疏棉状嗜热丝孢菌耐热脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

综合考虑密码子偏爱性、RNA稳定性以及自由能等因素,对疏棉状嗜热丝孢菌(Thermomyces lanuginosus)耐热脂肪酶(tll)基因序列进行密码子优化并全基因合成。将合成的tll基因连接到克隆载体,然后亚克隆到表达载体pHGWPT-tll,采用根癌农杆菌介导转化无孢黑曲霉SH-2。经过三丁酸甘油酯平板、SDS-PAGE以及Western Blotting鉴定,成功表达了tll基因。发酵72h,转化子脂肪酶酶活最高达36U/mL。转化子经等离子诱变得到的突变株的脂肪酶比活力比出发菌株提高约37%。

一株耐热脂肪酶产生菌的鉴定及其脂肪酶基因的克隆

目的:从北方堆肥土样中分离、筛选获得产耐热脂肪酶的嗜热菌株FS32b,确定该菌株的分类学地位及其所产耐热脂肪酶基因。方法:通过研究该菌株16SrDNA基因序列的系统进化树,进行菌种分类鉴定并利用PCR技术获得其脂肪酶基因。结果:FS32b与报道过的Bacillus subtilisX60646有紧密的亲缘关系,二者的16S rDNA序列相似性为99%,其脂肪酶基因经序列测定分析表明,该菌株含长度为639bp的耐热脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)。此片断编码有213个氨基酸的酶。结论:FS32b初步鉴定为Bacillus subtilis,其脂肪酶基因的克隆为以后高效基因工程菌的构建奠定了基础。

一株耐热脂肪酶产生菌的筛选、产酶及催化条件研究

通过平板划线分离法,从15份土样中筛选到18株产耐热脂肪酶菌株。经复筛选取K2菌进行产酶条件研究,并通过盐析沉淀法分离脂肪酶,研究该酶最佳催化条件。实验结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜发酵条件为培养温度55℃,初始pH5,摇床转速200 r/min,发酵时间48 h。采用硫酸铵分30%与75%两步盐析分离脂肪酶,经真空低温冷冻干燥浓缩酶液,用pH 6.0磷酸缓冲液溶解后,在50℃,pH=7条件下,对乳化橄榄油具有最高催化活性。

高产耐热脂肪酶嗜热脂肪地芽孢杆菌的选育

采用氮离子注入技术对耐热脂肪酶产生菌嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobaciflus stearothermophilus)L4进行诱变,筛选获得酶活力有较大提高且传代稳定的正突变菌株L4-3;再对L4-3进行紫外线诱变,得到脂肪酶活力提高的正突变菌株L4-3-2,其脂肪酶活力达25.71 U/mL,较原始菌株L4提高511.9%。高产突变株L4-3-2所产脂肪酶的最适作用温度为50℃,70℃保温60min的剩余酶活为82%,最适作用pH为7.0～8.0,为一种耐热碱性脂肪酶。

1株产耐热脂肪酶根霉突变株的选育

采用紫外线、硫酸二乙酯、紫外线和硫酸二乙酯复合对实验室保藏的1株高产耐热脂肪酶的根霉SFE-L01菌株进行诱变处理,筛选获得1株突变株UD-23,产耐热脂肪酶活力比出发菌株提高了112.39%,达24 000.00 U/mL。对突变株UD-23的产酶条件及部分酶学性质进行了研究,结果表明,突变株UD-23所产脂肪酶最适作用温度为60℃,且具有良好的热稳定性。条件优化后,该突变株产酶酶活达30 000.00 U/mL,比优化前提高了25%。

用于环保的耐热脂肪酶产生菌Wi-3的诱变及其酶学特性研究

从福州温泉澡堂排水道中分离筛选到一株可用于环保的耐热脂肪酶产生菌株Wi-3,经UV+NTG复合诱变,选育出突变株Wi-3-3和Wi-3-5,其酶活比出发菌株分别提高了32.3%和11.8%。对Wi-3-3的产酶条件进行研究,结果表明在35℃、起始pH值7.02、50 mL摇瓶装量为35 mL、接种量为4 mL(菌浓1.5×108个.mL-1)、发酵周期为35 h的培养条件下产酶最高。用硫酸铵提取Wi-3-3发酵液中脂肪酶进行酶学特性的初步研究,结果表明其最适反应pH值为8.6、最适反应温度为55℃。

1株耐热脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件研究

通过固体平板法,从食堂下水道污泥中筛选到1株耐热脂肪酶产生菌LJM-1,采用摇床培养法对该菌株的产酶条件进行了研究,结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜培养基组成是:玉米粉淀粉6.0%﹑酵母粉3.5%﹑KH2PO40.3%﹑MgSO4.7H2O0.05%、(NH4)2SO40.5%﹑NaCl0.1%;适宜培养条件:培养温度40℃,初始pH7.7,摇床转速150r/min,装液量100mL/250mL三角瓶,接种量2.5%(体积分数),种龄72h,发酵时间48h。在此条件下,脂肪酶最高酶活为112.6U/mL。在单因素试验的基础上,采用正交试验对棉粕发酵脱毒条件进行了优化,得到最佳发酵条件是:初始pH7.7,培养温度40℃,接种量1.5%,发酵周期2d,酶活力达131.6U/mL。

类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶的研究

从福建省福州市温泉澡堂污水浸润土壤中分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶产生菌——类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)F331。产酶最适条件为:碳源小麦粉,氮源豆饼粉,起始培养pH9.4～9.5,培养温度24～26℃,培养周期32～34h。经硫酸铵盐析、Sepharose 4B和Sephadex G-200柱层析得到纯化的酶组分。该酶最适作用温度50℃,最适作用pH 10.0,60℃保温80min酶活基本不损失,在pH 7.0～10.0范围内酶蛋白稳定:Ca^(2+)和Mg^(2+)对酶有激活作用,Pb^(2+).Zn^(2+)、Fe^(2+)和Co^(2+)对酶活有抑制作用。该酶分子量45700。

耐热性脂肪酶及其对UHT乳品质的影响

UHT(超高温)乳饮用方便、营养丰富、备受消费者欢迎,近年来在我国的乳品消费结构中增长迅速,但是UHT乳在整个贮存过程中常因其中残留的脂肪酶、磷脂酶等因素而导致脂肪上浮、脂肪分解等现象,使产品的风味、品质变差,主要从耐热性脂肪酶对UHT乳品质的影响出发,综述了国内外对牛乳中主要耐热脂肪酶的研究现状,并提出今后深入研究应关注的方向。

一株产耐热碱性脂肪酶芽孢杆菌的筛选及其所产酶性质的研究

从武汉市白沙洲沙鸥食用油总厂分离筛选到一株耐热碱性脂肪酶的产生菌 ,经鉴定为产芽孢的短杆菌 ,革兰氏阳性 .该菌株的最适生长温度为 4 5℃ ,所产酶的最适作用温度为 60℃ ,最适pH为 1 0 .0 ,且pH在 8.0～ 1 1 .

类产碱假单胞菌耐热碱性脂肪酶基因的克隆

将类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligene)总DNA经Sau3AI部分酶解后的35～50kbDNA片段与经BamHI线性化及CIAP处理过的粘粒pIJ285连接,以大肠杆菌LE392为受体,构建类产碱假单胞菌的基因文库。通过三丁酸甘油酯平板和橄榄油平板法检测克隆子,获得一株具有耐热碱性脂肪酶活性的菌株LE392(pHZ1401)。随后将pHZ1401上的外源DNA片段进行亚克隆,从而获得了具有脂肪酶活性的菌株HB101(pHZ1402)和HB101(pHZ1403),它们分别携带有2.9kb和3.0kb的外源片段。两外源片段约有2kb的重叠区。HB101(pHZ1403)所分泌的脂肪酶活性比HB101(pHZ1402)高4倍,是出发菌的5倍。

脂肪酶产生菌Bacillus subtilis FS321的分离鉴定及其产酶条件的初步优化

从北方堆肥试样中分离筛选得到1株中度耐热脂肪酶产生菌,编号为FS321。对该菌株进行产酶条件的初步优化,得到了摇瓶发酵条件:产酶培养基M4,发酵周期为48～60 h,摇瓶发酵温度为37℃,通气量为25 mL/250 mL锥形瓶。所产脂肪酶在50℃,pH 9.0时表现最高活性。为了鉴定该菌株,分析该菌的细胞脂肪酸谱,克隆测序了其16S rDNA基因序列,系统进化树及细胞脂肪酸组分分析均表明,FS321与Bacillus subtilis具有最紧密的亲缘关系。

UHT奶残留耐热性脂肪酶的灭活研究

牛乳中的一些脂肪酶具有较强的耐热能力,经过超高温灭菌后仍有残留,并导致产品中出现一些质量问题。本研究系统地分析了中温加热方式对UHT奶残留耐热性脂肪酶的灭活效果。结果表明,中温可以对耐热性脂肪酶产生较高的灭活作用,并考虑生产成本和连续性生产的需要,建议最佳灭活温度为60℃,最适放置时间为15min。

用马克思克鲁维酵母生产一种耐热的胞外脂肪酶

将马克思克鲁维酵母在添加了几种具有脂肪分解活性的潜在诱导物(甘油三酯、脂肪酸)的复合培养基中进行深层培养。当在培养基补充入2g／L尿素和5g／L甘油三丁酯时。

乳中耐冷菌脂肪酶活性测定方法进展

耐冷菌广泛存在于空气和土壤中,也是原料乳中常见的微生物。耐冷菌危害风险存在于乳业生产链每个环节。耐冷菌及其产生的耐热性脂肪酶是影响乳品质量安全的重要因素之一。耐冷菌本身危害通过加热基本可以消除,但是部分耐冷菌产生的耐热性脂肪酶在经过巴士杀菌甚至UHT处理后可能仍然有一定酶活力残留,他们能继续分解乳中脂肪产生游离脂肪酸,导致乳品品质下降,货架期缩短。本文阐述了耐冷菌及耐热性胞外酶的概念及特性,并总结比较了检测脂肪酶活力的方法。检测脂肪酶的活性对于预测、控制原料乳和乳制品的质量具有重要意义。

嗜冷菌及其耐热性酶对乳制品品质的影响

原料乳中的嗜冷菌及其产生的耐热性蛋白酶和脂肪酶是引起液态乳制品多种质量问题的主要原因之一。阐述了嗜冷菌及其耐热性酶的概念及特性,论述了嗜冷菌及其耐热性酶对液态乳制品品质的影响,并对嗜冷菌的检测方法及控制措施进行了展望。

嗜冷菌产生的耐热性脂肪酶对液态奶品质的影响

嗜冷菌产生的耐热性脂肪酶是引起乳及乳制品质量缺陷的主要原因之一。大多数嗜冷菌产生的脂肪酶具有非常高的耐热性,即使经过巴氏处理后仍然能够存活。残留的脂肪酶能分解脂肪产生游离的脂肪酸,导致乳及乳制品的风味劣化。通过检测脂肪酶的活性可以达到预测、控制原料乳和乳制品的质量。