辣椒耐热基因的AFLP分析

用辣椒耐热自交系A11和热敏自交系B22配置杂交组合,通过高温胁迫处理鉴定其F2代分离群体的耐热性。从123对Taq I/Ase I引物组合中筛选出6对多态性好的引物对F2代耐热、热敏植株进行AFLP分析,共扩增出约11 400条清晰条带,其中2条为稳定的差异,初步获得了2个与辣椒耐热性状相关的AFLP分子标记。研究有助于开展辣椒耐热基因的分子标记辅助选择工作,提高辣椒育种效率和水平,并为分离和克隆辣椒耐热相关功能基因奠定基础。

四川科技人员发现植物新型耐热基因

近日，由四川省科技厅和省农业厅联合组织的“一种抗逆（耐热）基因在水稻中的应用”科技成果在成都通过专家组鉴定。实验报告显示，和正常水稻比，耐热转基因水稻花粉活动能力比前者强3倍，

酿酒酵母耐热相关基因DNA片断的初探

对模板DNAMg2＋的浓度以及PCR反应程序等因素进行了研究，得出了对酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）进行随机扩增多态性DNA（RAPD）分析的优化条件。在此基础上对酿酒酵母耐高温菌株HU-TY-1及原始出发菌株LK的基因组DNA进行RAPD分析，结果表明：两菌株间确实存在着扩增带型上的差异，而这些差异可能与菌株的耐高温性状有关。从而为今后通过四分子分析寻找与耐热相关基因紧密连锁的分子标记，并进一步克隆和定位有关的基因打下基础。

紫花苜蓿MsMBF1c基因在拟南芥中表达提高转基因植株的耐热性

高温能危害植物的生长发育,是限制紫花苜蓿在南方地区推广的主要非生物胁迫因素之一。从“中苜1号”紫花苜蓿品种克隆获得紫花苜蓿多桥蛋白1c(Medicago sativa Multi protein Bridging Factors 1c,MsMBF1c)全长编码序列,发现紫花苜蓿MsMBF1c蛋白与拟南芥AtMBF1c蛋白同源相似性高达72%。分析MsMBF1c在根、茎、叶、花和果实等不同组织中,以及在高温、干旱以及高温和干旱组合胁迫条件下的表达模式,发现该基因在不同组织中的表达强度依次为花>根>叶>茎>果实;MsMBF1c显著受高温、干旱以及高温和干旱组合诱导,分别被上调4.21、2.15和4.59倍。构建pBI121-35S:MsMBF1c过量表达载体并转入模式植物拟南芥(wild type,WT),在T 3代获得卡那抗性不分离的过量表达株系(over expression,OE);利用OE与Atmbf1c突变体(mutant,MUT)杂交的方法获得互补株系(complementary,COM),并通过PCR与qRT-PCR的方法进行分子和表达验证。平行比较OE、COM、MUT以及WT等不同拟南芥株系在高温胁迫后的种子发芽率和幼苗存活率,在正常情况下,OE、COM、MUT以及WT拟南芥株系种子的发芽率没有显著差异(97.6%~100.0%),高温胁迫后,WT发芽率下降到71.7%,MUT发芽率下降到66.0%,显著低于WT(P<0.05);而COM与3个独立的OE株系的发芽率达79.3%~87.0%,显著高于WT(P<0.05)。在幼苗耐热试验中,OE、COM、MUT以及WT株系的存活率在正常条件下差异不显著,高温胁迫后,WT幼苗存活率下降到16.7%,MUT下降到10.0%,显著低于WT(P<0.05);而COM与3个独立的OE株系存活率下降到40.0%~76.7%,显著高于WT(P<0.05)。利用real-time PCR方法,分析HSFA1a、HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 25、WRKY 18、DREB2a等耐热调节关键基因在OE、MUT和WT拟南芥株系的相对表达情况,在正常条件下,HSFA2、WRKY 18与DREB2a在MUT株系中的表达显著低于WT(0.33~0.47)。而在OE株系中,除HSFA1a外,HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 25、WRKY 18、DREB2a的表达相对WT株系都有不同程度上调,幅度为1.74~3.80。高温胁迫后,与WT相比,HSFA2、HSFA3、HSFB 1、WRKY 18与DREB2a在MUT株系中的表达中被显著下调,在OE株系中,只有WRKY 18显著高于WT外,其余基因的表达在OE与WT株系中差异不显著。综合分析,MsMBF1c是一个功能比较保守的耐热调节基因,过量表达MsMBF1c能够互补拟南芥mbf1c突变体耐热缺失表型,并能够增强拟南芥在种子萌发与幼苗生长阶段的耐热性。MsMBF1c可能与AtMBF1c一样,与其他耐热调节关键基因互作调节植物耐热性。

转基因耐热植酸酶对肉鸡生产性能、钙磷平衡和磷排放量的研究

试验选用1日龄爱拔益加（AA）肉仔鸡900只，采用玉米一豆粕型日粮，研究不同水平植酸酶对肉鸡生产性能、钙磷平衡和磷排放量的影响。研究显示：AP降低0．15％后，添加500—750FTU／kg（在37℃，pH5．5条件下，每分钟释放出1μmol无机磷所需的植酸酶数量为1FTU）转基因耐热植酸酶不影响肉鸡采食量、增重、料重比、屠体品质、骨骼质量、血清碱性磷酸酶（ALP）活性及血清钙磷水平（P〉0．05）；添加750FTU／kg转基因耐热植酸酶提高了28日龄肉鸡胫骨强度（P〈0．05）；添加500和750FTU／kg转基因耐热植酸酶，可以使肉鸡粪尿磷排放量降低10．60％和12．64％（P〈0．05）。结果表明：肉鸡日粮中AP降低0．15％后，添加500～750FTU／kg转基因耐热植酸酶在不影响生产性能、屠体品质，保证钙磷平衡的前提下，每1kg日粮磷的排泄量可以降低0．53g和0．63g，粪尿磷排放量降低10．60～12．64％，有利于环保。

双重PCR检测猪产肠毒素性大肠埃希菌耐热肠毒素基因

为了研究猪产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素基因(STa、STb)的临床快速诊断方法,试验以已发表的猪ETEC耐热肠毒素基因保守区为目的片段设计合成了2对可扩增182bp和108bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因的双重PCR检测方法。结果表明:该方法对猪肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌、鼠伤寒沙门杆菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性;对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果STa+5株、STb+2株,其中STa+STb+1株。

用PCR检测副溶血性弧菌耐热溶血素基因

根据副溶血性弧菌的耐热溶血素基因（ｔｄｈ）设计了２对引物，经聚合酶链式反应（ＰＣＲ）检测，所有１８株神奈川试验阳性副溶血性弧菌均呈阳性反应，而６株神奈川试验阴性副溶血性弧菌呈阴性反应，其他９种（３４株）弧菌和８株其他革兰氏阴性菌也呈阴性反应。检测敏感性可达２ＣＦＵ的副溶血性弧菌。

耐热基因线路随机组装构建高版本耐热酿酒酵母

针对现有绿色生物制造体系因控制常温发酵需要消耗大量冷却水所带来的能耗问题,本文以工程化思维,借助合成生物学技术进行耐热基因线路随机组装,重编程酿酒酵母细胞工厂提高其耐热能力.本文选择来自腾冲嗜热菌(Thermoanaerobacter tengcongensis)、嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等来源的32个耐热基因作为核心功能元件,以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)不同强度的组成型启动子(14个)和终止子(10个)作为调控元件,采用Golden Gate组装技术将耐热基因元件和调控元件进行随机组装,基于全自动高通量筛选平台和高通量细胞筛选技术,实现耐热酵母的高通量筛选.从96孔深孔板-1000 mL三角瓶的二级筛选体系,以及合成培养基-真实物料液化醪的二级发酵培养基进行高版本耐热酵母筛选,最终筛选得到工程菌4741-GRX5和4741-ttha0122,42℃培养72 h残留葡萄糖含量分别为对照BY4741的77.4%和74.5%,乙醇产量分别比BY4741提高5.8%和2.5%,建立了全新的耐热菌株筛选平台.

应用聚合酶链反应技术克隆猪源大肠杆菌耐热肠毒素基因

以质粒ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增和克隆了猪大肠杆菌耐热毒素基因ＤＮＡ片段；核苷酸序列分析表明。

极端耐热木聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合表达

目的:为了在枯草芽孢杆菌中整合表达极端耐热木聚糖酶。方法:将嗜热网球菌(Dictyoglomus thermophilum)Rt46B.1的极端耐热木聚糖酶基因xynB通过穿梭载体pDL整合到B.subtilis168染色体上,使其实现表达。结果:极端耐热木聚糖基因在枯草芽孢杆菌中成功整合并表达。结论:基因工程菌B.subtilis168-xynB能外泌表达极端耐热木聚糖酶,且表达水平为0.732IU/mL,比在大肠杆菌中的高。酶学性质表明,此酶分子量约为24kD,其最适反应温度为85℃,最适反应pH值为6.5,且在弱碱性条件下稳定。

小肠结肠炎耶尔森菌耐热性肠毒素B基因(ystB)初步研究

目的研究小肠结肠炎耶尔森菌的耐热性肠毒素B基因(ystB)的分布特征。方法通过聚合酶链反应(PCR)、DNA探针杂交方法与序列分析检测致病性和非致病性小肠结肠炎耶尔森菌携带ystB基因的情况。结果98株非致病性小肠结肠炎耶尔森菌中52株携带ystB基因,占53.06%。全部48株致病性小肠结肠炎耶尔森菌均不携带该基因。结论ystB基因仅存在于部分生物1A型非致病性小肠结肠炎耶尔森菌,而不存在于致病性菌株中。

耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达

将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM 110 0 1的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体 pKK 2 2 3 3中 ,经IPTG诱导后 ,表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性 ,其相对分子质量与天然蛋白质相似 ,表达量为 1.5U/mg ,比出发菌株高

猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗免疫效果试验探究

为评估猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗C株(以下简称伪狂犬疫苗)对猪场伪狂犬病的防控效果,对天津市某猪场引进的约2000头后备母猪分阶段注射伪狂犬疫苗,引进前第4周和第10周各注射1头份,引进后15d注射1头份,并对抗体水平和野毒感染情况进行评估。结果表明,伪狂犬疫苗能使猪群产生较好的免疫应答,免疫后ELISA检测的猪伪狂犬病病毒gB抗体极显著提高(P<0.01)。经过免疫的后备母猪针对伪狂犬经典毒株和变异毒株的中和抗体水平均上升,且免疫前后针对伪狂犬变异毒株的中和抗体效价差异极显著(P<0.01)。可见,该研究所用伪狂犬疫苗无论是针对经典毒株还是变异毒株均能为猪群提供更好的保护力,且对变异毒株产生的中和抗体效价更高,保护力更强,适用于我国猪伪狂犬病的防治。

猪大肠杆菌不耐热肠毒素基因的PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均为阴性。对15株分离自腹泻仔猪的待检菌株进行检测,有3株LT基因阳性。结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查。

用PCR检测鸡大肠杆菌耐热肠毒素基因

用１对合成的特异性核苷酸片段，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），以鸡致病性大肠菌２０个血清型菌株提取的染色体为模板进行扩增，标准阳性对照（ｐＳＬＭ４００）及扩增到 １６个大小为 １５０ ｈｐ的 ＤＮＡ阳性片段，其它 ６株及阳性对照株 ｐＥＷＤ２９９未扩增到产物。斑点杂交表明，所扩增的阳性条带与标准耐热肠毒素基因（ ＳＴ）杂交后呈强阳性。

耐热转基因材料与黑河骨干亲本杂交技术的探讨

以利用外引转基因材料为契机,探讨解决生育期较长的外引材料与当地材料杂交应用的有效方法,着重研究了解决花期不遇的方法和授粉方式、杂交后处理方式等环节对杂交成功率的影响。结果表明:采用对外引材料遮光处理与当地材料分期播种相结合的方式能很好地解决花期不遇问题,采用在每个早晨先去雄再授粉,杂交后用硫酸纸袋加湿棉球的方式,可以大幅提高杂交的成功率。去雄时采用整体去雄法可以提高工作效率和成活率。

猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗免疫效果试验探究

猪伪狂犬基因缺失疫苗免疫可以与自然感染相区分,可以结合相应的鉴别诊断方法,进行猪伪狂犬净化计划,达到较理想的结果。近年来,一些国家已经推广应用基因缺失疫苗来免疫猪群。笔者使用酶联免疫吸附试验和中和抗体试验对引种猪群伪狂犬抗体水平进行检测和分析,作为猪场使用伪狂疫苗的理论依据,对猪场猪伪狂犬病抗体水平和野毒感染情况进行评估,从而来验证猪伪狂犬病基因缺失耐热保护剂活疫苗C株在用于我国防治和根除猪伪狂犬病的适用性。

浙江发现水稻“耐热基因”

最近，浙江省农科院专家研究发现，抑制水稻中一个调控基因可使水稻在高温下仍然能维持较高的品质，这个“耐热基因”还有望通过基因编辑方法来改良水稻品种。

油菜耐热基因(BnTR1)转化多年生黑麦草丛生芽的研究

油菜耐热基因(BnTR1)克隆自油菜,编码一种E3连接酶.为验证它的抗逆功能,本研究用携带BnTR1和新霉素磷酸转移酶(neomycin phosphotransferase,nptⅡ)基因的植物表达载体pCAMBIA2301-TR1的根癌农杆菌EHA105,对多年生黑麦草丛生芽进行遗传转化.经共培养和巴龙霉素筛选培养,获得了175株抗性植株.通过PCR和RT-PCR检测,获得62株转基因植株.结果表明,外源BnTR1基因已整合到转基因植株基因组中并在转录水平上表达.初步抗旱检测表明,BnTR1基因能明显提高转基因植株的抗逆能力.