不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响

目的比较不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响。方法采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Welch AQ-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(3∶97);柱温为25℃;流速为0.8 m L/min;进样量为10μL;漂移管温度为40℃;低温雾化。结果采用不同炮制去心法处理后,巴戟天中耐斯糖的含量高低为:润法>煮法>清蒸法>盐蒸法>泡后蒸法>泡法。结论采用润法去心,巴戟天中耐斯糖损失最少。

基于耐斯糖含量优选制巴戟天炮制工艺

目的：以制巴戟天中耐斯糖含量为指标,优选制巴戟天最佳炮制工艺。方法：采用正交试验设计和《中国药典》2010年版一部中测定耐斯糖含量的方法优选炮制工艺。色谱柱为Welch AQ-C18（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇-水（3∶97）;柱温为25℃;流速为0.8 ml·min-1;进样量为10μl;漂移管温度为40℃;低温雾化。结果：耐斯糖在0.214 8～0.644 4mg·ml-1浓度范围内线性关系良好,回收率为99.5%,RSD=3.5%（n=6）。结论：基于耐斯糖含量测定的制巴戟天最佳炮制工艺为：甘草用量为4%,拌炒时间为15 min,煮制锅温为200℃。

巴戟天药材中耐斯糖含量近红外光谱测定方法的建立

目的建立巴戟天药材中耐斯糖含量的近红外光谱测定方法。方法用高效液相色谱法测定114批巴戟天药材中耐斯糖含量,采集近红外光谱后,运用多元散射校正法,结合最小偏二乘法建立巴戟天耐斯糖含量的定量模型。结果建立的耐斯糖近红外光谱定量模型,内部交叉验证决定系数为0.979 1,校正标准偏差为0.909 0,预测标准差为0.909 0,交叉验证的标准偏差为1.093 0。结论该含量测定近红外光谱模型稳定、准确适用于巴戟天药材中耐斯糖的含量测定。

探究不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响

目的探究不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响。方法分别采用润法、泡后蒸法、清蒸法、煮法、泡法以及盐蒸法对巴戟天进行处理,选择合适的色谱条件,并采用方法学对其进行考察,得出巴戟天耐斯的糖含量。结果经过上述炮制法处理后的巴戟天耐斯糖含量由低到高依次为:泡法、泡后蒸法、盐蒸法、清蒸法、煮法、润法。结论采用泡法去心进行处理巴戟天耐斯糖含量消耗丢失的最多,润法去心消耗丢失的最少。

HPLC-ELSD法测定海马巴戟胶囊中耐斯糖的含量

目的:建立海马巴戟胶囊中耐斯糖的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)法,色谱柱为ZORBAX SB-C18(5μm,250mm×4.6mm);流动相为甲醇—水(3∶97);流速为1.0min.ml-1,柱温为30℃。PL-ELS2100型蒸发光散射检测器(漂移管温度:80℃,雾化温度:50℃),载气(氮气)流速1.5ml.min-1。结果:耐斯糖在选定浓度0.06606～0.6606mg.ml-1内有良好的线性关系(r=0.9998),回收率为99.18%(RSD=0.70%)。结论:本法方便、快速、准确,重现性好,可用于该制剂中耐斯糖的定量分析。

酶法辅助提取巴戟天中多糖及耐斯糖工艺研究

目的:筛选生物酶辅助提取巴戟天多糖及耐斯糖的最佳水提工艺。方法:在单因素试验基础上,采用二次通用旋转组合设计优化工艺。测定多糖含量采用硫酸比色法,对照品为0.1 mg·mL^(-1)无水葡萄糖标准溶液,显色剂为5%苯酚溶液,489 nm波长处紫外分光光度仪下测定吸收度。测定耐斯糖含量采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18)(5μm,4.6 mm×150 mm),流动相为甲醇-水(3∶97),流速为0.8 mL·min^(-1),漂移管及雾化温度为40和80℃。结果:生物酶辅助提取巴戟天多糖及耐斯糖的最佳水提工艺为:pH 5.0、加入0.18%的纤维素酶,55℃酶解2.0 h,20倍量水提取3.5 h,提取3次,巴戟天多糖得率为10.44%,耐斯糖得率为0.083 g·g^(-1)。结论:二次通用旋转组合设计所得的优化工艺可靠、稳定,对巴戟天的开发利用具有一定意义。

半制备色谱法分离巴戟天中的低聚糖

目的运用半制备色谱法分离巴戟天中的低聚糖。方法应用Gilson制备色谱仪,以Phenomenex Synergi半制备柱,甲醇-水=5：95为流动相,流速5ml/min,柱温30℃,为色谱条件对巴戟天提取物进行分离。结果所得四聚糖耐斯糖纯度96.1%、五聚糖1-果呋喃糖基耐斯糖纯度95.8%。结论此方法重现性好、简单易操作,可以应用于巴戟天中四聚糖和五聚糖的分离制备。

高效薄层色谱法同时测定巴戟天中3种寡糖

目的建立用高效薄层色谱法同时测定巴戟天中3种寡糖的量。方法薄层层析的展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸(7∶5∶2∶1,v/v),展距为90 mm,温度为室温,显色剂为α-萘酚-硫酸,烘烤温度为110℃,扫描波长为577nm。结果蔗果三糖的线性范围为52～260 ng,r2=0.992 1,精密度RSD为1.56%;耐斯糖的线性范围为64～320ng,r2=0.993 8,精密度RSD为1.47%;1F-果呋喃基耐斯糖的线性范围为72～360 ng,r2=0.994 3,精密度RSD为1.38%。结论本方法操作简单,重复性好,可作为巴戟天药材及其产品中3种寡糖的定量分析方法。

HPLC-ELSD法同时分析巴戟天中3种寡糖

目的 建立HPLC-ELSD法同时测定巴戟天中3种寡糖.方法 采用Cosmosil Sugar-D Packed column （4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱温为30℃,体积流量为1 mL/min,以ELSD为检测器.结果 蔗果三糖进样量在1.4～14 μg范围内线性关系良好,r=0.999 8,检测限为8.24 ng/μL,定量限为28.19 ng/μL,平均回收率为105.21％,RSD为1.75％.耐斯糖的进样量0.9～9μg范围内线性关系良好,r=0.999 5,检测限为7.62 ng/μL,定量限为26.38 ng/μL,平均回收率为98.52％,RSD为1.86％.1F-果呋喃基耐斯糖进样量在1.15～11.5 μg范围有良好线性关系,r=0.9996,检测限为5.86 ng/μ L,定量限为21.52 ng/μL,平均回收率为99.08％,RSD为1.78％.结论 本法灵敏、操作简单,重复性好,可用于巴戟天及其产品的质量控制.

高效液相色谱法测定巴戟天中低聚糖含量

目的:建立 EKSD—HPLC 法测定巴戟天低聚糖类成分。方法:色谱柱:Phenomenex Synergi(250 mm×4.6 mm,4μm);流动相:甲醇-水(3:97);时间25 min;流速0.8 mL·min^(-1),以 ELSD 检测。结果:耐斯糖进样量在0.8～8μg范围内有良好的线性关系,r=0.9995,其低、中、高3个量的平均回收率分别为98.6%,99.0%,98.1%;RSD 分别为2.3%,1.9%,2.4%。1~F-果呋喃糖基耐斯糖进样量在0.48～4.8μg范围内有良好的线性关系,r=0.9997,其低、中、高3个量的平均回收率分别为98.2%,98.0%,99.4%;RSD 分别为1.3%,2.5%,2.0%。结论:本法可同时测定巴戟天中耐斯糖、1~F-果呋喃糖基耐斯糖的含量,方法简单、灵敏、准确,重复性好,可用于控制巴戟天药材的质量。

星点设计-效应面法优化盐巴戟炮制工艺

目的优化盐巴戟的炮制工艺。方法在单因素试验基础上,以加水量、闷润时间、蒸制时间为自变量,耐斯糖、甲基异茜草素-1-甲醚、水晶兰苷的综合评分为评价指标,通过星点设计-效应面法优选盐巴戟的炮制工艺。结果最佳炮制工艺为加水1.05倍,闷润5.48 h,蒸制2.90 h(100 g巴戟肉加盐1.5 g),测量值和预测值之间的相对误差为3.04%。结论该方法得到的炮制参数准确,重复性好,有一定实际意义。

盐巴戟天炮制工艺的优化

目的优选盐巴戟天最佳炮制工艺。方法以巴戟天中耐斯糖、多糖为指标,采用正交试验法对加盐量、闷润时间、蒸制时间3个因素,每个因素取3个水平,进行巴戟天盐工艺的优选。结果加盐量、蒸制时间对实验结果有显著影响,闷润时间对实验结果无显著影响。确定盐巴戟天最佳工艺为:50g药材加入50mL2%的盐水拌匀闷润5h,加热蒸制60min,趁热除去木心,切段,干燥。结论该工艺合理可行。

巴戟天中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运

目的:研究巴戟天中的有效成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在人源结肠癌细胞Caco-2单层模型中的吸收特性。方法:通过细胞培养技术建立Caco-2细胞单层模型,以细胞形态学特征、细胞跨膜电阻等指标验证和筛选模型。考察不同pH、不同质量浓度的水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖对Caco-2细胞活力的影响,以确定给药pH和质量浓度。通过Caco-2细胞转运实验探究药物质量浓度、作用时间与P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖吸收转运的影响。采用高效液相色谱法(HPLC)测定水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的累积转运量。结果:水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在Caco-2细胞单层模型中吸收良好,三者低质量浓度的双侧表观渗透系数(P_(app))明显大于中、高质量浓度;加入盐酸维拉帕米后,三者的P_(app)变化不大,说明这3个成分的小肠吸收不需要载体。去乙酰车叶草苷酸的液相色谱图中存在少量水晶兰苷,说明去乙酰车叶草苷酸存在首过效应。结论:巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖3个特征性成分在跨膜转运过程中均以被动转运为主,且3个成分都存在自身质量浓度抑制现象。

巴戟天的高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)研究

目的采用高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)对巴戟天水提工艺进行研究,以期为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供依据。方法以耐斯糖为检测指标,配合含固比,以加水量、提取次数、提取压差为考察因素,应用L9(34)正交试验,筛选HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件。结果 HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件为:药材加30倍的水在-0.1～35MPa压差下提取1次;耐斯糖的提取保留率可达80%以上,含固比也较高。结论该工艺过程稳定,可以为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供技术支持。

盐巴戟天有效成分在体肠灌流研究

目的研究盐巴戟天中环烯醚萜苷类和寡糖类成分在大鼠体内的肠吸收动力学特征。方法采用HPLC和超高效液相色谱三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS/MS)技术分别建立巴戟天中环烯醚萜苷类成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和寡糖类成分耐斯糖在小肠液的定量分析方法。基于大鼠在体单向肠灌流模型,以吸收速率常数(K_(a))和表观渗透系数(P_(app))为评价指标,探究不同pH值、不同药物浓度、不同肠段(十二指肠、空肠、回肠)及盐制对巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖肠吸收的影响。结果建立了盐巴戟天中3种有效成分在大鼠小肠液中的定量分析方法,符合方法学要求。3种成分在pH 7.4灌流液中的P_(app)和K_(a)均大于pH 6.8和pH 5.4灌流液,在中剂量(270 g/L)灌流液中的吸收参数均明显大于高剂量(540 g/L)和低剂量(135 g/L)。3种成分在小肠各肠段均有吸收且不同肠段间无明显差异,水晶兰苷K_(a)为空肠>十二指肠>回肠,去乙酰车叶草苷酸K_(a)为回肠>空肠>十二指肠,耐斯糖K_(a)为回肠>十二指肠>空肠;同一肠段耐斯糖与水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸K_(a)有明显差异(P<0.05),耐斯糖>去乙酰车叶草苷酸>水晶兰苷。盐巴戟天中3种成分在小肠不同肠段的P_(app)均大于巴戟肉,其中耐斯糖最为显著(P<0.01)。结论盐巴戟天中3种成分在小肠不同肠段中均有较好的吸收,水晶兰苷的主要吸收部位在空肠,去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的主要吸收部位在回肠,耐斯糖的吸收速率明显大于水晶兰苷和去乙酰车叶草苷酸。3种成分在中剂量(270 g/L)、pH 7.4灌流液中吸收较好,均存在自身浓度抑制现象。盐巴戟天中3种成分的肠吸收特性优于巴戟肉。

蒸制时间对盐巴戟天含量及特征图谱的影响研究

目的建立盐巴戟天含量和特征图谱测定方法,考察不同蒸制时间对盐巴戟天含量及特征图谱的影响。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法同时测定水晶兰苷含量和环烯醚萜类特征图谱、高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定耐斯糖含量和超高效液相色谱-电喷雾检测器(UPLC-CAD)法测定寡聚糖类特征图谱,并结合方差分析对不同蒸制时间的特征图谱进行差异性研究。结果分别建立了盐巴戟天环烯醚萜类和寡聚糖类UPLC特征图谱,确定共有特征峰分别为12个和20个;不同蒸制时间的水晶兰苷含量、耐斯糖含量及特征图谱均发生明显变化,优选盐巴戟天蒸制时间为1 h。结论实验建立的方法稳定、准确、灵敏度好,可用于盐巴戟天的质量控制。

清远与肇庆巴戟天的质量比较

目的比较清远和肇庆野生和栽培巴戟天的质量,为清远种植巴戟天提供参考。方法收集肇庆和清远野生和栽培巴戟天药材各3批,参照《中国药典》2015年版一部中巴戟天总灰分、水溶性浸出物和耐斯糖含量测定方法,测定肇庆和清远野生和栽培巴戟天药材中总灰分、水溶性浸出物和耐斯糖含量。结果巴戟天药材总灰分由低到高依次为肇庆野生巴戟天、肇庆栽培巴戟天、清远栽培巴戟天、清远野生巴戟天;水溶性浸出物含量由高到低依次为肇庆栽培巴戟天、肇庆野生巴戟天、清远野生巴戟天、清远栽培巴戟天;耐斯糖含量由高到低依次为肇庆野生巴戟天、清远栽培巴戟天、清远野生巴戟天、肇庆栽培巴戟天。两地产巴戟天总灰分、水溶性浸出物和耐斯糖含量均符合《中国药典》2015年版的要求。结论清远适合种植巴戟天,但其巴戟天质量稍差于肇庆巴戟天。

清远市售盐制巴戟天的质量评价

目的通过检测总灰分、浸出物、耐斯糖和重金属含量,综合评价清远市售盐制巴戟天的质量。方法购买清远8个地区药店销售盐巴戟天药材各1批,参照《中国药典》2015年版一部,测定其总灰分、水溶性浸出物、耐斯糖含量,微波消解联合电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定重金属铅、镉、汞、铜、砷的含量,结合《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》的重金属限量值评价样品重金属污染状况。结果清远市8个地区市售盐制巴戟天水分含量在3.1%~9.7%之间,水溶性浸出物含量在72.1%~83.0%之间均符合国家药典要求,但总灰分含量在5.4%~12.1%之间,其中清城区、佛冈县、阳山县总灰分含量不符合药典,佛冈县的总灰分含量超出规定量的两倍。耐斯糖含量,除英德县盐制巴戟天含量仅有0.5%,其它各地区均符合要求。7个地区盐巴戟天铅元素超标,其余元素含量均符合《绿色行业标准》。结论清远市售盐巴戟天质量参差不齐,本研究可为广大市民购药提供参考。

亲水作用色谱-蒸发光散射检测器联用法同时测定巴戟天中5种低聚糖的含量

目的:采用亲水作用色谱-蒸发光散射检测器联用法同时测定巴戟天中蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、巴戟甲素5种低聚糖的含量。方法:采用Waters XBridgeTMAmide(4.6 mm×150 mm,3.5μm)亲水性作用色谱柱;以乙腈(A)-0.2%三乙胺溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速0.8 mL·min-1;柱温40℃;以Waters 2424 ELSD检测,漂移管温度90℃,气压275.79 kPa。结果:5种低聚糖分别在2.128～21.28μg(r=0.999 3),1.864～18.64μg(r=0.999 6),1.92～19.2μg(r=0.999 8),1.912～19.12μg(r=0.999 5),2.368～23.68μg(r=0.999 4)线性关系良好,其回收率在92.81%～102.8%(n=6)。结论:该方法简单、准确,具有良好的重复性,为有效评价巴戟天药材的质量提供了分析方法。

不同炮制方法的巴戟天寡糖对骨质疏松模型雄性小鼠氧化应激和股骨组织形态的影响

目的 探讨巴戟天寡糖对环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导骨质疏松雄性小鼠氧化应激指标和股骨组织形态的影响,并探析炮制工艺对巴戟天寡糖成分及效用的影响。方法 对巴戟天寡糖及酒巴戟天寡糖中成分进行提取分离并验证。将雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、维生素D(5μg/kg)组及巴戟天寡糖低、高剂量(50、200 mg/kg)组和酒巴戟天寡糖低、高剂量(50、200 mg/kg)组。除对照组外,其余小鼠连续15 d ig CTX(4.5 mg/kg)制备骨质疏松模型,造模结束后,给予相应药物干预4周,测定各组小鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;采用Micro-CT对股骨远端骨微结构进行分析;采用三点弯曲法测定骨生物力学参数;制片测量骨组织形态计量学参数。结果 巴戟天寡糖及酒巴戟天寡糖的6种寡糖成分的含量不同,巴戟天寡糖中D-果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖的含量较酒巴戟天寡糖更多,而酒巴戟天寡糖中D(+)-无水葡萄糖的含量更多。与模型组相比,巴戟天寡糖低剂量组小鼠股骨的骨密度显著增加(P<0.01);骨生物力学参数改善(P<0.05、0.01);血清MDA水平降低(P<0.05);松质骨的骨小梁面积比(percentage of trabecular bone area,Tb.Ar)、荧光标记周长比(percentage of fluorescent label perimeter,L.Pm)、骨矿化沉积率(mineral apposition rate,MAR)及骨形成率(bone formation rate to bone volume,BFR/BV)显著升高(P<0.05、0.01),骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)和破骨细胞数目(number of osteoclast,OC.N)显著降低(P<0.01);皮质骨的MAR显著降低(P<0.05),BFR/BV显著升高(P<0.01)。巴戟天寡糖高剂量组小鼠骨密度显著增加(P<0.01);血清中CAT活性显著升高(P<0.01);松质骨组织中Tb.Ar显著升高(P<0.05),Tb.Sp显著降低(P<0.05)。酒巴戟天寡糖低剂量组小鼠骨密度显著增加(P<0.01);骨生物力学参数改善(P<0.05);血清GSH-Px活性升高(P<0.01);松质骨的Tb.Ar、L.Pm、MAR及BFR/BV显著升高(P<0.05、0.01),Tb.Sp和OC.N显著降低(P<0.05、0.01);皮质骨的MAR显著降低(P<0.05),BFR/BV显著升高(P<0.05)。酒巴戟天寡糖高剂量组小鼠血清中CAT活性显著升高(P<0.01),对于骨结构改变则无明显影响作用。结论不同炮制工艺会影响巴戟天寡糖的成分含量。巴戟天寡糖及酒巴戟天寡糖均能不同程度地改善氧化应激指标,但低剂量的巴戟天寡糖及酒巴戟天寡糖对于改善CTX引起的骨质疏松的作用更为显著。