雷公藤红素逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性实验研究

目的研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性,并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表达水平;流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果 1、2、4、8、16、32、64μmol/L顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率分别为:(18.6±1.5)%(Hela),(1.9±1.0)%(Hela/R);(23.9±2.4)%(Hela),(3.1±1.2)%(Hela/R);(47.8±3.9)%(Hela),(6.8±1.5)%(Hela/R);(63.4±5.4)%(Hela),(11.6±1.8)%(Hela/R);(72.7±5.9)%(Hela),(20.4±2.0)%(Hela/R),(85.7±6.7)%(Hela),(41.2±3.3)%(Hela/R);(91.8±7.9)%(Hela),(55.8±4.3)%(Hela/R),两组比较,P均<0.05。2μmol/L雷公藤红素对Hela/R细胞的细胞活力抑制率为(6.6±1.1)%;2μmol/L雷公藤红素分别加10、20、40μmol/L顺铂组Hela/R细胞的细胞活力抑制率优于单用10、20、40μmol/L顺铂组[(57.2±3.9)%比(12.4±1.2)%、(71.4±5.1)%比(27.8±1.9)%、(84.8±6.8)%比(45.2±3.1)%,P<0.05]。Hela/R细胞Bcl-w/β-actin表达水平高于Hela细胞[(70.9±4.9)比(22.1±1.3),P<0.05],Bcl-2/β-actin与Bcl-xl/β-actin表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,雷公藤红素可明显抑制Hela/R细胞Bcl-w/β-actin的表达[(29.3±2.6)比(68.9±4.5),P<0.05]。雷公藤红素增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论雷公藤红素体外能提高顺铂对耐药宫颈癌细胞的杀伤活性,其机制可能为通过抑制Bcl-w表达,提高促凋亡蛋白的活性,进而促进耐药宫颈癌细胞发生线粒体途径的凋亡。

淫羊藿苷增强CIK细胞对B-MD-C1(ADR^(+/+))细胞杀伤敏感性的实验研究

目的观察淫羊藿苷(icariin,ICA)对CIK杀伤子宫内膜癌耐药细胞株的影响,初步探讨其作用机制。方法 MTT检测ICA对子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的增殖抑制作用;流式细胞术(FCM)检测ICA对肿瘤细胞周期分布和凋亡的影响;乳酸脱氢酶释放法(LDH)法检测CIK(细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞)对ICA处理前后肿瘤细胞的杀伤作用。RT-PCR法和流式细胞术检测肿瘤细胞表面粘附因子CD18和CD54基因和蛋白表达的影响。结果 12.5~50μg/ml ICA对B-MD-C1(ADR+/+)细胞活力和凋亡没有明显影响。100μg/ml ICA能明显抑制B-MD-C1(ADR+/+)细胞的增殖(P<0.01),且可诱导其凋亡。经0~100μg/ml ICA处理12 h后,S期细胞明显增加(P<0.01)。经12.5~50μg/ml ICA处理12 h后,B-MD-C1(ADR+/+)细胞CD18和CD54基因和蛋白表达均增加,且对CIK细胞的杀伤敏感性增强,呈现ICA浓度依赖性。结论 12.5~50μg/ml ICA增加了B-MD-C1(ADR+/+)细胞对CIK的杀伤敏感性,与ICA诱导肿瘤细胞CD18和CD54表达增加有关。