KB细胞耐药株的建立及其耐药机制的探讨

用对长春新碱（ＶＣＲ）敏感的ＫＢ细胞为亲本，通过诱变剂甲基磺酸乙酯刺激，然后在培养液中加入浓度递增的ＣＶＲ，得到耐药细胞株ＫＢＶ２００。此细胞株对ＶＣＲ的耐受程度约为ＫＢ细胞的１７５倍。对其它抗肿瘤药物如紫杉醇、秋水仙碱和阿霉素等也有不同程度的交叉耐药性。进一步研究表明，ＫＢＶ２００对３Ｈ－ＶＣＲ的蓄积明显减少，且耐药基因（ｍｄｒ１）表达增加。钙通道阻滞剂维拉帕米（Ｖｅｒ）可增加ＫＢＶ２００对３Ｈ－ＶＣＲ的蓄积和对ＶＣＲ的敏感性。这些结果提示，ＫＢＶ２００耐药的机制可能是由于ｍｄｒ１基因表达增加，产生过量的ｐ－糖蛋白，使药物外排增多所致。

阿霉素诱导人肝癌细胞多药耐药株的建立及其生物学特性评价

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍,为探讨体外逆转肿瘤MDR的新方法,本研究建立人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/Adm,并研究其生物学特性。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增诱导法,建立HepG2/Adm。观察细胞的生长规律;用MTT法检测多药耐药性;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-relatedprotein,LRP)及谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达;逆转录PCR半定量检测4种MDR基因mRNA表达量。结果:与HepG2细胞比较,HepG2/Adm细胞倍增时间延长30.01h,S期细胞减少(5.6±0.03)%,G1、G2期细胞增多犤(4.2±0.09)%,(1.5±0.08)%犦。该细胞对多种抗肿瘤药物耐药,HepG2/Adm对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的26倍,细胞表面多药耐药蛋白P-gp、MRP及GST的表达显著增加,LRP表达有一定的增加;上述四种耐药蛋白基因的表达均明显增加。结论:HepG2/Adm细胞具有多药耐药特性,其耐药性与P-gp、MRP及GST的过表达有关。

苦参碱逆转乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药与PI3K/AKT通道的关系

目的探索苦参碱对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用及其机制。方法采用MTT法检测不同浓度苦参碱和MK2206作用MCF-7/ADR细胞24 h后的生长抑制率,以抑制率为10%的药物浓度为检测标准;用荧光RT-PCR、Western blot法检测不同浓度苦参碱作用MCF-7/ADR细胞24 h后MDR1、MRP1、PTEN、AKT基因mRNA和蛋白的表达。结果荧光定量RT-PCR结果显示0.6、1.2 g/L的苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高,耐药基因MDR1、MRP1的表达量逐渐降低(0.6 g/L苦参碱组MDR1基因的相对表达量为0.659±0.074,MRP1基因的相对表达量为0.503±0.058,与空白对照组相比P<0.01);PI3K/AKT信号通路中的PTEN基因表达量逐渐增高而AKT基因的表达量逐渐降低;相同抑制率的苦参碱组(0.6 g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,两组降低MDR1、MRP1、AKT基因表达量的差异不明显(P>0.05),MK2206组更能增高PTEN基因的表达量。Western blot检测结果显示0.3、0.6、1.2 g/L不同浓度苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高耐药蛋白p-gp、MRP1表达量逐渐降低(0.6 g/L苦参碱组p-gp蛋白的相对表达量为0.316±0.033,MRP1蛋白的相对表达量为0.134±0.014,与空白对照组相比P<0.01),PI3K/AKT信号通路中的p-AKT蛋白表达量逐渐降低,PTEN蛋白表达量逐渐增高,总AKT基因表达量变化不明显;相同抑制率的苦参碱组(0.6 g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,苦参碱组更能降低p-gp、MRP1的蛋白表达量且更能增高PTEN的蛋白表达量,但MK2206组更能降低p-AKT的蛋白表达量,对总AKT蛋白表达量两组差异不明显(P>0.05)。结论苦参碱具有逆转乳腺癌多药耐药的作用,其机制可能是通过抑制PI3K/AKT通道发挥作用。

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制——耐药株外膜蛋白OprD_2缺失

目的;研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法:以亚胺培南为代表,应用十二烷酸磺酸钠－聚丙烯酞胺凝胶电泳(SDS-PAGE)外膜蛋白图谱、凝胶分光光度扫描分析方法,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株。结果:耐药组OprD2相对含量显著低于敏感组。结论:OprD2的缺失是铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因。

革兰氏阴性杆菌氟喹诺酮耐药株的实验研究

对８２株临床分离的氟喹诺酮药物（Ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ，ＦＱＮＳ）耐药菌进行了多种抗生素敏感试验。结果显示８２株耐药菌对５种药物耐药率分别为：诺氟沙星９７．５６％、依诺沙星９６．３４％、罗美沙星９５．１２％、氧氟沙星９２．６８％、环丙沙星８７．８％。３２株菌对ＦＱＮＳ存在较普遍的交叉耐药现象，对氨苄青霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素及头孢菌素类的多重耐药率也较高。８２株菌中有４３株菌携带质粒（５２．４４％）。质粒消除及转化实验结果表明：质粒与ＦＱＮＳ耐药性无关。

白色假丝酵母氟康唑耐药株的筛选

采用美国国家临床实验标准化委员会(NCCLS)推荐的最小抑菌浓度(MIC)测定方法,从保藏的50多株白色假丝酵母(Candida albicans)(均分离自临床病人)中挑选出两株氟康唑(FCZ)敏感株:编号为BMU8945(MIC值为0.125μg/ml)和BMU8977(MIC值为0.25μg/ml)。同时选择一株白色假丝酵母ATCC14053(MIC值为0.5μg/ml)作为实验原始菌株。经紫外线(UV)和硫酸二乙酯(DES)诱变后,获得近千个FCZ耐药突变菌落(MIC值在64μg/ml以上)。经传代培养,突变茵落的耐药特性能稳定遗传。

河南蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药株不同pH抑菌作用研究

目的 探讨河南蜂胶在不同 pH条件下对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果。 方法 采用琼脂平板扩散法 ,以金葡菌耐药株为实验菌种 ,将其分为 8个不同 pH环境组 ,每张滤纸片滴加 31%河南蜂胶溶液7μl,记录蜂胶在不同 pH条件下对金葡菌耐药株 2 4h抑菌效果。 结果 在 pH 5 .0、5 .5、6 .0、6 .5、7.0、7.5、8.0、8.5不同条件下对金葡菌耐药株 2 4h的抑菌环直径 (mm)分别为 :2 4 .2 5± 1.0 6、18.33± 3.0 1、18.75± 2 .4 7、18.33±1.5 3、15 .33± 1.15、15 .33± 0 .0 8、16 .0 0± 1.32、11.75± 0 .4 3。结论 河南蜂胶对金葡菌耐药株的抑菌效果随pH增加 ,抑菌环直径变小 ,pH 5 .0时抑菌环直径最大 ,抑菌活性最强 ,随 pH增加 。

临床分离铜绿假单胞菌喹诺酮耐药株gyrA基因突变及其对β-内酰胺类药物敏感性研究

利用 PCR、限制性片段多态性分析 (RFL P)、DNA单链构像多态性分析 (SSCP)和 DNA测序等方法 ,对 10株成都地区临床分离耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A基因进行研究。结果表明 ,成都地区耐喹诺酮类药物铜绿假单胞菌 gyr A的喹诺酮耐药决定区编码第 83位氨基酸密码子表现出高频单点突变 (10株中有 8株 ) ,其突变方式为 ACC→ATC。gyr A的 PCR扩增产物 Sac II酶切片段与测序结果一致。SSCP的带谱与测序结果比较 ,除 1株 (PSA2 )的 SSCP带谱与标准株相同 ,但测序结果有点突变外 ,其余菌株与测序结果一致。因此 ,利用 PCR- SSCP- RFL P系统 ,可快速、准确的检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌 gyr A中至少一个碱基的差异。用二倍稀释法测定喹诺酮和 β-内酰胺类药物对耐药突变株体外抗菌活性 ,结果表明 ,铜绿假单胞菌 gyr A基因突变株对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢他啶、亚胺培南和哌拉西林表现出不同的敏感性。试验所用 8株突变株对诺氟沙星和环丙沙星表现出高水平抗性 ;3株对左氧氟沙星敏感 ;3株对头孢他啶和哌拉西林表现出耐药 ,2株对亚胺培南耐药。

不同pH值下蜂胶对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果

采用琼脂平板扩散法,以金黄色葡萄球菌耐药株为实验菌种,探讨蜂胶在不同pH值条件下对金黄色葡萄球菌耐药株的抑菌效果。结果表明:蜂胶在不同pH值条件下对金葡菌耐药株的抑菌效果不尽相同,随pH值增加,抑菌环直径变小,pH值5.0时抑菌环直径最大;pH值5.5-6.5三组的抑菌环直径接近,组间差异不显著,pH值7.0-8.0三组的抑菌环直径接近且差异不显著;但pH值5.5-6.5三组的抑菌环直径显著大于pH值7.0-8.0三组的抑菌环直径;pH值8.5组抑菌环直径最小,与其他组差异极显著。提示蜂胶在pH值5.0时对金葡菌耐药株的抑菌活性最强,随pH值增加,抑菌活性呈阶段性减弱。

链球菌2型对恩诺沙星耐药机制及耐药株毒力变化研究进展

猪链球菌病(Swine Streptococcosis,SS)是由多种溶血性链球菌引起的急性发热性人兽共患传染病,是近年来严重危害我国养猪业发展的新发细菌性传染病。猪链球菌耐药问题非常突出。本文对链球菌2型对恩诺沙星耐药机制及耐药株毒力变化研究进展进行综述,重点介绍猪链球菌2型逐渐演变为耐药菌时,其毒力因子和致病性之间的关系。最大限度地降低细菌耐药性与延长抗菌药物的疗效周期是人类所面临的长期挑战。

正交设计筛选抗幽门螺杆菌甲硝唑耐药株天然药物的最佳组合方案

目的筛选天然药物治疗幽门螺杆菌(Hp)甲硝唑耐药株的最佳组合方案。方法运用正交设计方法筛选臭灵丹、石榴皮、蒲公英三种天然药物抗Hp甲硝唑耐药株的最佳组合。结果三种天然药物对Hp甲硝唑耐药株的最佳组合方案为:臭灵丹(MIC90,77.9mg/ml),石榴皮(MIC90,131.1mg/ml),蒲公英(MIC75,117.27mg/ml)。结论正交设计方法有效的筛选出了三种天然药物的最佳组合方案,提高了实验效率,节约科研资源。

氟喹诺酮类药物对细菌突变耐药株的选择

防突变浓度 (MPC)是一种检测细菌耐药性变异的方法 ,最早由美国国立卫生研究院的XilinZhao研究小组于 1999年提出。MPC的定义是 :当 >10 10 CFU的细菌接种在含不同浓度抗菌药物的琼脂平板上 ,没有细菌生长的平板中的最低药物浓度。它同时抑制了敏感菌株和常规耐药突变菌株的生长。在此浓度上 ,细菌必须同时存在两种耐药机制或双酶突变才能生长。对于一些C8-甲氧基氟喹诺酮类药物 ,在常规剂量给药时 ,其MPC低于血/组织的药物浓度。可以阻止突变菌株的生长。

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对几种抗球虫药的敏感性

为了探讨鸡柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对常用抗球虫药的敏感性，采用尼卡巴嗪、氯苯胍、球痢灵、地克珠利和常山酮5种抗球虫药，对由晋球1号球虫疫苗虫株复制的病鸡进行防治试验，通过相对卵囊产量（ROP）、相对增重率、抗球虫指数（ACI）、病变记分减少率（RLS）和最适抗球虫活性百分率（PoAA）5项指标进行综合评定。结果表明，柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对盐酸氯苯胍无抗药性，对地克珠利有轻度抗药性，对常山酮、球痢灵、尼卡巴嗪有部分抗药性，它们的抗球虫指数为187．46～246．75，达到了抗球虫效果。

川芎嗪对肝癌多药耐药株SMMC-7721/ADM的逆转作用

目的研究川芎嗪对肝癌多药耐药株SMMC-7721/ADM的逆转及其机制。方法用MTT法检测常用化疗药物对SMMC-7721/ADM的毒性。用流式细胞仪(FCM)检测SMMC-7721/ADM细胞表面P糖蛋白(Pgp)的表达及细胞内柔红霉素的相对浓度。结果川芎嗪可提高SMMC-7721/ADM细胞内化疗药物的浓度,增加阿霉素等化疗药物对SMMC7721/ADM的毒性作用。结论川芎嗪可逆转人肝癌多药耐药株SMMC-7721/ADM,其机制可能与胞内ADM浓度有关。

人卵巢癌细胞阿霉素耐药株的建立及其耐药机制的研究

目的：建立人卵巢癌体外耐药模型，研究卵巢癌对阿霉素的耐药特征和机制。万法；应用浓度递增和短时间作用法，从人卵巢癌细胞A2780中培养出对阿霉素耐药细胞亚株（A2780／ADM）。采用MTT法检测耐药细胞的耐药指数及对抗癌药物的敏感性，用高效液相色谱仪捡测耐药细胞内阿霉素含量，以及应用RT-PCR法和免疫组化法检测MDR1和GST－π的表达情况。结果：（1）A2780／ADM对ADM的耐药指数为38．2，而且其倍增时间较A2780细胞延长，对VCR、MTX呈高度耐药状态，对KSM、CARP、PYM、VP16、CTX和5－FU均有不同程度的耐药。（2）耐药细胞内阿霉素含量明显低于A2780细胞。（3）耐药细胞MDR1的表达呈阳性，而GST－π只有在高浓度的耐药细胞内才呈弱阳性。结论：A2780细胞对阿霉素的耐药是获得性的，并呈多药耐药特征，其耐药的主要原因是细胞内MDR1的过度表达，导致药物在耐药细胞内浓度降低。此项研究结果有助于卵巢癌患者化疗选用药物时作为参考。

蛋白激酶C对大肠癌耐药株LoVo/Adr细胞多药耐药性的影响

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）活性对大肠癌多药耐药性的影响以及可能涉及的调控机制。方法 （1）以放射性32P,掺入法检测了在十字孢碱（SP）和佛波脂（PMA）作用下大肠癌耐药细胞LoVo/Adr中PKC活性的变化;（2）以流式细胞术检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞摄入阿霉素的影响;（3）以RT-PCR法检测了PKC活性对LoVo/Adr细胞mdr1基因表达的影响。结果（1）PMA可双向调节LoVo/Adr细胞的PKC活性,SP对LoVo/Adr细胞胞浆和胞膜中的PKC活性均有显著的抑制效果;（2）在PMA作用30min时,LoVo/Adr细胞中阿霉素的摄入量显著减少,作用24h时,阿霉素摄入量显著增加;（3）PMA和SP均不影响mdr1基因的表达。结论 PKC可调控细胞的多药耐药性,但并非通过调节mdr1基因的mRNA水平而实现。

氯霉素耐药株与敏感株伤寒杆菌所致伤寒的临床比较

氯霉素耐药株与敏感株伤寒杆菌所致伤寒的临床比较蚌埠医学院附属医院李志军，刘雁，王翠兰我院１９７８～１９９３年共收治经细菌培养确诊为伤寒者１８７例，其中６５例（３４．８％）系耐氯霉素的伤寒杆菌（ＣＲＳＴ）所致。为了解ＣＲＳＴ所致伤寒与氯霉素敏感株（ＣＳ...

治疗耐药株伤寒的非传统抗菌剂进展

自1948年起,氯霉素一直作为治疗伤寒的首选药而在世界各地广泛应用。自1972年墨西哥发生耐氯霉素伤寒杆菌流行后,则推荐氨苄青霉素、复方新诺明作为治疗耐氯霉素伤寒的首选药。近十余年来,随着R质粒(存在于细胞浆内、染色体外的遗传物质,含结合型耐药因子)的广泛传播,世界各地出现的耐药伤寒杆菌已逐渐演变为多重耐药菌株。它不仅能同时耐受伤寒传统治疗药物氯霉素、复方新诺明和氨苄青霉素,有些还耐四环素、链霉索、卡那霉索、呋喃唑酮和某些喹酮类药物。其临床特点为病情重、热程长、并发症多、复发率高。氯霉素等常用药物对当今耐药株伤寒的疗效差,疗程长,使国家和个人都遭受很大经济损失,并有一定的病死率。这一切,就促使我们积极寻找新的抗菌剂和新的方法来治疗伤寒。

柔嫩艾美耳球虫早熟耐药株对磺胺类抗菌药的耐药性研究

目的:检测柔嫩艾美耳早熟耐药株对4种磺胺类抗菌药的耐药性,为鸡球虫疫苗的临床应用提供依据。方法:采用鸡体实验法,以最适抗球虫活性百分数(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)四项指标综合判定接种5×104个柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠4种磺胺类抗菌药的耐药性情况。结果:磺胺嘧啶、三甲氧苄氨嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的POAA均小于界定值50%,为阳性,只有消炎磺的POAA值大于50%,为阴性。四种药物的RLS和ROP值均为阳性。消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶的ACI值为160-179,具有中等抗药能力,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠的ACI值低于160,为阳性,具有完全的耐药性。结论:柔嫩艾美耳早熟耐药株对消炎磺、三甲氧苄氨嘧啶具有中等程度的抗药性,磺胺嘧啶、磺胺氯吡嗪钠具有完全的耐药性。