线性探针技术快速检测耐药结核分枝杆菌的应用评价

目的评价线性探针技术(Geno-Type~?MTBDRplus)检测结核分枝杆菌耐药性的可靠性和及时性。方法用线性探针技术对240株结核分枝杆菌进行利福平、异烟肼耐药性检测,以比例法药敏试验作为金标准,比较线性探针法与比例法药敏试验耐药结果的符合程度,评价其准确性和应用价值,同时比较二者检测报告时间。结果与比例法相比较,线性探针技术检测异烟肼敏感性96.8%,特异性95.3%;阳性预测值97.4%,阴性预测值94.3%;检测利福平敏感性95.8%,特异性91.8%;阳性预测值94.4%,阴性预测值93.4%。比例法检出耐多药88例,检出率为36.7%,线性探针法检出耐多药87例,检出率36.3%,一致率为98.9%,检测耐多药的敏感度98.9%,特异性100%;阳性预测值100%,阴性预测值99.3%,两种方法检出率差异无统计学意义(校正x^2=0.0000,P=1.0000)。结论线性探针技术检测利福平、异烟肼耐药性与比例法具有高度一致性,有较高的敏感性和特异性,而且操作简便、结果准确,报告时间短,可以作为地市级快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法。

经皮肺穿刺组织行结核分枝杆菌/利福平耐药基因快速检测对涂阴肺结核的诊断价值

据WHO估算,2017年全球新发结核病患者约1 000万,结核病发病率为133/10万,其中中国的估算结核病新发患者数为88.9万,估算结核病发病率为63/10万^([1])。结核病的有效控制依赖于准确而快速的诊断及治疗。涂阴肺结核因其诊断较涂阳肺结核困难,尤其当肺部影像学特征不典型时,往往易造成漏诊、误治。临床工作中涂阴肺结核占活动性肺结核的比例超过60%^([2]),涂阴肺结核已成为我国结核病患病率下降的主要障碍。

PCR法及环介导等温扩增法筛查食源微生物的耐药基因

耐药基因可通过垂直传播和水平传播等途径在微生物的种内和种间进行传递,食用受到耐药菌污染的食品,具有威胁人类健康的潜在可能。为建立耐药基因快速检测方法并应用于食源性微生物耐药基因的筛查,对食源性耐药菌在食品中的存在状况、耐药种类进行了探讨。采集了3个不同菜市场的9份食品样本,对食源菌进行了分离培养,使用四环素、链霉素、红霉素、氯霉素、甲氧苄胺嘧啶进行抗性菌筛选,并利用聚合酶链式反应(PCR)技术及环介导等温扩增(LAMP)法对8种抗性基因进行筛查,同时用实时荧光定量技术对结果进行了验证。9份食品样本中,菌落总数在105CFU/g至107CFU/g。红霉素抗性的菌落数最多,除1份样本外均在105CFU/g以上;氯霉素抗性菌菌落数最低,除1份样本之外均在103CFU/g以下。在对8种耐药基因筛查时发现,在四环素抗性菌中耐药基因tetA阳性率最高,为75.56%。采用LAMP法筛查耐药基因,阳性率高于PCR法。结果表明,具有抗药性的食源菌在样本中大量存在,这提示食品可以作为抗性菌存在和传播的重要介质。而LAMP作为一种简单、快速的基因检测技术可以用于耐药基因的快速筛查,为了解抗性菌在食品加工环境的污染和分布情况,以及消杀防控措施的采取和评估提供了基础信息。

结核分枝杆菌游离DNA检测在肺外结核诊断中的价值

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)游离DNA(cfDNA)检测技术在肺外结核诊断中的应用价值。方法选取2021年7月至2022年12月该院收治的高度疑似肺外结核患者266例作为研究对象,根据临床诊断结果,分为肺外结核组117例和非结核组149例。所有患者均采集脑脊液、胸腔积液、尿液及血液标本,并同时进行MTB cfDNA检测、结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(GeneXpert MTB/RIF)、涂片抗酸染色及血液标本结核感染T细胞γ干扰素释放试验(TB-IGRA)。通过分析4种检测方法的效能指标评估MTB cfDNA检测技术在肺外结核病诊断中的临床价值。结果MTB cfDNA检测法对脑脊液、胸腔积液、尿液中MTB的检出率均显著高于涂片抗酸染色(χ^(2)=5.714、9.289、9.226,P=0.017、0.002、0.002)。虽然MTB cfDNA检测法对脑脊液、尿液中MTB的检出率高于GeneXpert MTB/RIF,但差异无统计学意义(χ^(2)=0.143,P=0.705;χ^(2)=0.648,P=0.421);MTB cfDNA检测法对胸腔积液中MTB的检出率显著高于GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=4.222,P=0.040)。在肺外结核组,MTB cfDNA检测法的MTB检出率为26.50%(31/117),显著高于GeneXpert MTB/RIF[15.38%(18/117)]和涂片抗酸染色[3.42%(4/117)],差异均有统计学意义(χ^(2)=4.362,P=0.037;χ^(2)=24.492,P<0.05);而TB-IGRA的MTB检出率为72.65%(85/117),显著高于MTB cfDNA检测(χ^(2)=49.850,P<0.001)。MTB cfDNA检测法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为26.50%、100.00%、100.00%、63.40%,其灵敏度显著高于GeneXpert MTB/RIF(15.38%)和涂片抗酸染色(3.42%),但低于TB-IGRA(72.65%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较高的灵敏度及特异度,故MTB cfDNA检测在肺外结核诊断中具有较好的应用前景。

支气管肺泡灌洗液和痰液Xpert MTB/RIF检测对肺结核临床诊断的价值分析

目的分析支气管肺泡灌洗液和痰液结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测(Xpert MTB/RIF)在肺结核临床诊断中的应用价值。方法选取2019年1月至2021年5月在川北医学院附属医院送检肺泡灌洗液或痰液进行Xpert MTB/RIF的1352例可疑肺结核患者作为研究对象,根据临床诊断分为肺结核组(699例)和非肺结核组(653例)。回顾性分析Xpert MTB/RIF、抗酸涂片和γ-干扰素释放试验(IGRAs)的检测结果,比较3种方法的诊断效能,其包括灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数、Kappa系数和受试者工作特征曲线下面积(AUC)。结果在26例同时送检肺泡灌洗液和痰液标本的肺结核患者中,肺泡灌洗液标本Xpert MTB/RIF的检出率为61.5%(16/26),高于痰液标本的检出率[42.3%(11/26)]。在619例同时采用Xpert MTB/RIF、抗酸涂片和IGRAs检测的可疑肺结核患者中,Xpert MTB/RIF的灵敏度(64.7%)、特异度(99.6%)、阳性预测值(99.6%)和阴性预测值(63.1%)相对较高,其约登指数(0.643)、Kappa系数(0.577)和AUC(0.821)均大于抗酸涂片和IGRAs。Xpert MTB/RIF利福平耐药基因突变结果显示,利福平耐药率为11.7%,其中以Probe E探针突变为主,且存在多个探针联合突变。结论Xpert MTB/RIF的灵敏度和特异度相对较高,在肺结核的临床诊断中具有较高的应用价值。

异质性耐药对结核分枝杆菌表型和基因型耐药检测结果的影响

目的 研究异质性耐药对MTB基因型耐药检测结果的影响.方法 选择上海市疾病预防控制中心在2009年收集的80株氧氟沙星临床耐药菌株,利用基因测序检测菌株在gyrA和gyrB耐药决定区的基因突变情况,再用分子克隆和荧光定量PCR探针熔解曲线法,分析经基因测序未检测到耐药突变的菌株中是否存在异质性耐药现象.结果 基因测序报告显示,80株氧氟沙星耐药菌株中有15株未发现已知gyrA或gyrB耐药决定区的基因突变.测序图谱及分子克隆和探针熔解曲线法分析结果表明,其中14株菌株含有已知gyrA耐药突变,即存在异质性耐药现象.纳入异质性耐药的菌株后,基因型与表型耐药检测的符合率从81.3％（65/80）提高到98.8％（79/80）.结论 异质性耐药是导致表型和基因型耐药检测结果不符的重要原因.为排除异质性耐药对耐药基因检测的影响,提高基因型与表型耐药检测结果的一致性,需要开发应用更敏感的基因型耐药检测技术,以提高耐药结核病快速检测水平.

支气管肺泡灌洗液联合痰液Xpert MTB/RIF在肺结核患者中的诊断效能

目的:探讨支气管肺泡灌洗液联合痰液利福平耐药快速检测(Xpert MTB/RIF)在肺结核患者中的诊断效能。方法:选择鹰潭市中医院2019年1月至2020年1月期间收治的100例疑似肺结核患者,常规采集支气管肺泡灌洗液、痰液标本,并完成Xpert MTB/RIF检测。以结核分枝杆菌培养作为标准,分析支气管肺泡灌洗液、痰液Xpert MTB/RIF及二者联合检测在肺结核患者中的诊断效能。结果:100例疑似肺结核患者经结核分枝杆菌培养确诊56例,确诊率为56.00%;痰液Xpert MTB/RIF检查阳性41例,肺泡灌洗液Xpert MTB/RIF阳性46例,而两种方法联合检查阳性53例。灌洗液标本联合痰液标本Xpert MTB/RIF检测用于肺结核患者中诊断准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值均高于单一标本检测,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论:支气管肺泡灌洗液、痰液Xpert MTB/RIF用于肺结核患者中均具有较高的检出率,且二者联合检测能提高诊断灵敏度与特异度,用于肺结核诊断中具有较高的参考价值。