金黄色葡萄球菌异质性耐药研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是人类和动物感染的常见病原菌。近年来,金黄色葡萄球菌已经对多种抗菌药物出现耐药性,关于金黄色葡萄球菌异质性耐药的研究也被频繁报道。异质性耐药现象是指存在异质性细菌种群,其中一个亚群或几个亚群与主要种群相比表现出更高水平的抗菌药物耐药性。该定义反映出异质性耐药现象具有很多特点,包括克隆性、稳定性、不同亚群的耐药水平以及异质性耐药亚群的频率应在10^(-7)及以上。异质性耐药可看成是敏感表型向耐药表型转化的中间阶段,往往导致临床治疗的失败。本文对异质性耐药的定义、检测方法等进行了介绍,并综述了金黄色葡萄球菌对糖肽类、磺胺类、β-内酰胺类和其他抗菌药物异质性耐药的流行情况及异质性耐药机制的研究,旨在加强对金黄色葡萄球菌异质性耐药的认识,以期为学者了解金黄色葡萄球菌异质性耐药流行情况及机制提供参考。

肺炎克雷伯菌异质性耐药研究进展

肺炎克雷伯菌是一种常见的机会性致病菌,其对多种抗生素的耐药性给感染的治疗提出了重大挑战。近年来,越来越多异质性耐药的肺炎克雷伯菌被报道,异质性耐药即同源的细菌群体中存在着对某种特定的抗生素表现出不同敏感性的克隆亚群,异质性耐药往往与感染治疗失败和复发相关,肺炎克雷伯菌异质性耐药现象不容忽视。然而,在目前发表的文献中关于肺炎克雷伯菌异质性耐药的全面信息仍很少,临床医生对肺炎克雷伯菌异质性耐药现象的出现重视不足。因此,本文针对肺炎克雷伯菌异质性耐药的定义、检测方法、各种可用抗生素的异质性耐药的研究现状和治疗方案进行综述,以期为临床治疗异质性耐药的肺炎克雷伯菌感染提供有价值的参考。

肺炎克雷伯菌对头孢菌素类抗生素异质性耐药研究

肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)常引发临床细菌性感染,其对抗生素的异质性耐药(heteroresistance,HR)经常导致治疗失败。研究KP对头孢菌素类抗生素的异质性耐药情况,可为治疗KP感染提供参考。收集100株临床分离的KP,采用微量肉汤稀释法、Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片法、菌群谱型分析法(population analysis profile,PAP)、耐药稳定性试验以及适应成本试验探究KP的异质性耐药特征。微量肉汤稀释法测定KP对头孢他啶(ceftazidime,CAZ)和头孢吡肟(cefepime,FEP)的耐药率分别为23%和25%。K-B药敏纸片法初筛得到KP对CAZ和FEP的异质性耐药率为33%和23%。PAP试验复筛确认了9株FEP异质性耐药菌株,检出率为9%,耐药亚群发生频率为1×10^(-6)~4×10^(-2)。在无抗生素条件下传代50代后,异质性耐药菌株KS38耐药亚群的耐药水平发生部分回复,异质性耐药菌株KR9耐药亚群的耐药水平保持稳定。适应成本试验结果表明,KS38耐药亚群比原始菌株生长速度快(4~8 h),且有显著差异(P<0.05),KR9耐药亚群和亲本菌株的生长速率之间均无统计学差异(P>0.05)。肺炎克雷伯菌对头孢菌素类抗生素的异质性耐药率相对偏低,但耐药亚群的发生频率较高。耐药亚群的稳定性不同,但经过50代传代后都保持在临床耐药水平,均未产生生长适应成本。因此在用头孢菌素治疗KP感染时要注意HR的发生,防止出现更高水平的耐药亚群,导致治疗失败。

肺炎克雷伯菌异质性耐药的研究进展

肺炎克雷伯菌是肠杆菌科克雷伯氏菌属(俗称肺炎杆菌)中最重要的一员,也是造成院内感染的主要病原菌之一,可引起肺部、泌尿道、血液、脑部等部位的感染。近年来,由于抗生素的广泛和不合理的使用,肺炎克雷伯菌对多种抗生素产生耐药性且耐药率逐年增高,除了对抗生素耐药之外,肺炎克雷伯菌对多种抗生素的异质性耐药也已出现。异质性耐药被认为是细菌耐药性进化的一个中间过程,是一种特殊的耐药形式,临床检测困难且机制复杂,目前已成为临床抗生素治疗失败的主要原因之一。对异质性耐药进行研究有助于了解临床常见病原菌的耐药发展过程,这对预防和控制细菌耐药及指导临床用药具有重要意义。在本文中,主要对肺炎克雷伯菌异质性耐药的定义、检测方法及可能的耐药机制进行如下综述。

结核分枝杆菌(MTB)异质性耐药研究进展

异质性耐药,是指在同一样本中同时存在耐药菌和敏感菌的现象,这体现了细菌群体从部分耐药向完全耐药转变的过程。研究异质性耐药对于认识耐药结核病的发展过程,以及评估治疗方案和指导临床用药具有重要的意义。本文对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异质性耐药的产生及其对临床的影响进行了综述。

幽门螺杆菌克拉霉素异质性耐药及其特征分析

目的对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)克拉霉素异质性耐药进行检测,并分析异质性耐药的遗传进化特征。方法对中国某医院50个^(13)C尿素呼气试验阳性患者的胃窦黏液标本进行HP分离培养,每个样本挑取16个HP单克隆(分离培养平板中不满16个克隆者选取全部HP克隆),用Etest法测定各克隆的克拉霉素最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。进一步在异质性克拉霉素耐药病例中选取6份样本(MIC值差异较大的样本)相关的81个幽门螺杆菌克隆,利用多位点序列(MLST)分析的方法进行初步进化分析。结果 44个分离培养阳性的样本中24个全敏感,9个全耐药,11个为异质性耐药;6个MIC值差异较大的样本,最大值与最小值差别在100～1 000倍间。每个样本的9～16个克隆可分为1～6个ST型,结合vacA基因差异,分为2～8个基因型。遗传进化树显示2个样本的敏感、耐药克隆分为两簇,余4个样本中ST型与耐药间无明显关联。结论 HP在中国感染存在明显的克拉霉素异质性耐药现象,传统药敏试验可能不足以充分反映克拉霉素异质性耐药的现象,可能会引起误判,应高度关注。

头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的评价

目的:评价头孢西丁扩散法检测耐甲氧西林葡萄球菌异质性耐药菌株的可靠性和临床实用性。方法:将临床分离得到的葡萄球菌310株,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准操作规程进行苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法实验,并以PCR检测葡萄球菌mecA基因为判断标准,比较4种方法的敏感性及特异性。结果:经mecA基因检测,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为57.1%(113/198),耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)为62.5%(70/112)。头孢西丁纸片扩散法检测MRSA的敏感性和特异性均为100%,检测MRCNS敏感性为98.6%,特异性为100%。结论:头孢西丁纸片扩散法操作简便,结果可靠,可作为临床实验室检测耐甲氧西林葡萄球菌的常规方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌异质性耐药株检测方法探讨

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的异质性耐药株的检测方法。方法收集102株金黄色葡萄球菌,采用微量肉汤稀释法分别检测其对头孢西丁、苯唑西林的耐药性,乳胶凝集法检测青霉素结合蛋白2a(PBP2a),同时采用菌群谱分析法对异质性耐药株进行筛选。结果头孢西丁耐药71例(69.6%),其中PBP2a阳性70例(98.6%);苯唑西林耐药80例(78.4%),其中PBP2a阳性70例(87.5%)。头孢西丁耐药菌株PBP2a检出率明显高于苯唑西林(P<0.05)。苯唑西林耐药而头孢西丁敏感的9株菌中筛选出2株(22.2%)异质性耐药株。结论头孢西丁检出MRSA的敏感性优于苯唑西林,但苯唑西林对MRSA异质性耐药菌株检测的敏感性优于头孢西丁。

多黏菌素与美罗培南联合应用对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌多黏菌素异质性耐药的体外抗菌活性分析

目的评价多黏菌素与美罗培南的联合使用对碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌多黏菌素异质性耐药的体外抗菌活性。方法收集2021年1月至12月首都医科大学附属北京友谊医院临床分离碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)381株。采用微量肉汤稀释法检测多黏菌素及美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)。采用群体谱分析方法(PAPs)分析敏感菌株对多黏菌素的异质性,通过PCR扩增筛选耐药基因,根据结果分析部分菌株的时间-杀菌曲线,评价联合用药抑菌效果。结果381株肺炎克雷伯菌经过微量肉汤稀释法检测,未见多黏菌素耐药菌株,全部菌株对美罗培南均耐药。PAPs分析显示对多黏菌素异质性耐药的菌株比例为95%(38/40)。根据CRKP耐药基因的检测筛选3株携带不同耐药基因菌株进行的时间-杀菌曲线分析结果显示,与单独用药相比,低浓度联合用药即可在短时间内起到杀菌作用。结论碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌对多黏菌素的异质性耐药率较高。多黏菌素与美罗培南的联合应用在体外可以对异质性耐药CRKP表现出很好的杀菌活性。

结核分枝杆菌异质性所致的基因耐药与表型耐药不一致的研究进展

结核病治疗和防治是全球性公共卫生问题,治疗中抗结核药物的不规范使用,加上患者的依从性差,造成了结核菌耐药率不断增高,成为目前治疗上的难题之一。结核菌耐药有多种原因,其中异质性是结核菌耐药的一个微小变化过程。临床检验中由于常规方法的局限性无法检测频率过低的菌株而造成耐药结果的偏差,出现了同一标本不同方法药敏试验结果不一致的现象,提示结核分枝杆菌的异质性对药敏结果有影响。

铜绿假单胞菌对环丙沙星异质性耐药的研究

目的·探究铜绿假单胞菌对环丙沙星的异质性耐药机制。方法·通过圆盘扩散法对临床分离鉴定的铜绿假单胞菌(n=227)的环丙沙星异质性耐药进行初筛,同时根据抑菌圈直径对这些菌株的耐药性进行划分。通过无抗生素条件下连续传代后测定敏感性来判断异质性耐药菌株的稳定性。利用群体谱型分析法(population analysis profiling,PAP)对初筛结果进行验证。通过全基因测序分析异质性耐药的产生机制,最后测定比较不同突变类型的耐药亚群对不同抗生素敏感性的影响。结果·在圆盘扩散法中,227株临床菌株中有142株(62.6%)对环丙沙星表现为敏感,26株(11.5%)表现为中介,59株(26.0%)表现为耐药。该方法筛选得到18株潜在异质性耐药菌株,其中11株经PAP及稳定性检测后确定为稳定异质性耐药菌。随机挑选的18株初筛鉴定为非异质性耐药的菌株中,有3株经PAP鉴定为异质性耐药菌株。通过全基因组测序发现11株耐药亚群中,有8株发生mexS突变,2株发生gyrA突变;除此之外,基因fleQ、PA2632和PAKAF_02255均分别在1株菌株中发生突变。mexS与gyrA这2类突变型均导致莫西沙星耐药,部分mexS突变株同时对氯霉素与亚胺培南耐药。结论·铜绿假单胞菌对环丙沙星的异质性耐药率为4.8%(11/227)。圆盘扩散法作为铜绿假单胞菌异质性耐药筛选方法灵敏度较低,存在一定假阴性率。mexS突变是耐药亚群中最常见的突变类型,该突变可能通过使外排泵MexEF-OprN过表达来介导对环丙沙星在内的多种抗生素耐药。

MRSA对万古霉素和替考拉宁的异质性耐药情况及分子分型

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)对临床常用抗生素万古霉素(VAN)和替考拉宁(TEC)的异质性耐药情况及分子分型,为临床合理应用抗菌药物提供实验依据,为MRSA的异质性耐药机制研究奠定基础。方法收集2016年1月至2020年12月间中山大学附属第一医院临床分离的305株MRSA,采用多重PCR进行SCCmec分型,用菌群谱型分析微量滴定法(MPAP)初筛、群体谱型分析法(PAP)确认MRSA对VAN和TEC的异质性耐药情况。结果SCCmec分型中Ⅳa型占35.7%(109/305),Ⅳb型2.0%(6/305),Ⅳc型0.3%(1/305),Ⅳd型0.7%(2/305),Ⅱ型25.9%(79/305),Ⅲ型10.2%(31/305),Ⅴ型5.6%(17/305),未能分型19.7%(60/305)。血液和脓液标本中分离的MRSA主要为SCCmecⅣ型,分别占47.9%(45/94)和43.0%(43/100);痰液标本中分离的MRSA主要为SCCmecⅡ型,占50.5%(35/111)。PAP法显示MRSA对VAN和TEC的异质性耐药阳性率分别为35.5%(104/293)和59.9%(163/272)(P<0.05)。不同SCCmec型别的MRSA对TEC的异质性耐药率分别为:Ⅳ型69.7%(76/109),Ⅴ型56.3%(9/16),Ⅲ型48.1%(13/27),Ⅱ型44.6%(29/65),未能分型65.5%(36/55),差异有统计学意义(P<0.05),SCCmec分型与MRSATEC-HR有一定相关性(r=0.22)。不同SCCmec型别的MRSA对VAN的异质性耐药率分别为:Ⅳ型40.7%(48/118),Ⅴ型29.4%(5/17),Ⅱ型29.2%(21/72),Ⅲ型23.3%(7/30),未能分型41.1%(23/56),差异无统计学意义(P>0.05),SCCmec分型与MRSA-VAN-HR不存在相关性。结论临床分离的MRSA SCCmec型别以SCCmecⅣ型为主,其次是Ⅱ型。MRSA对VAN与TEC有较高的异质性耐药率,对TEC的异质性耐药率高于VAN。MRSA的SCCmec型别与其对TEC的异质性耐药有一定的相关性。

大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药的流行病学特征及影响因素分析

目的观察大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药(CHEC)的流行病学特征,探讨大肠埃希菌异质性耐药感染的影响因素,为临床合理应用抗菌药物提供理论依据。方法收集临床标本分离的大肠埃希菌株,进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测、典型碳青霉烯异质性耐药大肠埃希菌检测、菌落谱型分析(PAP),同时对耐药谱进行分析,确证大肠埃希菌碳青霉烯异质性耐药的影响因素。结果 200株大肠埃希菌主要分离自尿液、血液和痰液标本,检出率分别占16.50%、20.50%和38.00%。该菌对美罗培南、厄他培南和亚胺培南的异质性耐药率分别为6.00%、20.50%和29.00%。细菌产ESBLs、慢性基础病、先前使用抗生素和侵袭性医疗操作是碳青霉烯异质性耐药大肠埃希菌感染的主要影响因素。结论大肠埃希菌中碳青霉烯异质性耐药现象非常严重,特别是细菌产ESBLs、抗生素使用和侵袭性医疗操作与碳青霉烯异质性耐药有关。因此,临床应合理使用抗菌药物,规范侵袭性医疗操作,可避免院内感染的暴发流行。

碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌株中耐药基因的表达及对多黏菌素异质性耐药的研究

目的 探究碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌株(CRPA)中耐药基因的表达,以及菌株对多黏菌素异质性耐药情况。方法 在临床感染患者中收集97株CRPA,检测相关耐药基因的表达,并检测菌株对多黏菌素敏感性。选取了25株对多黏菌素敏感的CRPA进行群体谱分析多黏菌素异质性,并联合用药实验筛选用药方案。结果IMP阳性20株(20.61%),VIM阳性11株(11.34%),SPM阳性9株(9.27%),OXA-10阳性17株(17.53%),OprD2缺失62株(63.92%)。95株(97.94%)对多黏菌素敏感。进行群体普分析的25株CRPA中,8株(32.00%)存在异质性耐药,5株(20.00%)具有异质性,12株(48.00%)无异质性。体外药敏试验表明,联合用药方案以多黏菌素+比阿培南联合作用最佳。结论 青霉烯类酶的表达及外膜孔蛋白缺失在CRPA中有较高的比例,可能是其耐药的机制。CRPA对多黏菌素敏感性高,但仍有异质性及异质性耐药现象。联合多种抗生素对异质性耐药菌株有较高的敏感性。

菌谱分析法用于异质性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌检测

目的初步建立异质性甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(heterogeneous m ethec illin-resistantStaphylococcus aureus,hetero-MRSA)检测方法,并对hetero-MRSA检测的临床意义进行探讨。方法采用菌谱分析法和K-B法,对60株经V itek 32检测为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(m ethec illin susceptib leStaphylococcus aureus,MSSA)进行hetero-MRSA检测。结果菌谱分析法检出12株hetero-MRSA,K-B法检出2株hetero-MRSA。结论菌谱分析法对hetero-MRSA的检出率(20%)显著高于K-B法(3.3%)。MSSA对甲氧西林的异质性耐药不容忽视。

大肠埃希菌异质性耐药的研究进展

大肠埃希菌(Escherichia coli)是人类和动物中常见细菌病原体,E.coli已对多种抗菌药物产生耐药,且由于抗菌药物选择压力越来越大,致使菌株的适应性和致病性更强,耐药的传播更快、定植率更高,给全球流行病学和临床治疗带来极大的挑战。近年来,E.coli的异质性耐药(heteroresistance,HR)相关研究相继被报道,异质性耐药是指细菌中的同源亚群对某种抗菌药物表现出不同的敏感性,是敏感菌进化为耐药菌的中间阶段,不同于完全耐药,异质性耐药在临床上不易及时检出,常导致临床抗菌药物治疗失败。因此,为有效防控E.coli感染及耐药的演变,深入剖析E.coli异质性耐药的流行特征及可能的机制尤为重要,本文就E.coli的异质性耐药研究进行了梳理,并对异质性耐药从表型特征、检测方法和可能的机制等方面进行了概述。旨在加强对E.coli异质性耐药的认识和研究,以期为全面了解E.coli耐药过程及发生机制、优化抗菌药物使用策略、减缓完全耐药菌种的出现提供参考。

碳青霉烯类异质性耐药铜绿假单胞菌的耐药机制研究

目的筛选铜绿假单胞菌临床分离株的碳青霉烯类异质性耐药菌株,并分析相关机制。方法采用E-test纸条法、群体分析法(PAP)法对30株铜绿假单胞菌临床分离株进行亚胺培南异质性耐药的初筛和复筛、肉汤微量稀释法测定异质性耐药菌株对亚胺培南及其他药物的MIC值、全基因组测序分析碳青霉烯类异质性耐药菌株的可能耐药机制。结果通过E-test纸条法和PAP法鉴别筛选出8株亚胺培南异质性耐药铜绿假单胞菌,检测发现异质性耐药菌株对多黏菌素B、头孢他啶、美罗培南耐药率较高,对环丙沙星等更敏感。全基因组测序分析发现碳青霉烯类异质性耐药铜绿假单胞菌无可确证的基因突变,但可能与延伸因子P基因有关。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素异质性耐药的研究进展

异质性耐药指同一克隆菌株中同时存在对某种抗菌药物耐药及敏感亚群的现象。碳青霉烯类抗生素是临床治疗铜绿假单胞菌感染的常用药物,随着其使用增加,碳青霉烯类异质性耐药铜绿假单胞菌(CHPA)的检出率日益增高。但是,至今没有标准、高效、低成本的CHPA检测方法应用于临床,常导致CHPA漏检和临床治疗失败。本文对异质性耐药的定义、检测方法、CHPA的耐药机制、临床及流行病学特征进行综述,为临床诊断和治疗CHPA感染提供参考。

猪源支气管败血波氏杆菌对庆大霉素异质性耐药的研究

为分析临床分离的52株猪源支气管败血波氏杆菌(Bb)在纸片扩散法(K-B)药敏试验中出现的庆大霉素(GEN)异质性耐药(HR)情况,本研究采用微量肉汤稀释法检测52株Bb分离株对GEN的最小抑菌浓度(MIC);采用K-B法检测分离株对GEN的敏感性;通过观察抑菌环内是否有菌落初步筛选疑似GEN HR菌株;采用菌落谱性分析法(PAP)测定初筛菌株的MIC与最大不抑菌浓度(MNIC)的比值,以及耐药亚群菌株的发生频率,验证初筛的HR菌株。结果显示:52株猪源Bb对GEN耐药的菌株占13.46%(7/52),多数分离株的MIC值为2μg/mL~8μg/mL,对GEN表现为敏感或中介,占全部菌株的86.54%(45/52),其中Bb48株的MIC为2μg/mL,抑菌环直径为16 mm属于GEN敏感菌株。通过观察纸片法药敏试验中的抑菌环内是否存在菌落,初步筛选对GEN HR的菌株。结果显示,有7株疑似HR菌株;PAP试验结果显示,6株疑似HR菌株的MIC/MNIC比值均小于8,为假阳性HR菌株,只有Bb48株的MIC/MNIC值为16且耐药亚群发生频率为1.3×10^(-6),按照标准判定其为GEN HR Bb菌株。从PAP试验验证的Bb48株中有菌落生长的最高浓度GEN平板上随机挑3株耐药亚群菌株,37℃培养12 h,每小时测一次菌落数,共测12 h连同Bb48株一起绘制生长曲线;将上述试验选取的3株耐药亚群菌株连续传50代,每5代测其MIC值判定耐药亚群菌株的耐药遗传稳定性。生长曲线结果显示Bb48株及其耐药亚群菌株的生长速率均无显著差异(P>0.05);耐药遗传稳定性试验结果显示,将Bb48株中的3株耐药亚群菌株传代,其中两株菌各代次的MIC均为32μg/mL,1株菌的MIC为8μg/mL~32μg/mL。表明耐药亚群菌株对GEN的耐药性能够有效遗传。上述结果表明,52株猪源Bb中的Bb48为GEN HR菌株,Bb48及其耐药亚群菌株的生长速率基本一致,且对GEN的耐药性能够稳定遗传。本研究首次得到了罕见的对GEN HR的Bb菌株,提示临床中应合理使用GEN,并监测HR菌株的出现,对临床使用GEN治疗猪源Bb感染具有重要指导意义。