宁波副溶血性弧菌临床株毒力基因与多位点序列分型研究

目的了解宁波地区副溶血性弧菌临床分离株毒力基因分布以及分子分型特征。方法收集来源于食物中毒和散发腹泻患者副溶血弧菌菌株,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh),利用多位点序列分型(multi-locus sequence typing,MLST)进行分子分型。结果2006—2012年共分离临床株248株,选择48株进行毒力基因和MLST分型研究。42株tdh+,为93.75%;11株trh+,为22.92%。48株菌株可分为9个ST型和一个未分型,ST3有32株,占66.67%;ST265有5株,占10.42%;ST120有3株,占6.25%。ST3克隆群中tdh+/trh-菌株有25株,占78.16%。与全国其他地区比较,在宁波临床株中发现ST262。结论 tdh+型是宁波地区副溶血性弧菌优势菌株。有9种ST型,以ST3克隆为主,其次为ST265和ST120。ST3克隆中以tdh+/trh-型为主。另发现1个独特的ST262菌株。

海盐县副溶血性弧菌血清分型和毒力基因携带状况分析

目的了解海盐县副溶血性弧菌的优势血清型及毒力基因携带状况。方法收集2015—2016年海盐县腹泻和食物中毒患者(人源株)、食物中毒调查样品(食源株)和海产品(海产株)中分离的96株副溶血性弧菌株,根据GB/T 4789.7—2013《食品微生物检验副溶血性弧菌检验》进行血清分型试验,并采用荧光定量PCR检测耐热直接溶血素基因(tdh)、耐热直接溶血素相关基因(trh)和不耐热直接溶血素基因(tlh)。结果 96株菌株的血清型以O3∶K6和O4∶K8为主,分别占35.42%(34株)和33.33%(32株)。人源株中检出的O3∶K6和O4∶K8型合计占人源株菌株数的87.76%,食源株中检出的占76.67%;海产株中未检出O3∶K6和O4∶K8型。96株菌株tlh基因均阳性,阳性率为100.00%;58株tdh基因阳性,阳性率为60.42%;1株trh基因阳性,阳性率为1.04%。人源株的毒力基因携带率为93.88%,高于食源株的43.33%(P<0.05);海产株中均未检出tdh和trh基因。O4∶K8型菌株毒力基因携带率为87.50%,O3∶K6型菌株毒力基因携带率为76.47%;O3∶K6和O4∶K8型菌株的毒力基因携带率合计为81.82%,高于其他血清型菌株的16.67%(P<0.05)。结论海盐县2015—2016年副溶血性弧菌的优势血清型是O3∶K6和O4∶K8,血清型与毒力基因携带有一定程度关联,O4∶K8血清型毒力基因携带率最高,其次为O3∶K6血清型。

深圳市副溶血性弧菌血清型及毒力基因特征研究

目的了解从深圳市食源性疾病患者和环境中分离的副溶血性弧菌的血清型和毒力基因特征。方法2006～2008年从食源性疾病患者和海水、海产品等外环境分离到133株副溶血性弧菌,按GB/T4789.7-2008进行血清学鉴定,用PCR技术检测耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)。结果133株副溶血性弧菌中,以O3(43.6%)、O1(16.5%)、O4(16.5%)群为主。84.4%(76/90)的食源性疾病样本分离株携带毒力基因tdh,无单独携带trh基因的菌株;79.1%(34/43)的环境样本分离株不携带tdh和trh毒力基因,无同时携带两种基因的菌株。结论近年来引起深圳市食源性疾病的副溶血性弧菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株,在外环境中检出的绝大多数副溶血性弧菌tdh基因和trh基因均为阴性;O3仍为主要的流行群。

结合流式细胞仪检测技术的菌体原位PCR扩增

建立一套原位PCR检测方法 ,联合流式细胞仪作为检测工具 ,作为基因水平转移研究中的基因监控手段。通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数 ;细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增 ,产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测 ,并辅以荧光显微镜镜检。扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光 ,与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分。流式细胞仪检测结果也显示 ,阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别。完成了对目标细菌的原位PCR扩增 ,并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测。由此表明isPCR

市售生食水产品污染副溶血性弧菌的病原学分析

目的通过对2011～2012年合肥市售生食水产品中分离的副溶血性弧菌血清型、毒力基因和耐药性的研究,了解生食海产品污染的副溶血性弧菌的病原学特征。方法按GB/T4789.7-2008方法进行分离鉴定,用PCR技术检测不耐热溶血素(tlh)基因、耐热直接溶血素基因(tdh)和耐热直接溶血素相关溶血素基因(trh)。药敏试验采用K-B法。结果两年检获的65株副溶血性弧菌分属11个血清群,以O2(41.54%)、O1(12.31%)、O3(12.31%)群为主。65株菌均不携带tdh和trh毒力基因,tlh基因全部阳性。药敏结果显示,65株菌对15种抗生素显示出较高的青霉素(100.0%)和氨苄西林(95.4%)耐药性。结论近年来合肥市售生食水产品中污染的副溶血性弧菌以O2血清型为主,tdh基因和trh基因均为阴性。