冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌的分离、鉴定及耐砷能力测定

目的分析冬虫夏草产地土壤中的耐砷细菌,为研究冬虫夏草砷超富集机制提供依据。方法对五个冬虫夏草产地土壤中耐砷细菌进行分离、纯化,筛选出一批耐砷细菌,对其中两株优势菌株XB和XNQ进行形态、生理生化、16S rRNA鉴定,并利用硝酸银溶液(AgNO3)与三价砷As(Ⅲ)、五价砷As(Ⅴ)的颜色反应,检测两株细菌对砷的氧化还原性,最后对菌株的耐砷能力进行测定。结果通过菌落形态特征分析,菌株XB和XNQ均为革兰氏阴性菌,主要脂肪酸均为C18:1ω9c、C16:0、Summed Feature 3(C16:1ω7c/C16:1ω6c)和C12:0;通过16S rRNA基因的序列分析,菌株XB的16S序列与已知种Acinetobacter guillouiae的序列APOS01000028相似性为99.72%,菌株XNQ与已知种Acinetobacter nosocomialis的序列APOP01000014相似性为99.86%;定性硝酸银染色实验证明菌株XB、XNQ具有砷还原性,都是As(Ⅴ)还原细菌;菌株XB和XNQ对As(Ⅲ)的耐受性为20 mmol·L-1,对As(Ⅴ)的耐受性为70 mmol·L-1。结论分离鉴定的两株优势细菌XB和XNQ分别为不动杆菌属的A.guillouiae和A.nosocomialis,均为革兰氏阴性菌,为砷还原细菌,对As(Ⅲ)和As(Ⅴ)的耐受性相同,对As(Ⅴ)的耐受性略高于As(Ⅲ)。

高耐砷真菌的分离及其耐砷能力

从湖南石门县及郴州市重金属矿周边地区采集的6个砷污染土壤样品中,初步分离得到13株具有较强耐砷能力的真菌菌株,其中3株真菌的耐砷能力最强,经形态与分子鉴定分别为微紫青霉(Penicillin janthinellum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和棘孢木霉(Tri-choderma asperellum).培养试验表明:微紫青霉、尖孢镰刀菌和棘孢木霉分别在30000mg·L-1、30000mg·L-1和20000mg·L-1的砷胁迫平板中表现出很好的菌落生长状况;在砷浓度分别为0～50、0～50和0～80mg·L-1的液态培养基中培养2d后,尖孢镰刀菌、棘孢木霉和微紫青霉的生物量均随砷浓度增加而增加,且在相应最高浓度(50、50、80mg·L-1)下的生物量显著高于不加砷的对照.此外,高浓度砷对该3株真菌的产孢能力没有影响.

新疆奎屯垦区耐砷真菌的分离

从新疆奎屯垦区123团采集的27个土壤样品中,分离得到5株具有较强耐砷能力的真菌菌株,其中耐砷能力最强的菌株为KT-3,,经形态学鉴定为木霉属(Trichoderm)真菌。耐砷试验结果表明:KT-3菌株最高耐砷浓度为20 000 mg/L。