不同条件对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶活性影响的研究

耐热核酸酶作为产肠毒素型金黄色葡萄球菌的生长标志,对其研究具有重要的意义.本实验通过比较不同pH值、生长时间、Na+浓度、加热时间等因素对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶分泌及活性的影响.反映了耐热核酸酶是一种性质十分稳定的蛋白质,耐热核酸酶活性检测应用于加工处理食品的金黄色葡萄球菌污染方面具有重要意义.

植物多酚对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶抑制作用的研究

利 用 甲 苯 胺 蓝 法 观 察 了 不 同 植 物 多 酚 提 取 物 对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 耐 热 核 酸 酶 活 性 的 抑 制 作 用 。结 果 表 明 ,在 一 定 的 浓 度 范 围 内 (0～2m g/m L),多 酚 提 取 物 均 对 金 黄 色 葡 萄 球 菌 耐 热 核 酸 酶 的 活 性 存 在 抑 制 作 用 , 其 中 苹 果 多 酚 和 茶 多 酚 的 抑 制 效 果 最 佳 , 而 温 度 、pH 变 化 对 多 酚 提 取 物 抑 制 耐 热 核 酸 酶 的 活 性 无 明 显 影 响 。

金黄色葡萄球菌调控基因agr及sae对其耐热核酸酶分泌的影响

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种重要的人畜共患病病原,它能产生一种由nuc基因编码的胞外耐热核酸酶。耐热核酸酶是金黄色葡萄球菌的毒力因子之一,agr及sae位点是编码金黄色葡萄球菌的主要毒力调节因子,研究发现sae调节位点在影响耐热核酸酶的表达上占主导地位。分析金黄色葡萄球菌各毒力因子和金黄色葡萄球菌现有疫苗,为解决金黄色葡萄球菌的耐药性,寻找更好的防治方法,有必要进行探索性实验寻找一种因素或药物,用来阻抑sae调控因子对耐热核酸酶的分泌过程进行调节,从而为金黄色葡萄球菌的防治研究提供一种新材料。

金荞麦对金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶活性的影响

的 :观察金荞麦对金黄色葡萄球菌胞外耐热核酸酶活性的影响。方法 :采用甲苯胺蓝法 ,检测不同浓度金荞麦药液与该酶混和作用下该酶的酶环直径。结果 :当金荞麦药液浓度为 7.8mg/ml时即可明显影响胞外耐热核酸酶的酶环大小 ;至 6 2 .5 mg/ml时 ,已无酶环出现。结论

金黄色葡萄球菌新型耐热核酸酶(Nuc2)的定点突变与特性分析

本研究选取了F60、A62、T102和Y135这4个可能的关键位点,采用定点突变的方法成功构建了5个Nuc2的单点和多点突变体。体外表达并纯化这些核酸酶,对其活性、耐热性和二级结构进行测定。结果表明:经方差分析(p<0.05),T102M和F60A/A62L/T102M/Y135V的核酸酶活性与野生型相比较显著下降,并且F60A/A62L/T102M/Y135V的酶活性基本丧失;T102M和F60A/A62L的耐热性明显弱于野生型;T102M和F60V/A62L的二级结构中α-螺旋结构的含量明显低于野生型,F60A/A62L/T102M/Y135V的二级结构中包含有无规卷曲。因此,推断T102是维持Nuc2核酸酶活性、耐热性和二级结构稳定的一个关键位点;F60、A62、T102和Y135及其与邻近氨基酸之间的相互作用对维持Nuc2的性质稳定起着重要作用。

耐热核酸酶快速鉴定金黄色葡萄球菌

耐热核酸酶试验快速鉴定金黄色葡萄球菌,可缩短鉴定时间。将标本接种于肉汤培养基中,取肉汤培养基经加热处理后加入脱氧核糖核酸(DNA)板上。TNase一旦呈阳性反应,不会再转为阴性,且易判断,TNase试验很适合临床应用。

凝固酶及核酸酶试验综合评价金黄色葡萄球菌致病力的实验研究

〔目的〕本文通过简便、快速、成本低廉的耐热核酸酶测定 ,反映金黄色葡萄球菌产生肠毒素情况 ,并结合血浆凝固酶综合评价其致病力。〔方法〕耐热DAN酶试验 ,从不同来源样品中分离出的 36株试验菌与标准株 (6 5 38- 95 )在甲苯胺蓝核酸琼脂培养基 (Tris.DAN)上打两排孔 ,一组经加热处理的培养物 ;另一组加未经热处理培养物 ,37℃ 3h观察结果。血浆凝固酶试验 :用 1:4新鲜兔血浆按食品卫生检验标准 (GB4789.10— 94.6 .1.5 )进行操作。〔结果〕136株菌血浆凝固酶与耐热核酸酶阳性符合率为 90 .4%,其中 85 %菌株可引起食物中毒。〔结论〕这次实验研究说明了耐热核酸酶与血浆凝固酶二者结果反映出该菌引起食物中毒的可能程度 ,适合于目前我国多数基层实验室开展 ,为卫生监督执法提供准确可靠的依据。

环介导等温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

研究了用环介导等温扩增技术(LAMP)快速检测金黄色葡萄球菌的方法。首先根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因nuc中的保守序列设计特异性引物,建立并优化反应条件,然后通过对金黄色葡萄球菌及其他菌种的对比试验,验证引物的特异性并确定方法的检测限。结果表明:在用加环引物的条件下,LAMP反应体系于60℃反应35 min即可扩增成功,而用未加环的引物则需45 min才能看到白色絮状沉淀。对2株金黄色葡萄球菌、3株大肠杆菌、1株醋酸杆菌、1株沙门氏菌进行同步检测,结果发现2株金黄色葡萄球菌均显示阳性,而其他菌株均显示阴性。研究确定了LAMP检测纯培养的金黄色葡萄球菌的最低检测限为100 fg,比PCR的最低检测限低2个数量级。由研究结果可以看出,LAMP法检测金黄色葡萄球菌操作简便,有较高的特异性、灵敏度,为快速检测食品中的致病菌提供了较好的技术平台。

金黄色葡萄球菌在酸奶中的生长状况与产毒规律研究

将酸奶发酵剂和不同菌数的金黄色葡萄球菌同时接种到原料乳中,检测酸奶发酵与冷藏过程中酸奶的pH值、乳酸含量、金黄色葡萄球菌菌数以及成品酸奶中金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的活性。结果表明,当原料乳中金黄色葡萄球菌初始接种量分别为1.8×10、1.8×102cfu/ml时,在酸奶发酵与冷藏过程中均未检测出金黄色葡萄球菌,成品酸奶中金黄色葡萄球菌耐热核酸酶活性呈阴性;当原料乳中金黄色葡萄球菌的接种量分别为8.5×103、2.7×104、2.7×105、1.8×106cfu/ml时,在酸奶发酵过程中(42℃、4～5h),金黄色葡萄球菌菌数呈明显上升趋势;在冷藏(4℃)过程中,金黄色葡萄球菌菌数呈逐渐下降趋势;对于原料乳中金黄色葡萄球菌初始接种量为8.5×103cfu/ml的样品,在冷藏的第3d就检测不出金黄色葡萄球菌,成品酸奶中耐热核酸酶活性呈阳性。在酸奶发酵与冷藏过程中同时伴随着乳酸含量的升高和pH值的降低。

PCR扩增Nuc基因检测奶牛乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌

为建立奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌致病菌株的检测方法,依据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列,设计合成特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增Nuc基因,并将扩增基因克隆入T载体,进行序列测定,对所分离的奶牛乳腺炎病原菌进行鉴定。结果显示:金黄色葡萄球菌扩增出特异性条带,大小为694bp;其他菌株未出现条带。敏感性检测的最低浓度为1.25×103cfu/mL。本试验所建立的方法具有特异性强、敏感度高的特点。

葡萄球菌对动物性食品的污染与检测

葡萄球菌污染食品后在适宜的条件下产生肠毒素,引起食物中毒。其中以金黄色葡萄球菌致病力最强,也是与食物中毒关系最密切的一种。1 葡萄球菌的生物学特性 葡萄球菌是G^+球状菌,其排列呈葡萄状。在一般培养基上生育良好,生长最适温度37℃,最适PH7.4,需氧或兼性厌氧。普通琼脂上培养18—24小时后,形成圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的中等大菌落。

葡萄球菌食物中毒及其检测方法

葡萄球菌食物中毒系因吃入含有葡萄球菌肠毒素的食物所引起,故属毒素型食物中毒。其临床特征因所感染菌型不同而略有差异。潜伏期短,起病急,呕吐严重,时有腹泻,通常少发热,恢复较快。一。

西宁市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因型分布研究

为了掌握金黄色葡萄球菌在西宁地区食品中的分布规律,了解不同来源、不同种类食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及其5种肠毒素基因型(A、B、C、D、E)的分布状况。在西宁市地区采集108份食品样品,按食品微生物学(GB 4789.10-2010)金黄色葡萄球菌检验方法结合Baird-Parker氏鉴别培养基筛选金黄色葡萄球菌,通过对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因的PCR扩增以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对疑似菌落进行鉴定;同时利用PCR技术对金黄色葡萄球菌的5种肠毒素基因型进行分型检测。经分离及生化鉴定,从108份样品中得到60株疑似金黄色葡萄球菌、PCR方法及MALDI-TOF MS结果,确认为金黄色葡萄球菌,检出率为55. 56%;同时60株金黄色葡萄球菌分别检出A型6株、B型34株和D型2株,共检测到42株,检出率为70%,C型和E型未被检测到。表明西宁市食品中金黄色葡萄球菌的污染处于一个相对较高水平,因食品来源与种类不同,金黄色葡萄球菌的污染情况和毒素基因的分布情况也各不相同,对西宁市食品质量安全控制具有参考意义。

原料乳中金黄色葡萄球菌环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

为了建立原料乳中金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)在保守区域设计特异性引物,建立LAMP检测方法,并用于原料乳中金黄色葡萄球菌的快速检测。结果表明,针对金黄色葡萄球菌的基因组DNA,使用设计合成的4条引物和建立的LAMP方法能够有效检测金黄色葡萄球菌DNA,每25.0μl反应体系的灵敏度为110.0 fg,并且此方法针对金黄色葡萄球菌具有良好的特异性。针对原料乳中金黄色葡萄球菌的污染,建立的LAMP检测方法的检测限为67 CFU/ml。本研究结果为进一步将LAMP方法应用于食品中金黄色葡萄球菌的安全检测奠定了基础。

基于GB 4789.10-2016的银白色葡萄球菌鉴定方法的改进

探讨基于食品安全国家标准GB 4789.10-2016鉴定银白色葡萄球菌(Staphylococcus argenteus)的适用性,并提出相应的改进方法。采用GB 4789.10-2016第一法与PCR鉴定方法(目的基因为nuc1或NRPS)同时对193株金黄色葡萄球菌分离株和6株银白色葡萄球菌分离株进行鉴定,比较两者结果。结果表明,GB 4789.10-2016和nuc1-PCR方法将银白色葡萄球菌错误鉴定为金黄色葡萄球菌,而NRPS-PCR方法可以区分两者。研究表明:在GB 4789.10-2016的基础上,结合NRPS-PCR建立一套检验流程,可鉴定并区分金黄色葡萄菌和银白色葡萄菌。

食源性金黄色葡萄球菌相关毒力基因的时序性表达规律研究

为了研究西宁市不同区域食品中主要金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)与耐热核酸酶(nuc)基因的时序性表达规律及二者之间的相关性,本试验利用实时荧光定量多聚酶链式反应(RT-qPCR)技术在mRNA水平对金黄色葡萄球菌A、B、E三种SE基因及nuc基因在不同生长阶段的相对表达量进行研究。结果表明:不同基因型的金黄色葡萄球菌在不同来源、不同种类的食品中的表达水平有显著差异。SEA与nuc基因的表达规律一致;SEB和SEE与nuc基因的表达规律则不一致,且SEB高表达。本试验结果为金黄色葡萄球菌毒力机制研究与食品质量安全控制提供了参考。

快速检测食品中金黄葡萄球菌的检测方法

金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。据报……

一种快速鉴定猪舍空气样品中金黄色葡萄球菌的方法

显色培养基是一种新的微生物培养检测技术,通过它与普通PCR技术的结合能够快速而准确地鉴定金黄色葡萄球菌。首先用安德森采样器采集猪舍中的空气样品,采样介质是金黄色葡萄球菌显色培养基,通过培养并继续分离后刮取菌苔并煮沸后进行PCR扩增。结果在用显色培养基分离的菌中有84.4%的菌是金黄色葡萄球菌。并通过API20E标准生化鉴定系统分析鉴定所得菌株,证明用此种方法所得结果与API20E标准生化鉴定系统分析鉴定所得菌株的符合率高达96.4%。因此显色培养基与普通PCR结合是一种快速准确地鉴定空气中金黄色葡萄球菌的方法。

PCR法直接检测鲜乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A的研究

目的建立一种快速敏感检测鲜乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。方法将金黄色葡萄球菌模拟污染鲜乳后,提取菌体DNA,以大肠杆菌作对照,用双重PCR法扩增金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因和肠毒素A基因。结果在含金黄色葡萄球菌(1×104个/ml)的模拟鲜乳样品中检出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因和肠毒素A基因,而大肠杆菌对照未出现特异性片段;PCR方法灵敏度分析显示,其检测限为100 cfu/ml。结论建立的直接检测金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因和肠毒素A基因的双重PCR方法,具有速度快、特异性强、灵敏度高和易操作的特性,可用于金黄色葡萄球菌食源性疾病与食物中毒的实验室诊断。