因和毒力基因的分子特征差异。方法采用全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌鉴定;通过肉汤微量稀释法进行药物敏感性检测;利用生物信息学工具对全基因组测序结果进行分子特征分析。结果SJ23319菌株和SJ23506菌株经鉴定均为MRSA;SJ23319菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX,SJ23506菌株耐药谱为OXA-PEN-FOX-CC,耐药基因分析结果显示两个菌株均携带耐药基因mecA和blaZ,这与耐药表型结果基本一致;2个菌株染色体基因组大小、结构和功能蛋白相似,SJ23319菌株为ST59-t437-SCCmecIVa型,SJ23506菌株为ST398-t034-SCCmecV(5C)型;2个菌株功能蛋白均分布于21个直系同源簇(cluster of orthologous group,COG)条目中,携带13种相同的耐药基因,SJ23319菌株还携带有四环素类耐药基因tet(K);2个菌株携带毒力基因多达67种,SJ23319菌株携带更多的细菌黏附相关基因(fnbA/B、sdrD/E)和外毒素基因(Seb、Selk、Selq、set16-26)。结论SJ23319(ST59)菌株比SJ23506(ST398)菌株携带更多的耐药基因和毒力基因,致病性更强,进一步证明在牲畜相关的MRSA(livestock-associated MRSA,LA-MRSA)菌株中,ST59型比ST398型更容易导致社区流行和感染,应当在MRSA流行监测中更加重视。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致新生儿坏死性筋膜炎1例

本研究报道1例以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染致右背部皮肤红肿、局部呈黑紫色坏死起病的新生儿,诊断为MRSA新生儿坏死性筋膜炎(NF),同时合并脓毒血症、感染性休克。经早期呼吸循环支持、切开引流、抗感染、外科清创并负压封闭引流(Vacuum sealing drainage,VSD)联合邮票状皮片移植技术治疗后,患儿病情好转出院。本研究旨在为MRSA致新生儿NF的早期诊治提供策略,同时推广邮票状皮片移植技术在新生儿NF中的应用,提高新生儿存活率。

N-乙酰半胱氨酸联合万古霉素对耐甲氧金黄色葡萄球菌及其生物膜的清除作用研究

目的探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)联合万古霉素(Vancomycin,VA)对体外建立的耐甲氧金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)生物膜的影响。方法(1)以实验室标准菌株耐甲氧金黄色葡萄球菌(BAA-1556,ATCC)作为研究对象,通过结晶紫染色法,确定其最大面积生物膜生成时间。(2)建立实验分组,分别为空白对照组、万古霉素组、乙酰半胱氨酸组、万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组、万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组。通过结晶紫染色法评价生物膜相对面积大小。通过LB-琼脂培养板计数法测算生物膜内残余细菌数量。通过扫描电镜以及激光共聚焦显微镜下观察不同组MRSA细菌生物膜形态变化。结果(1)MRSA菌在48 h可形成成熟的生物膜结构。(2)MRSA菌在各分组载体表面形成生物膜的半定量结果(波长=590 nm)分别为空白对照组1.32±0.60,万古霉素组1.05±0.15,乙酰半胱氨酸组0.53±0.20,万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组0.35±0.11,万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组0.29±0.10。证实NAC可显著减少生物膜面积。(3)24、48、72 h时间段生物膜内残余细菌量为空白对照组>乙酰半胱氨酸组>万古霉素组>万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组>万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。证实VA与NAC联合应用可以提高生物膜内细菌的清除率。(4)空白对照组存在大量活/死细菌共同构成的细菌生物膜;乙酰半胱氨酸组虽有较多活菌分布,但死菌黏附以及生物膜面积明显减少;万古霉素组存在着大量死菌黏附于载体表面,构成生物膜,与部分活菌共存;万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组活/死细菌分布明显减少;万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组生物膜面积极少,仅有少量活菌黏附于载体表面,且呈单个分布。结论NAC对体外生成的MRSA菌生物膜有着清除作用,与VA联合应用可显著提升对生物膜内细菌的清除率。

某三甲医院儿科病区患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染现状及危险因素分析

目的:分析贵阳市某三甲医院儿科病区患儿感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的危险因素.方法:回顾性收集2018年1月—2022年12月贵阳市第一人民医院儿科病区感染金黄色葡萄球菌(SA)患儿的临床资料和病原学资料,并进行菌种鉴定及药敏试验.采用Logistic回归分析患儿感染MRSA的危险因素.结果:共检出SA 581株,其中MRSA 147株,年平均检出率为25.30%.标本来源显示404株来源于痰液,占70.07%.甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)组与MRSA组中环丙沙星、苯唑西林、四环素、红霉素、青霉素、利福平的耐药性比较,差异有统计学意义(P<0.05);二分类Logistic回归分析结果显示,早产、使用头孢哌酮-舒巴坦钠、侵入性操作是MRSA感染的危险因素(P<0.05).结论:感染MRSA的患儿主要来源于社区感染,儿科病区开展入院筛查以及针对早产、使用头孢哌酮-舒巴坦钠和接受侵入性操作的患儿开展感染监测,对MRSA院内感染防控具有积极意义.

项目综合管理策略在重症监护病房耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染防控中的应用

目的 探讨项目综合管理策略在重症监护病房(ICU)落实耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染防控措施中的应用效果,为降低MRSA医院感染发生率提供循证依据。方法 选取2020-01-2021-12月某三甲医院5个ICU中住院患者送检标本并经微生物培养分离出MRSA的患者为研究对象。2020年为基线调查,2021年实施项目综合管理策略。比较干预前后各项防控措施落实执行情况、手卫生依从性、患者MRSA检出情况和MRSA检出科室分布情况。结果 实施项目综合干预管理策略后,MRSA防控措施的落实情况优于干预前,差异有统计学意义(P<0.05)。各类人员手卫生依从性均有提高,差异有统计学意义(P<0.05)。干预后患者MRSA检出率由35.71%降至27.73%。MRSA检出科室分布情况显示除呼吸内科ICU持平,其他ICU检出率均下降。结论 项目综合管理策略提高了MRSA感染防控措施的执行力和有效性,降低了MRSA检出率,减少了患者感染MRSA的风险,可保障医疗安全。

人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响

目的 研究人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响。方法 诱导万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(VRSA),分别用10μg/m L、30μg/mL、90μg/m L人参皂苷Rh2处理VRSA作为不同浓度人参皂苷Rh2处理组;VRSA分别用1μg/mL、4μg/mL、16μg/mL万古霉素处理,作为不同浓度万古霉素处理组;10μg/mL人参皂苷Rh2和1μg/mL万古霉素共同作用VRSA记为10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组;不作处理的VRSA作为空白对照组。原始分离的对万古霉素敏感型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为VSSA组。结晶紫法检测生物膜形成能力;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测fnbA、atlA表达水平;分光光度计检测菌活性。结果 与VSSA组比较,VRSA组生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,16μg/mL万古霉素及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显降低,而10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显低于不同浓度人参皂苷Rh2处理组,且明显高于4μg/mL万古霉素处理者,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度人参皂苷Rh2处理的VRSA生物膜的光密度值明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度万古霉素处理的VRSA中fnbA、atlA表达水平显著升高,4μg/mL和16μg/mL万古霉素处理的VRSA生物膜的光密度值也明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,10μg/mL人参皂苷Rh2组及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显升高,且10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均显著高于10μg/mL人参皂苷Rh2组,但明显低于1μg/mL万古霉素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 人参皂苷Rh2可抑制VRSA生物膜形成,但不抑菌;万古霉素可抑菌但不能抑制生物膜形成,两者联用能抑制生物膜形成且增强万古霉素的抑菌作用。