青蒿琥酯联合左氧氟沙星对耐碳青霉烯类大肠埃希菌抗菌活性的影响

目的 探讨青蒿琥酯与抗生素联用对耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)抗菌活性的影响。方法 收集分离的CRECO 20株,采用肉汤稀释法测定抗菌物质青蒿琥酯(ASN)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶(CAZ)、亚胺培南(IMP)最小抑菌浓度(MIC)。用棋盘法测定ASN与LEV、CAZ、IMP协同抗菌活性;用细菌生长曲线法观察不同处理组CRECO临床菌株(E5)生长的情况;用RT-PCR检测外排泵基因以及调控基因的表达。结果 抗菌物质ASN、LEV、CAZ、IMP的MIC50分别为>8 192、64、2 048、32μg/mL。协同抗菌试验显示:ASN (1 024μg/mL)与LEV联用时,LEV的MIC50由64μg/mL降至16μg/mL (即1/4 MIC50),联合作用效果以协同为主;与CAZ联用时,CAZ的MIC50由2 048μg/mL降至1 024μg/mL (即1/2 MIC50),联合作用效果以相加为主。生长曲线显示,ASN联合LEV能有效抑制CRECO生长,曲线走向平缓。20株菌株全部携带外排泵基因AcrA和AcrB基因。RT-PCR结果显示ASN联合LEV可降低外排泵基因AcrB表达。结论 ASN对CRECO无抗菌活性,但ASN联合LEV能有效增强抗生素的抑菌作用,其协同抑菌机制与降低外排泵基因AcrB表达相关。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因检测及同源性分析

目的探讨耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistan Escherichia coli,CREco)的耐药基因分布情况,并进行同源性分析,为细菌感染的治疗和预防其传播提供理论依据。方法自2016年1月至2022年7月济宁医学院附属医院住院患者分离出的大肠埃希菌1311株中筛选出CREco 16株。最低抑菌浓度法进行药敏试验,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增碳青霉烯酶基因及喹诺酮类耐药基因,对阳性基因进行测序比对,用脉冲场凝胶电泳检测菌株间的同源性。结果16株CREco仅对个别抗生素敏感,对多数抗生素表现为耐药,其中对β-内酰胺类和喹诺酮类耐药率最高。经PCR扩增发现,100%携带碳青霉烯酶基因,包括NDM-1型13株,NDM-5型3株,KPC-2型8株,未检测出OXA、IMP和VIM。喹诺酮类耐药基因中,5株扩增出qnrS基因,14株扩增出aac(6’)-Ib基因。脉冲场凝胶电泳分型共获得12种谱型,C谱型最多,为流行谱型。结论CREco耐药形势严峻。碳青霉烯酶以NDM-1最常见,其次为KPC-2。喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib阳性率最高。脉冲场凝胶电泳分型呈现多态性,C谱型在院内存在流行趋势。应加强CREco耐药基因的监测,采取感染控制措施以帮助遏制耐药菌的传播。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因及同源性分析

目的 分析某院分离的耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)的耐药基因及同源性,为临床治疗及感控提供参考。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院2017-2021年分离的CRECO 36株,对成功复苏的15株CRECO进行耐药基因及同源性分析;用PCR扩增碳青霉烯酶(CPAs)基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48));多位点序列分型(MLST)用于检测其基因序列(ST型)。结果 (1)36株CRECO标本类型主要为尿液(55.56%)。(2)CRECO对哌拉西林、左氧氟沙星等8种抗菌药物耐药率达100.0%,对庆大霉素、氯霉素等7种抗菌药物耐药率>50.0%,对阿米卡星、多黏菌素耐药率分别为19.4%、2.8%,尚未发现对替加环素耐药。(3)通过PCR扩增15株复苏菌株的耐药基因,共获得14株阳性:2株bla_(KPC-1),11株bla_(NDM-5),1株bla_(NDM-1);1株阴性。(4)MLST将11株携带bla_(NDM-5)的CRECO的ST型分为ST156、ST117、ST2177、ST744、ST405和ST10Cplx(复合群)。结论 CRECO呈多重耐药状态,对碳青霉烯类耐药与携带耐药基因bla_(NDM-5)密切相关,携带bla_(NDM-5)的CRECO以ST10Cplx流行为主。

慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生耐碳青霉烯类大肠埃希菌感染的危险因素及耐药基因分析

目的:分析慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistant Esche‐richia coli,CREC)感染的危险因素及细菌的耐药基因。方法:选取2021年4月—2022年3月医院收治的143例慢性乙肝肝硬化失代偿期患者作为研究对象,分析患者发生CREC感染情况和耐药基因,并采用单因素分析与Logistic多因素回归分析与其相关的危险因素。结果:143例医院感染患者中,24例(占16.78%)发生CREC感染为感染组,其余的为未感染组;单因素分析结果显示,患者年龄、肝功能分级、有无侵入性操作、有无腹水、预防性使用抗菌药物数量、住院时间、白蛋白水平与患者发生感染相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁(OR=2.516)、肝功能分级为C级(OR=4.363)、有侵入性操作(OR=5.332)、有腹水(OR=2.769)、预防性使用抗菌药物数量<1种(OR=3.562)、住院时间>3 d(OR=6.731)、白蛋白水平≤35 g/L(OR=4.130)是慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生CREC感染的独立危险因素(P<0.05);分离出的24株CREC中,经基因分析结果显示,含NDM-1基因11株(占45.83%)、CTM-M1基因8株(占33.33%)、TEM基因6株(占25.00%)、CTM-M9基因4株(占16.67%)、SHV基因2株(占8.33%)和KPC-2基因1株(占4.17%),未检出OXA48基因和IMP-4基因。结论:年龄、肝功能分级、侵入性操作、腹水、预防性使用抗菌药物、住院时间、白蛋白水平均为慢性乙肝肝硬化失代偿期患者CREC感染相关的独立危险因素,其耐药基因以NDM-1、CTM-M1为主。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分布、耐药特征及携带mcr基因分析

目的分析临床耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistance Escherichia coli,CREC)分布及耐药特征,检测其碳青霉烯酶合成基因及质粒介导的多黏菌素耐药(mobile colistin resistance,mcr)基因携带情况,为多重耐药菌防控提供参考。方法收集2020年7月~2021年6月期间安徽医科大学第二附属医院住院患者送检的各类临床标本分离非重复CREC菌株,微量肉汤稀释法进行药敏试验。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增及测序技术检测碳青霉烯酶基因及mcr系列基因。多黏菌素诱导试验检测mcr-9阳性菌株的诱导耐药特征,脉冲凝胶电泳(pulsedfield gel electrophoresis,PFGE)分析其同源性。结果共收集CREC菌株33株,主要分离自尿液标本(30.3%)、痰液标本(24.2%)、脓液/分泌物标本(18.2%)及血液标本(15.2%),菌株呈现多重耐药表型。PCR检测结果显示,23株CREC(69.7%)携带bla_(NDM)基因,8株CREC(24.2%)携带bla_(KPC)基因。有3株(9.1%)bla_(NDM)阳性CREC菌株同时携带mcr-9基因,PFGE分析显示3株细菌间无同源性。上述mcr-9阳性菌株经过1/2倍最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)多黏菌素B药物诱导6h后,对多黏菌素B的MIC值均升高。结论临床CREC呈现多重耐药,主要碳青霉烯酶基因为bla_(NDM)及bla_(KPC)。部分菌株同时携带bla_(NDM)及mcr-9基因,且呈现多黏菌素诱导耐药特征。实验室应加强监测,防控其流行播散。

产mcr-1耐碳青霉烯类大肠埃希菌的分子特征研究

目的研究mcr基因在耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中的分布情况。方法回顾性研究2016年1月至2020年12月宁波大学附属人民医院临床分离非重复耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌454株,用PCR方法筛查所有菌株的mcr基因,用质粒接合试验分析相关耐药质粒的可接合情况,并用Nanopore三代测序技术分析相关菌株基因信息。结果仅检测到分离自同一患者的不同标本类型的两株携带碳青霉烯酶NDM-5亚型的大肠埃希菌携带mcr-1基因。基因组测序分析发现,两株细菌相差7个单核苷酸多态性(SNP),可判为同一克隆株,且均成功进行了mcr-1质粒接合试验。结论携带mcr-1耐碳青霉烯类肠杆菌细菌较少,但应注重此类细菌的控制。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌致儿童血流感染伴多发皮肤脓肿治疗的药学监护

目的:探讨临床药师参与儿童多重耐药菌感染治疗中耐碳青霉烯类大肠埃希菌致儿童血流感染的药学监护实践。方法:通过药师参与1例由耐碳青霉烯类大肠埃希菌引起的血流感染伴多发皮肤脓肿患儿的抗感染治疗过程,讨论儿童患者多重耐药菌抗感染策略。结果:临床药师结合当地医院的药敏结果和文献资料,建议采用美罗培南联合头孢哌酮钠/舒巴坦抗感染治疗。治疗后未见新发脓肿,既往脓肿愈合较佳,多次血培养及分泌物培养阴性,预后良好。结论:临床药师全程参与针对多重耐药菌感染的抗感染方案的制定和调整,能有效地对患儿进行药学监护,体现药师的价值。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌对替加环素异质性耐药的机制

目的研究耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)对替加环素异质性耐药的分子机制,为临床治疗和合理应用抗生素提供依据。方法收集2017年1月至2019年3月间多中心分离的CREC,用改良E-test法和菌群谱型分析微量滴定法(MPAP)初筛,群体谱分析法(PAP)确认CREC对替加环素的异质性耐药情况,并用荧光定量RT-qPCR分析外排泵相关基因、外排泵调节基因和膜孔蛋白基因的表达。结果改良E-test法和MPAP法筛查CREC对替加环素异质性耐药(CREC-TGC-HR)的阳性率分别为25.0%(14/56)和39.3%(22/56)。经PAP法确认,有37.5%(21/56)为阳性。改良E-test法的CREC-TGC-HR检出率低于PAP法,差异有统计学意义(P<0.05)。3家医院CREC-TGC-HR的检出率分别是43.8%(7/16)、43.5%(10/23)和23.5%(4/17),两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与CREC-TGC-HR原始菌株相比,耐药亚群外排泵基因acrA、acrB表达分别上调1.79倍、5.01倍;其相关调控基因marA、marB表达分别上调5.38和2.18倍;膜孔蛋白基因ompC表达下调2.35倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。膜孔蛋白基因ompF和ompX的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论首次报道CREC对替加环素异质性耐药,且异质性耐药率较高,需要采用有效的方法检测CREC-TGC-HR,为临床治疗和合理应用抗生素提供依据。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分离情况及碳青霉烯酶基因研究

目的:研究碳青霉烯酶基因,探讨临床分离的大肠埃希菌碳青霉烯类抗生素的耐药基因分布情况,为相关抗感染治疗提供依据。方法:收集2009年3月至2017年10月期间,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌菌株;使用MicroflexTMMALDI-TOF MS进行菌种复核;用Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪联合纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用碳青霉烯类抗菌药物灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)快速筛查大肠埃希菌的产碳青霉烯酶表型;采用耐药基因常规PCR及测序的方法检测常见碳青霉烯酶基因;另收集所有患者的临床资料,分析其临床特征。结果:2009年3月至2017年12月,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌共84株。药物敏感性(药敏)试验结果显示,只有氨基糖苷类抗生素中阿米卡星的耐药率<50%,其他各种药物的耐药率都非常高,达到80%~100%。mCIM检测共筛选出71株产碳青霉烯酶菌株,而耐药基因PCR及测序的结果则显示,有65株携带blaNDM,以blaNDM-5(64.6%,42/65)和blaNDM-1(24.6%,16/65)为主,其中2株同时携带blaNDM-1和blaMCR-1。另有6株携带blakpc-2,未检测到blaGES、blaIMP、blaVIM、blaOXA等碳青霉烯酶基因。检测到产碳青霉烯酶菌株来自23个科室的17种标本,其中尿液占30.95%(26/84)和痰占21.43%(18/84);标本检出产碳青霉烯酶的患者则以儿科最多(66.7%,56/84)。儿童及婴幼儿中分离的大肠埃希菌中产酶型占96.4%(54/56),且以产酶型别blaNDM-5最多(63.0%,34/54);而老年患者中分离的非产酶型大肠埃希菌占62.5%(10/16);在这些患者中,54%(45/84)的患者在住院期间曾接受过手术,33%(28/84)的患者曾接受留置深静脉导管等侵入性医疗操作。结论:我院临床患者分离到的耐碳青霉烯类大肠埃希菌呈多重耐药,产碳青霉烯酶的类型为NDM和KPC 2种,其中NDM-5检出率高达50%(42/84);来自儿科病房尤其是儿重症病房的标本,耐碳青霉烯类大肠埃希菌分离率最高。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染特征及危险因素分析

目的:研究耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染特征、转归及相关危险因素。方法:采用回顾性病例对照方法,分析2012-02-01~2018-06-30耐碳青霉烯类大肠埃希菌感染患者(97例)与碳青霉烯类敏感大肠埃希菌医院感染患者(388例)的病例资料,预测耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染的危险因素。结果:耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染标本分布以深部痰、腹腔引流液与创面分泌物为主,分别占31.96%、22.68%、17.53%。科室分布以ICU、普外科与骨科多见,分别占36.08%、17.53%、16.49%。入住ICU、手术治疗、机械通气、腹腔引流、碳青霉烯类抗菌药物、培养前使用抗菌药物、多药联用等7个因素是耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染的独立危险因素,碳青霉烯类耐药与敏感大肠埃希菌医院感染治疗有效率分别为68.04%与95.10%。结论:耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染预后较差,减少不必要机械通气、腹腔引流、手术等侵入性诊疗操作,合理使用抗菌药物等可降低耐碳青霉烯类大肠埃希菌医院感染率,提高疗效。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌多重耐药研究进展

大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌同属于肠杆菌科,为临床中常见的病原菌之一。这两种细菌感染力强、发病急,在医院中检出率极高。大肠埃希菌和肺炎克雷伯杆菌耐药性强、耐药谱广,对多种抗生素天然耐药和获得性耐药,

耐碳青霉烯类大肠埃希菌产碳青霉烯酶基因型和同源性检测及分析

目的检测并分析耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)产碳青霉烯酶基因型及其同源性。方法对2020年湖北省十堰市3家三甲医院临床分离的31株CRECO采用MALDI-TOF质谱仪进行菌种再鉴定,K-B纸片扩散法和E test条复核药敏结果,得到23株CRECO。采用碳青霉烯类药物的协同试验初筛产碳青霉烯酶基因型,PCR法检测8种常见碳青霉烯酶基因型并对阳性产物测序,用肠杆菌科基因间重复一致序列(ERIC)PCR法检测其同源性。结果23株CRECO中,9株产NDM-5酶,6株产KPC-2酶,2株产IMP-4酶。产碳青霉烯酶的大肠埃希菌大多从呼吸系统标本中分离出,多数来自呼吸重症病房,大多数为70岁以上老年患者,且患者经历过机械辅助通气、留置尿管或外科手术等侵入性操作。23株CRECO只对少数几种抗生素(阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明)耐药率较低。同源性分析结果显示,本地区CRECO分7型,未见覆盖本地区的优势型别。结论十堰地区CRECO耐药机制复杂,产酶基因型主要是NDM-5和KPC-2基因,菌株对多种抗生素耐药。未发现本地区的克隆菌株爆发流行。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌分子流行病学研究

目的调查武汉市三家医院耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)耐药基因携带情况及其分子流行病学特点。方法收集2018年7月-2021年5月武汉市第一医院、武汉市中心医院、武汉市黄陂区人民医院共62株临床分离的CREC,采用全自动细菌鉴定及药敏分析系统测定细菌的药物敏感性,碳青霉烯酶诺德曼-珀尔(Carba NP)试验对碳青霉烯酶型确证,全基因组测序分析菌株耐药基因、质粒携带情况以及多位点序列分型(MLST)情况。结果Carba NP试验结果表明,所有菌株产碳青霉烯酶的比例为32.3%(20/62)。20株Carba NP试验阳性菌株均产新德里金属酶(NDM),其中15株产NDM-5,5株产NDM-1,未检出其他碳青霉烯酶耐药基因;所有菌株同时还携带了超广谱β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)或bla_(CTX-M))、氨基糖苷类耐药基因aacA、大环内酯类耐药基因(mph或mdf)、甲氧苄啶耐药基因dfrA以及四环素耐药基因tet;20株细菌检出12种序列分型(ST),主要为ST410(n=4)、ST131(n=3)和ST167(n=3),无明显优势菌株;所有菌株都携带1~6个质粒,大多为3~4个。结论本研究检出产NDM的CREC,bla_(NDM)基因在菌株间可能存在克隆传播和水平传播并存的现象。

血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素分析

目的探讨血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素,为临床提供参考。方法回顾性分析2022年1月至2023年8月于绵阳市中心医院诊断为血流感染大肠埃希菌的200例患者的临床资料,根据是否对碳青霉烯类抗生素耐药分为耐药组(18例)与敏感组(182例)。比较两组患者一般资料[性别、年龄、感染前手术史、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、是否实施过侵入性置管操作、是否入住ICU、是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)],分析影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的危险因素。结果两组患者性别、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、入住ICU占比比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);耐药组患者年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs占比均高于敏感组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作、产ESBLs均是影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的独立危险因素(均P<0.05)。结论血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药受患者年龄、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs影响,临床应予以密切关注。

大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制

目的探讨大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制。方法通过二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得大肠埃希菌QD24株的染色体和质粒序列,然后对其进行在线软件分析。液相接合试验、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株携带的质粒。结果测序分析显示大肠埃希菌QD24属于ST69型,携带了黏菌素耐药基因mcr-1.1和碳青霉烯类耐药基因blaNDM-13,且这两个基因分别位于IncHI2型质粒pQD24-1和IncB/O/K/Z型质粒pQD24-3上。液相接合显示大肠埃希菌QD24能将blaNDM-13基因传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论大肠埃希菌QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药是因为携带了mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因。经检索,同时携带mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因ST69型大肠埃希菌为国内外首次报道。

头孢哌酮/舒巴坦与美罗培南轮换性治疗降低产超广谱β-内酰胺酶和耐碳青霉烯类大肠埃希菌的发生率

目的 观察使用头孢哌酮/舒巴坦与美罗培南治疗感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌(extended spectrumβ-lactamase producing Escherichia coli,ESBLs-E.coli)肺炎患者的临床疗效,轮换性治疗降低产ESBLs-E.coli和耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem resistant E.coli,CR-E.coli)的发生率。方法 将2019年6月—2021年6月青岛大学上海临床医学院呼吸内科轻中度肺部感染ESBLs-E.coli的419例患者按照如下治疗方案分3组:采用头孢哌酮/舒巴坦治疗14 d的104例患者为舒普生组;采用美罗培南治疗14 d的127例患者为美平组;先用头孢哌酮/舒巴坦治疗7 d,再用美罗培南治疗7 d的188例患者为轮换组。3组患者除抗菌药物使用方法不同外其他治疗方案一致,14 d后观察3组患者的临床疗效,连续3 d采集全部治疗未痊愈患者肺泡灌洗液做细菌培养鉴定及药敏分析,对治疗后患者肺泡灌洗液培养出ESBLs-E.coli及CR-E.coli的例数进行统计分析。结果 3组患者治疗后临床疗效比较无统计学差异,轮换组未痊愈患者肺泡灌洗液检测出的E.coli对头孢三代(头孢噻肟、头孢曲松)和碳青霉烯类药物(亚胺培南、美罗培南、厄他培南)的耐药率与其他2组比较有显著性差异(轮换组的耐药率显著低于其他2组,P<0.05)。治疗后舒普生组、美平组、轮换组未痊愈患者肺泡灌洗液分别检出ESBLs-E.coli 63,66,53例,舒普生组与美平组比较差异无统计学意义,轮换组检出例数与其他2组比较均有显著性差异(轮换组检出率显著低于其他2组,P<0.05)。治疗后舒普生组、美平组、轮换组未痊愈患者肺泡灌洗液分别检出CR-E.coli 7,8,2例,舒普生组与美平组比较差异无统计学意义,轮换组检出例数与其他2组比较均有显著性差异(轮换组检出率显著低于其他2组,P<0.05)。结论 使用头孢哌酮/舒巴坦与美罗培南治疗感染ESBLs-E.coli肺炎患者的临床疗效无显著性差异,使用头孢哌酮/舒巴坦与美罗培南轮换性治疗可有效降低ESBLs-E.coli和CR-E.coli的发生率。

2010—2016年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌临床分布及其耐药特征

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)及耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)的临床分布状况及耐药特征。方法回顾性分析某院2010年1月—2016年12月临床标本分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌,统计分析CRKP及CREC分离情况。结果 2010—2016年7年共收集临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)310株(CRKP268株,CREC42株),CRKP检出率由2010年的1.33%上升到2016年的12.70%,呈逐年上升趋势(χ2=123.73,P<0.01);CREC检出率则处于相对稳定状态,2010—2016年均约为1.00%;标本来源和病区分布最多者分别为呼吸道标本(45.49%)和重症监护病房(31.93%)。药敏试验结果显示,CRKP和CREC除对阿米卡星耐药率稍低(分别为80.60%、38.10%)外,对大多数临床常用抗菌药物如第三代头孢菌素类、第四代头孢菌素类、β-内酰胺类/酶抑制剂类、喹诺酮类等耐药率CRKP均>90%、CREC均在80%左右,而非CRE菌株的耐药率低于CRE菌株(P<0.01)。结论 7年间临床分离的CRKP的检出率呈现快速增加的趋势,几乎对常用抗菌药物均耐药,应予以高度关注。

国产某品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因试剂性能验证

目的评价国产某品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因检测试剂的性能,为临床微生物实验室主动筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)提供参考。方法收集2018年5月—2019年12月同济大学附属东方医院急诊重症内科患者入院时行CRE筛查的直肠拭子219例,采用半巢式实时荧光聚合酶链反应(PCR)进行检测。取CRE阳性和阴性的直肠拭子各20例,并通过培养进行确认。采用多重荧光PCR检测待评价试剂盒,通过凝胶电泳验证其正确度。取CRE阳性和阴性样本各1例,每天重复检测4次,连续检测5d,根据循环阈值(Ct)评价其精密度。取CRE标准品稀释到厂家声明的最低检出限(1000拷贝/mL),验证其最低检出限。取同部位临床微生物实验室培养常见病原菌的纯培养菌液,验证检测试剂有无交叉反应。结果该试剂盒检测结果的符合率为95%,批内、批间Ct值变异系数(CV)≤5%,最低检出限为1000拷贝/mL,与同部位临床常见病原菌无交叉反应。结论该品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因检测试剂可用于临床样本的检测。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌分子流行病学机制研究

目的研究重症监护病房(ICU)耐碳青霉烯类大肠埃希菌分子流行病学特征和耐药机制。方法采用琼脂稀释法检测分离株的抗菌药物敏感性,采用PCR、DNA测序分析介导碳青霉烯类耐药的基因型,采用脉冲场琼脂糖凝胶电泳(PFGE)进行分子分型,研究耐碳青霉烯类大肠埃希菌的耐药机制和遗传关系。结果临床分离的14株泛耐药菌株,均表现多药耐药性,碳青霉烯类耐药基因扩增显示,均带KPC-2型碳青霉烯酶基因,分子流行病学分析,14株菌分别属于10个流行克隆型。结论医院出现耐碳青霉烯类大肠埃希菌,碳青霉烯酶KPC-2,是泛耐药大肠埃希菌介导,对碳青霉烯类耐药的主要原因。

耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌耐药机制的研究

目的了解河南省人民医院耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌的耐药特点和耐药机制。方法收集临床送检合格样本分离到的细菌,采用BD Phoenix 100微生物分析系统进行细菌鉴定及体外药物敏感性分析,依照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准筛选出耐碳青霉烯类大肠埃希菌。采用改良Hodges和美罗培南(MEM)-乙二胺四乙酸(EDTA)-Na2双纸片协同试验进行表型筛选。聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48。对blaKPC阳性菌株进行接合转移试验。结果从1 238株大肠埃希菌中筛选到8株耐碳青霉烯类菌株,7株对亚胺培南(IPM)、MEM均耐药,有1株仅对MEM耐药。8株改良Hodges试验均为阳性,6株双纸片协同试验阳性。2株携带blaKPC-2,3株携带blaIMP-4。blaKPC-2可以发生接合转移。结论首次在河南省人民医院发现产blaIMP-4的大肠埃希菌,其耐碳青霉烯类抗菌药物的机制主要为携带blaKPC-2和blaIMP-4,blaKPC-2基因可以通过质粒水平传播。