耐氟喹诺酮类药物的大肠埃希菌gyr A 基因点突变检测

目的：研究大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法：对大肠埃希菌标准菌４４３０２和临床收集的３株对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌及１株敏感菌，用ＰＣＲ方法扩增ＤＮＡ旋转酶ｇｙｒＡ基因的Ｎ末端编码区，并进行克隆和序列测定。结果：对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的ｇｙｒＡ基因的序列分析，发现３个导致氨基酸改变的基因点突变：丝氨酸－８３→亮氨酸；丙氨酸－８４→脯氨酸；天冬氨酸－８７→天冬酰氨。结论：对氟喹诺酮类药物高度耐药的大肠埃希菌的ＤＮＡ旋转酶Ａ亚单位存在着基因点突变。

结核分枝杆菌耐氟喹诺酮类药物的严重性及其特点

上世纪80年代发现氟喹诺酮类药物（FQs）具有抗结核分枝杆菌活性以来，FQs被逐渐用于结核病的治疗之中，今天FQs已不仅仅是治疗耐多药结核病（MDR-TB）的主选化疗药物，多耐药结核病（PDR—TB）和单耐药结核病也在使用FQs，国际上甚至研究将FQs用于新发或初治肺结核患者的治疗，以期缩短疗程，增加患者的依从性，提高治愈率，从根源上控制或减少耐药结核病的发生。

减少氟喹诺酮类药物使用可降低耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌的分离率

耐甲氧西林金葡菌（MRSA）和耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌的高分离率在一定程度上可能与氟喹诺酮类药物的过度使用有关。本文作者等研究了减少氟喹诺酮类药物使用与MRSA和氟喹诺酮类耐药铜绿假单胞菌的分离率的相关性。本研究共分为3个时段：干预前期（2000年1月-2005年8月），干预期（2005年9月-2006年3月）和干预后期（2006年3月2010年3月）。采用分段回归分析方法评估控制氟喹诺酮类药物的用量与细菌耐药性之间的关系。

耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌危险因素及临床影响评价

铜绿假单胞菌是最常见的医院获得性致病菌之一。氟喹诺酮为一类重要的抗铜绿假单胞菌抗生素。然而，在医院获得的铜绿假单胞菌分离株中，耐氟喹诺酮类菌株的比例上升幅度令人震惊。在美国ICU，耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌株的比例从1993年的15％升至2002年的32％，其他国家的情况与之相似。此外铜绿假单胞菌株对氟喹诺酮耐药也与对其他抗生素耐药相关联。本文旨在识别耐氟喹诺酮类铜绿假单胞菌的危险因素，研究该耐药菌对临床及住院费用的影响。

质粒介导的摩氏摩根菌KL-225对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素的耐药

目的研究摩氏摩根菌KL-225的超广谱耐药机制,为新型抗菌药物的研发奠定基础。方法提取纯化摩氏摩根菌KL-225的p KL2683和p KL5933质粒,并进行序列测定,将测序结果进行生物信息学分析找到其可能的耐药基因,再通过将质粒转化入摩氏摩根标准菌株和大肠杆菌,对耐药基因进行验证。结果 p KL2683质粒携带的qnrD基因导致氟喹诺酮类抗生素对KL-225的MIC升高;p KL5933质粒携带的aac(6′)-Ib-cr4基因导致KL-225对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素的MIC升高。结论摩氏摩根菌KL-225对氨基糖苷类抗生素的耐药主要来源于p KL5933质粒上携带的aac(6′)-Ib-cr4基因;p KL2683质粒携带的qnrD基因和p KL5933质粒携带的aac(6′)-Ib-cr4基因导致KL-225对氟喹诺酮类抗生素敏感性降低。

人型支原体氟喹诺酮类的耐药机制研究

目的探讨人型支原体(Mh)对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法收集29株Mh菌株进行左氧氟沙星、莫西沙星、非那沙星、德拉沙星等氟喹诺酮类药敏试验,同时提取菌株DNA并针对氟喹诺酮类耐药决定区域(QRDRs)的GyrA、GyrB、ParC、ParE 4个基因位点测序,探讨Mh对氟喹诺酮类药物的耐药机制。结果在29株Mh临床菌株中,左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率较高,分别是89.66%和82.76%;而非那沙星和德拉沙星的耐药率较低。GyrA蛋白Ser-153→Leu、ParC中Ser-91→Ile及ParE中的Asp-426→Asn易导致Mh对氟喹诺酮类抗生素耐药。结论非那沙星和德拉沙星是体外抑制Mh生长较有效的氟喹诺酮类,德拉沙星具有相对较低的MIC值。QRDRs的GyrA中Ser-153→Leu、ParC中Ser-91→Ile及ParE中的Asp-426→Asn可能是引起Mh对氟喹诺酮类抗生素耐药的分子机制。

泛耐药肺炎克雷伯菌血液分离株耐药机制研究

目的探讨泛耐药肺炎克雷伯菌血液分离株耐药机制。方法对我院ICU住院患者血液分离的泛耐药肺炎克雷伯菌株,采用K-B纸片法药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)方法对该菌株可能携带的β-内酰胺酶编码基因及膜孔蛋白编码基因、与氨基糖苷类药物耐药相关的氨基糖苷类修饰酶编码基因、与氟喹诺酮类药物耐药相关基因以及与利福平耐药相关的aar基因进行检测,并对阳性产物进行测序,测序结果作BLAST对比分析。结果该株泛耐药肺炎克雷伯菌株检出TEM、SHV、DHA3种β-内酰胺酶编码基因,OmpK35膜孔蛋白编码基因检测呈阳性,OmpK36膜孔蛋白编码基因检测呈阴性,即该菌OmpK36膜孔蛋白编码基因为缺失型;aac(6')-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶编码基因阳性;氟喹诺酮类药物作用靶位gyrA基因第83位密码子存在TCC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I)、parC基因第80位密码子存在AGC→ATC有义突变(氨基酸序列S→I),且氟喹诺酮类药物作用靶位保护蛋白编码基因qnrB检测阳性;利福平获得性耐药基因arr检测阳性。结论泛耐药肺炎克雷伯菌同时存在多种耐药机制,从而对不同类抗菌药物形成耐药,给临床治疗带来极大的挑战;加强对该类菌株的监控、减少其在医院的传播、积极探寻对该类菌株的有效治疗措施迫在眉睫。

qnr阳性肠杆菌科细菌感染的微生物与临床特征分析

目的分析qnr阳性肠杆菌科细菌感染的微生物与临床特征,为控制qnr阳性菌感染提供临床资料。方法通过PCR扩增筛选产qnr阳性株,通过测序、接合试验进行确证。收集qnr阳性菌株感染患者临床资料,结合其微生物特征进行统计学分析。结果共收集34例qnr阳性细菌感染者资料,结果显示2005年10月—2006年4月期间我院存在qnr阳性菌株的流行,以肠杆菌属、克雷伯菌属为主。药敏试验结果显示qnr阳性菌株对头孢菌素类与氟喹诺酮类高度耐药。结论qnr阳性菌对抗菌药物的敏感性降低,增大了临床治疗的难度,导致患者预后恶化,抗生素选择压力在一定程度上促进了包含质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制的细菌的存在和流行。

Study of isolation of fluoroquinolone-resistant Ureaplasma urealyticum and identification of mutant sites

OBJECTIVE: To study the resistance mechanism of clinical isolates of Ureaplasma urealyticum resistant to fluoroquinolones. METHODS: Thirteen isolates of Ureaplasma urealyticum resistant to six fluoroquinolones were selected out of 184 clinical isolates and their QRDRs (quinolone resistance-determining region) gyrA, gyrB, parC and parE were amplified by PCR. Sequencing results were compared to those susceptible reference strains and a comparison of deduced amino acid sequences were performed. RESULTS: Sequence comparison revealed a C to A change at 87nt of gyrA QRDR leading to the substitution of Asp95 with glutamic acid and a C to T change at 50nt of parC QRDR leading to the substitution of Ser80 with leucine. CONCLUSION: These results suggest that a C to A change at 87nt of gyrA QRDR and a C to T change at 50nt of parC QRDR are associated with fluoroquinolone resistance of Ureaplasma urealyticum.