耐热碱性蛋白酶的纯化及其主要性质研究

由我国新疆沙漠土样中分离获得的栗褐芽胞杆菌 CPU 94 0 7(Bacilus Badium CPU94 0 7) ,能产生耐热碱性蛋白酶 ,以葡萄糖 1.0 % ,蛋白胨 0 .5% ,酵母膏 0 .5% ,Mg SO4 0 .0 2 5%为培养基 ,在 p H9.3,37℃振荡培养 4 8h,发酵液酶活力为 5796u/ml。粗酶经 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀 ,DEAE- C(DE- 32 )两次层析 ,Sephadex G- 10 0层析 ,得到 SDS- PAGE电泳均一样品 ,比活 4 0 50 u/mg,是粗酶比活的 9倍。该酶的分子量为 2 7.5k D,最适 p H为 9.6,最适温度为 57℃ ,Cu2 +与 Ag+对其活力有明显抑制作用 ,在 50℃处理 1h后酶活力基本不变 ,50℃处理 3h后 ,酶活力降到原来的56%。

耐热碱性蛋白酶AH-101的异源表达、酶学性质与洗涤应用研究

目的:通过NCBI(National Center for Biotechnology Information)数据库筛选可以应用于洗涤工业的蛋白酶,使用地衣芽孢杆菌进行高效表达。方法:利用同源重组的方式将蛋白酶基因整合到地衣芽孢杆菌基因组中,研究重组蛋白酶的酶学特性和洗涤效果。结果:该重组酶的最适作用温度为60℃,最适pH为11.0;AH-101具有良好的耐热性,可以在20~55℃范围内保持稳定,在60℃保温1 h,剩余活性仍高于30%;此外,该酶与表面活性剂和液体洗涤剂具有良好的兼容性,在终浓度为0.1%和0.5%的表面活性剂和液体洗涤剂中孵育2 h,重组酶的酶活力损失小于30%。结论:成功构建了一株含有外源蛋白酶的地衣芽孢杆菌重组菌株,对重组蛋白酶的特性和洗涤效果进行研究,该重组蛋白酶可以作为环保型酶制剂应用到洗涤工业中。

耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因aprE539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%~70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65~70℃;在pH6.0~12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%;Cu^2+、Mn^2+、Ca^2+和Mg^2+对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。