c-Met抑制剂SU11274在HGF诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌细胞对厄罗替尼耐药的逆转作用

目的:肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导敏感非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth facter receptor tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)厄洛替尼耐药,本研究旨在探讨c-Met抑制剂SU11274逆转HGF诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌细胞株对厄洛替尼耐药及逆转耐药机制。方法:选择人NSCLC细胞株PC9(EGFR突变型,敏感株)、H292(EGFR野生型,敏感株)和A549(EGFR野生型,原发性耐药株),应用厄洛替尼和SU11274(1μmol/L)单独或联合作用于HGF(40 ng/ml)诱导的细胞株,实验分为6组:C组(不加药对照组)、H组(HGF处理)、E组(厄洛替尼处理组)、S组(SU11274处理组)、HE组(HGF+厄洛替尼处理组)、HES组(HGF+厄洛替尼+SU11274处理组)。MTT法、流式细胞术分别检测不同药物处理对各细胞增殖、凋亡的影响;应用Western blotting检测不同药物处理对各细胞中c-Met及其下游通道Stat3、Akt、Erk1/2蛋白表达水平。结果:厄洛替尼对3种细胞的增殖抑制作用均呈浓度依赖性,HGF处理能够缓解厄洛替尼的增殖抑制作用(P<0.05);不同浓度厄洛替尼联合SU11274作用于HGF诱导细胞时3种细胞株存活率比厄洛替尼单独作用于HGF诱导细胞时明显降低(P<0.05);HGS组的细胞凋亡比HG组明显增加(P<0.05);HGS组的c-Met、Stat3、Akt、Erk1/2活化蛋白量比HG组明显减少。结论:c-Met抑制剂SU11274和厄洛替尼联合应用可逆转HGF诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌细胞对厄洛替尼耐药,其机制可能与抑制HGF活化的c-Met及其下游通道蛋白表达有关。

SU11274逆转肝细胞生长因子诱导不同EGFR基因型非小细胞肺癌细胞株对吉非替尼耐药

背景与目的:肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导敏感非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)细胞对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)耐药,其机制与c-Met激活有关。本研究探讨c-Met抑制剂SU11274逆转HGF诱导的不同EGFR基因型NSCLC细胞株对吉非替尼耐药及逆转耐药机制。方法:选择人NSCLC细胞株PC9(EGFR突变型)、H292(EGFR野生型)和A549(EGFR野生型),应用吉非替尼和SU11274单独或联合作用于HGF诱导的细胞株。实验分为6组:C组(不加药对照组)、H组(HGF处理组)、G组(吉非替尼处理组)、S组(SU11274处理组)、HG组(HGF+吉非替尼处理组)和HGS组(HGF+吉非替尼+SU11274处理组)。MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡的影响;应用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中c-Met及其下游通道Stat3、Akt和Erk1/2蛋白表达水平。结果:吉非替尼对3种细胞的生长抑制作用均呈浓度依赖性,HGF处理能够缓解吉非替尼的增殖抑制作用(P<0.05);不同浓度吉非替尼联合SU11274作用于HGF诱导细胞时,3种细胞株存活率比吉非替尼单独作用于HGF诱导细胞时明显降低(P<0.05);HGS组的细胞凋亡比HG组明显增加(P<0.05);HGS组的c-Met、Stat3、Akt和Erk1/2活化蛋白量比HG组明显减少。结论:c-Met抑制剂SU11274可逆转HGF诱导的不同EGFR基因型NSCLC细胞株对吉非替尼耐药,其机制可能与抑制HGF活化的c-Met及其下游通道蛋白表达有关。

SU11274逆转HGF诱导非小细胞肺癌对厄洛替尼耐药的作用及其机制

目的探讨c-Met抑制剂SU11274逆转肝细胞生长因子(HGF)诱导非小细胞肺癌(NSCLC)对厄洛替尼耐药的作用机制。方法选择人NSCLC细胞PC-9(EGFR突变型,敏感株)及人胚肺成纤维细胞MRC-5,常规规养48 h,采用ELISA法检测两种细胞培养上清液HGF水平,采用MTT法检测加入50%MRC-5细胞培养上清液后IC50浓度厄洛替尼下PC-9细胞的增殖率,采用Western blotting法检测PC-9细胞c-Met及其下游通路蛋白(Akt、Stat3、Erk1/2及p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2)表达。选择雌性BALB/c裸鼠49只,随机分为对照组、HGF组、HGF+DMSO组、HGF+SU11274组、厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼+SU11274组、HGF+厄洛替尼组,每组7只。对照组和厄洛替尼组于右肋皮下接种密度为5×106个/m L PC-9细胞悬液100μL,其他组均于右肋皮下接种100μL密度相同的PC-9细胞与MRC-5细胞培养上清液的混合液。当肿瘤直径生长至约4 mm时,对照组、HGF组以1%Tween-80灌胃,厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼+SU11274组以厄洛替尼25 mg/(kg·d)灌胃,每周灌胃5天,连续4周。HGF+SU11274组、HGF+厄洛替尼+SU11274组灌胃后腹腔注射SU11274 0. 18 mg/(kg·d),每周5次,连续4周。分别于灌胃4、7、11、14、18、21、25天计算肿瘤体积,末次灌胃结束,断颈处死,完整剥离移植瘤组织,称取肿瘤质量,计算抑瘤率。取部分移植瘤组织,采用免疫组化法检测c-Met及其下游通路蛋白(Akt、Stat3、Erk1/2及p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2)表达。结果 PC-9细胞培养上清液HGF水平<0. 1 pg/m L,MRC-5细胞培养上清液HGF水平为(1 262. 07±89. 78) pg/m L。在加入50%MRC-5细胞培养上清液后IC50浓度厄洛替尼下PC-9细胞增殖率为78. 24%。与未加入MRC-5细胞培养上清液的PC-9细胞比较,加入MRC-5细胞培养上清液的PC-9细胞p-c-Met、p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2蛋白相对表达量明显升高(P均<0. 05),而c-Met、Akt、Stat3、Erk1/2蛋白相对表达量变化不明显(P均> 0. 05)。厄洛替尼组、HGF+厄洛替尼组及HGF+厄洛替尼+SU11274组均能明显抑制移植瘤生长,其他各组抑制肿瘤生长效果不明显。与HGF+厄洛替尼组比较,厄洛替尼组与HGF+厄洛替尼+SU11274组抑瘤率明显升高(P均<0. 05),而厄洛替尼组与HGF+厄洛替尼+SU11274组比较P> 0. 05。与HGF组、HGF+DMSO组和HGF+厄洛替尼组比较,厄洛替尼组、HGF+SU11274组和HGF+厄洛替尼+SU11274组移植瘤组织pMet、p-Stat3、p-Akt、p-Erk1/2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0. 05)。结论 HGF可诱导NSCLC对厄洛替尼的耐药,c-Met及其下游信号通路持续激活是NSCLC对厄洛替尼耐药的重要机制; c-Met抑制剂SU11274和厄洛替尼联合应用可逆转HGF诱导的NSCLC对厄洛替尼的耐药,其机制可能与抑制c-Met及其下游信号通路激活有关。

SU11274逆转肝细胞生长因子诱导的PC-9肺癌细胞株对吉非替尼耐药及其机制研究

目的探讨SU11274在裸鼠体内逆转肝细胞生长因子(HGF)诱导的PC-9肺癌细胞株对吉非替尼耐药及其机制。方法采用PC-9肺癌细胞株[表皮生长因子受体(EGFR)突变型、敏感株]、人胚肺成纤维细胞(MRC-5细胞),分别用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和Western blot法测定HGF的水平、细胞的增殖和蛋白的表达。建立PC-9肺癌细胞株的移植瘤模型,设对照组(C组)、吉非替尼组(G组)、HGF组(H组)、HGF+SU11274组(HS组)、HGF+0.1%二甲基亚砜(DMSO)组(HD组)、HGF+吉非替尼组(HG组)、HGF+吉非替尼+SU11274组(HGS组);测定各组肿瘤的体积和质量,测定间质表皮转化因子(c-Met)及其下游通道蛋白的表达来对各组肿瘤进行统计学分析。结果MRC-5细胞能产生高水平的HGF,刺激PC-9细胞中的c-Met和下游信号蛋白的磷酸化。吉非替尼可抑制PC-9细胞移植瘤的生长。将MRC-5细胞和PC-9细胞共同接种时,被激活的c-Met及其下游通道蛋白p-Met、p-Akt、p-Stat3和p-Erk1/2的表达高于单独接种PC-9细胞的表达。HG组的肿瘤生长抑制程度比HGS组低(P<0.0.5),且HG组的肿瘤体积比HGS组大(P<0.0.5);HG组c-Met、Akt、Stat3、Erk1/2的表达强度比HGS组高(P<0.05)。结论SU11274和吉非替尼联合应用可逆转由MRC-5分泌的HGF诱导PC-9肺癌细胞株对吉非替尼耐药,其机制可能与c-Met及其下游通道蛋白表达的抑制有关。

医院分离鲍曼不动杆菌外排泵基因与耐药表型相关性研究

目的研究医院分离的鲍曼不动杆菌中携带外排泵基因(adeB基因、qacE△SUⅠ1)情况及其耐药表型表达的相关性。方法用基因扩增技术与药敏试验方法,对上海市某大型综合医院住院患者送检标本和环境采集标本分离的鲍曼不动杆菌进行了耐药基因检测和耐药性研究。结果从该医院临床患者标本与环境分离鲍曼不动菌菌株,临床与环境来源菌株携带药物外排泵adeB基因阳性率分别为84.21%和74.29%,携带耐消毒剂基因qacE△SUⅠ1基因阳性率分别为89.47%和94.29%,adeB基因和qacE△SUⅠ1基因的表达可能与抗生素耐药性具有相关性。结论多耐药鲍曼不动杆菌已在环境中传播,并且携带耐消毒剂基因对现有消毒隔离措施提出严峻的考验。