左氧氟沙星联合万古霉素缩小金黄色葡萄球菌耐药突变选择窗的初步研究

目的:在体外初步探讨联合用药可缩小单药对细菌的耐药突变选择窗(MSW),为临床合理使用现有抗菌药物,防止细菌耐药产生提供理论依据。方法:应用肉汤法富集1010CFU/mL细菌,琼脂平板二倍稀释法测定左氧氟沙星、万古霉素单药和两药联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最低药物浓度(MPC)和MSW。结果:左氧氟沙星、万古霉素单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MSW分别为16和64。万古霉素和左氧氟沙星联合用药(1MIC+8MIC,2MIC+4MIC)使左氧氟沙星单药对ATCC29213的MSW缩小2～4倍。左氧氟沙星联合万古霉素用药(1MIC+16MIC,2MIC+8MIC)使万古霉素对ATCC29213的MSW缩小4～8倍。结论:万古霉素和左氧氟沙星联合用药可缩小各自单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MSW。

环丙沙星联合用药缩小鸡沙门氏菌耐药突变选择窗的研究

为研究环丙沙星联合用药对鸡沙门氏菌耐药突变选择窗(MSW)的影响,本研究采用琼脂二倍稀释法测定环丙沙星、阿米卡星、多西环素3种药物单独使用及联合用药对鸡沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)、防耐药变异浓度(MPC)和MSW。结果显示,环丙沙星联合阿米卡星和多西环素后鸡沙门氏菌MPC分别降低了8倍和16倍;环丙沙星和16 MIC多西环素联合时,能完全关闭环丙沙星的MSW。本研究表明环丙沙星联合阿米卡星和多西环素能够有效缩小鸡沙门氏菌的MSW,并且联合多西环素能关闭MSW,防止耐药突变株的富集。

氟喹诺酮药物对金黄色葡萄球菌同源耐药突变株的耐药突变选择窗研究

目的通过测定不同氟喹诺酮(FQ)药物对同源金黄色葡萄球菌耐药突变株的MIC和防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,M PC),分析不同药物的抗菌活性及限制耐药突变株选择的能力。方法分别采用环丙沙星和加替沙星琼脂平板筛选金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步和第二步耐药突变株。采用琼脂平板稀释法测定各耐药突变株的M IC和M PC,计算选择指数(MPCM/IC)。结果加替沙星和莫西沙星对金黄色葡萄球菌ATCC25923第一步耐药突变的M PC值(1～2μg/m l)明显低于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星(4～16μg/ml),以上5种FQ药物对第一步耐药突变的M PC值和选择指数分别为ATCC25923的2～8倍和1～4倍。加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变的M PC值为8～16μgm/l。结论对于金黄色葡萄球菌ATCC25923同源的第一步耐药突变株,加替沙星和莫西沙星限制下一步耐药突变株选择的能力强于环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星,结合药动学参数,环丙沙星、左氧氟沙星和帕珠沙星很容易选择出下一步耐药突变株;而加替沙星和莫西沙星则能够限制下一步耐药突变株的选择。对于第二步耐药突变株,加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。临床上为延长加替沙星和莫西沙星的应用时间,对于已对左氧氟沙星耐药的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。

酒石酸泰乐菌素联合阿莫西林钠缩小猪链球菌耐药突变选择窗的研究

为了使临床合理使用抗菌药物,防止细菌耐药性的产生提供理论依据。本研究探讨了在体外初步联合用药缩小猪链球菌(S.suis)的耐药突变选择窗(MSW)。应用肉汤法富集1010CFU/mL细菌,琼脂平板二倍稀释法分别测定酒石酸泰乐菌素(TLST)、阿莫西林(Amoxil)钠及两药联用后对S.suis分离株D10的防突变浓度(MPC)和MSW。TLST、Amoxil钠单药和两药联用对S.suis分离株D10的MSW分别为9.71、5.16和2.81。TLST和Amoxil钠联合用药使TLST对D10的MSW缩小3.5倍;TLST和Amoxil钠联合用药使Amoxil钠对D10的MSW缩小1.8倍。TLST和Amoxil钠联合用药可缩小各自单药对S.suis分离株D10的MSW。

氨基糖苷类药物在联合用药时缩小抗菌药物对鲍曼不动杆菌耐药突变选择窗中的作用

目的探讨氨基糖苷类药物与其他抗鲍曼不动杆菌药物联合应用时,在缩小抗菌药物对鲍曼不动杆菌的耐药突变选择窗的作用。方法选择阿米卡星、妥布霉素及奈替米星3种氨基糖苷类药物,同时选择4种临床常用的抗鲍曼不动杆菌药物:头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南-西司他丁、环丙沙星及左氧氟沙星进行试验。应用E试验法测定4种抗鲍曼不动杆菌药物和3种氨基糖苷类药物对鲍曼不动杆菌ATCC19606的MIC;琼脂平皿稀释法测定4种抗鲍曼不动杆菌药物单药及联合3种氨基糖苷类药物后对鲍曼不动杆菌ATCC19606的防耐药突变浓度,计算选择指数,根据联合前后选择指数的变化,观察氨基糖苷类药物和其他抗菌药物联合后对其耐药突变选择窗的影响。结果头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南-西司他丁、环丙沙星、左氧氟沙星单药对鲍曼不动杆菌ATCC19606的选择指数分别为:16、>32、16、32;联合阿米卡星后其选择指数分别为:1、2、4、4;联合妥布霉素后其选择指数分别为:2、2、8、8;联合奈替米星后其选择指数分别为:2、4、8、16。结论 4种抗鲍曼不动杆菌药物在分别联合3种氨基糖苷类药物后,对鲍曼不动杆菌的耐药突变选择窗明显缩小,可以有效减少耐药突变株产生,以联合阿米卡星后的作用最为明显。

耐药突变选择窗与细菌耐药的动物体内研究

目的探讨耐药突变选择窗(MSW)与体内细菌耐药发生的相关性。方法建立兔组织笼金黄色葡萄球菌感染模型,给予不同剂量的左氧氟沙星灌胃治疗。抽取组织笼内组织液进行药物浓度测定,同时监测组织笼内细菌药物敏感性变化。结果当左氧氟沙星浓度位于MSW内时,导致金黄色葡萄球菌耐药突变体的选择富集,引起耐药。当药物浓度低于抑制菌群中99%细胞生长的最低药浓度或高于防耐药变异浓度时,无耐药出现。当左氧氟沙星浓度在MSW内的下部时,最容易选择出耐药突变体,且耐药出现最快。结论MSW在体内存在,保持抗菌药物浓度在MSW以上可以限制耐药突变体的选择富集。

防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论的研究进展

目的:阐述防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论的最新研究进展。方法:查阅近年来国内外相关文献资料进行整理归纳。结果与结论:体外MPC测定、体外药效学研究、动物感染模型、人体内研究验证了MSW理论,防耐药突变体选择浓度和耐药突变选择窗理论为评价细菌耐药新的重要指标。

联合用药缩小凡纳滨对虾斑点气单胞菌耐药突变选择窗的研究

通过测定斑点气单胞菌单药和双药抗生素最低抑菌浓度(MIC)、防突变浓度(MPC)和耐药突变选择窗(MSW),探索合理使用抗菌药物,防止细菌耐药性产生的用药方案。利用药物敏感性实验测定斑点气单胞菌对10种抗生素的抗性,筛选出6种不同机制的敏感性抗菌药物,应用琼脂平板稀释法对斑点气单胞菌测定单药以及双药的最低抑菌浓度(MIC)和防突变浓度(MPC),计算选择指数(SI)和联合指数(CI),测定联合用药对耐药突变选择窗(MSW)的影响。结果显示:6种药物氯霉素、土霉素、利福平、红霉素、盐酸四环素、头孢霉素的MIC分别为0.512、0.416、6.272、2.048、0.386和0.512μg/m L;MPC分别为524.288、1 277.952、802.816、1 024.000、1 185.792和10.880μg/m L;SI值分别为1 024.000、3 072.000、128.000、500.000、3 072.000和21.250。土霉素与红霉素、盐酸四环素与红霉素、盐酸四环素与头孢霉素、土霉素与头孢霉素、盐酸四环素与土霉素、氯霉素与土霉素、氯霉素与盐酸四环素、利福平与氯霉素、利福平与头孢霉素、利福平与盐酸四环素、利福平与土霉素、红霉素与头孢霉素双药联合后的联合指数分别为1.000、1.000、1.000、1.000、0.834、1.500、1.500、0.834、2.000、2.000、1.000和2.000。双药联合明显降低了药物SI值,有效缩小了斑点气单胞菌耐药突变选择窗,其中利福平与盐酸四环素双药联合后SI值由128.000,3 072.000均降低至1.000,完全关闭了耐药突变选择窗,有效抑制斑点气单胞菌的耐药生长。

夫西地酸联合头孢类抗生素缩小金黄色葡萄球菌耐药突变选择窗的研究

目的:体外研究夫西地酸联合头孢类抗生素对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的影响,为使用临床抗菌药物和防止细菌耐药现象提供指导和理论依据。方法:肉汤法富集浓度为1010cfu/m L的金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用琼脂二倍稀释法测定夫西地酸单用及夫西地酸联用三种头孢类抗生素时的防耐药突变浓度(MPC)和防耐药突变选择窗(MSW)。结果:夫西地酸、头孢唑林、头孢丙烯、头孢曲松对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC分别是128、1、4、8 mg/L,MSW分别为128、4、8、4。夫西地酸联合头孢唑林后,MPC下降至32 mg/L;夫西地酸联合头孢丙烯后,MPC下降至8 mg/L;夫西地酸联合头孢曲松后,MPC下降至8 mg/L。结论:夫西地酸单独应用时,MSW较宽易产生耐药菌,与三种头孢类抗生素联合应用后夫西地酸的MSW可明显缩窄。

2种喹诺酮药物单用及联合氨苄西林或卡那霉素对猪源沙门菌耐药突变选择窗的研究

为探讨联合用药对猪沙门菌耐药突变选择窗的影响,采用琼脂二倍稀释法测定环丙沙星、左氧沙星及其联合氨苄西林和卡那霉素对56株临床分离的猪源沙门菌的最低抑菌浓度(MIC)、耐药变异浓度(MPC)、耐药指数(SI),并进行统计学分析。结果显示,环丙沙星联合氨苄西林和卡那霉素后其耐药变异浓度(MPC)降低到2mg/L和1mg/L,SI分别下降了4倍和8倍;左氧沙星联合氨苄西林和卡那霉素MPC降低到1mg/L和0.5mg/L,SI分别下降了2倍和4倍;且两种药物与卡那霉素联合能完全关闭其突变选择窗(MSW)。本研究表明,环丙沙星、左氧沙星联合氨苄西林和卡那霉素能够缩小甚至关闭其单药的MSW,防止耐药的产生。

头孢噻肟-恩诺沙星联合用药对携带F17毒力基因牛源大肠埃希氏菌耐药突变选择窗的影响

为研究头孢噻肟-恩诺沙星联合用药对携带F17毒力基因牛源性大肠埃希氏菌(E.coli)耐药突变选择窗的影响,采用琼脂二倍稀释法测定头孢噻肟(CTX)和恩诺沙星(ENR)对11株携带F17毒力基因E.coli分离株单独用药及联合用药的最低抑菌浓度(MIC)、耐药突变度(MPC),计算耐药指数(SI)。结果显示,CTX和ENR联合用药后,CTX的MPC_(90)降至256 mg/L,SI下降了4倍,MPC_(90)/MIC_(90)为1,即联合ENR后能使CTX的耐药突变选择窗(MSW)完全关闭;同样联合用药后ENR的MPC_(90)降至256 mg/L,SI下降了2倍,MPC_(90)/MIC_(90)为2,MSW变窄,即联合CTX后能使ENR的MSW减小。结果表明,CTX联合ENR能够缩小甚至关闭其单药的MSW,有效防止耐药的产生。本研究为E.coli的耐药性防止提供了新思路,同时也为指导临床用药提供了新的思路。

多粘菌素E单用或联合头孢他啶-阿维巴坦防止泛耐药铜绿假单胞菌耐药突变的体内外研究

目的在体内外探讨多粘菌素E(COL)单用或联合头孢他啶-阿维巴坦(CAZ-AVI)对泛耐药铜绿假单胞菌(XDR-PA)防耐药突变能力的影响,为防止COL进一步耐药的产生提供理论依据。方法采用琼脂平板倍比稀释法测定CAZ-AVI和COL单药对10株XDR-PA的最低抑菌浓度(MIC)。应用肉汤法富集浓度为10^(10)CFU/mL的细菌,琼脂平板倍比稀释法测定上述抗菌药物单用及联合使用对XDR-PA的防耐药突变浓度(MPC);建立兔组织笼感染模型,分别以生理盐水,三种剂量COL[2.5、3.75、5 mg/(kg·d)]单用或基础剂量COL[2.5 mg/(kg·d)]联合CAZ-AVI[(50+12.5)mg/(kg·d)]进行治疗,探讨兔组织笼感染模型中药物浓度与耐药突变菌形成的相关性;对体内筛选出的COL耐药突变株二组分系统PmrAB、PhoPQ、ParRS和CprRS进行PCR扩增并测序分析。结果COL对10株XDR-PA均敏感,MIC范围为0.25~2 mg/L;CAZ-AVI对8株XDR-PA表现为敏感,2株耐药。COL单用对10株XDR-PA的MPC范围是64~256 mg/L,联合CAZ-AVI时MPC范围降低为4~16 mg/L。在兔组织笼模型中,COL的浓度在2 h达到峰值,在一次给药间隔内其浓度均都在耐药突变选择窗(MSW)内。当给与不同剂量COL单药治疗时,XDR-PA的菌量在治疗一次后细菌的生长明显受到抑制,但在24 h后又恢复至原有的水平。当基础剂量COL联合CAZ-AVI时,组织笼内PA的菌量保持持续下降趋势,未出现恢复生长的现象。在COL单药组中均筛选出耐药突变株,每组随机选择5株,其对COL的MIC范围为8~128 mg/L,基因突变多发生在PmrB和ParS。结论COL与CAZ-AVI联合使用可降低其单用对XDR-PA的防耐药突变浓度,缩小MSW,有效保护COL抗菌活性。

氨苄西林和安普霉素对禽源沙门菌的体外联合效果和耐药突变选择窗的研究

目的探讨氨苄西林(ampicillin,AMP)和安普霉素(apramycin,APR)联合是否能增强对禽源沙门菌的抗菌效果,以及能否缩小甚至关闭AMP对沙门菌的耐药突变选择窗(mutant selection window,MSW)。方法以ATCC 25922为质控菌,对22株禽源沙门菌用棋盘稀释法进行AMP和APR的联合药敏试验,并以部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)评价联合效果,挑选其中2株菌用试管法进行杀菌动力学试验并绘制时间-杀菌曲线;挑选6株菌进行不同加药顺序的联合药敏试验;对其中10株用琼脂稀释法进行AMP单药和联合用药的防耐药突变浓度(Mutation Preventive Concentration,MPC)测定,以选择指数(selection index,SI)和MSW范围来评价防突变效果。结果22株菌的联合药敏试验中相加效应占56.52%,协同效应占43.48%;杀菌动力学试验的2株菌在第4小时的联合用药组菌落对数值较最有效的单药组分别减少了3.10和1.94 lgCFU/mL;不同加药顺序试验的配对t检验结果为P>0.05,无显著性差异;MPC的测定试验中,SI值≥1的菌株的MSW范围明显缩小甚至关闭。结论AMP和APR对禽源沙门菌的体外联合效果较好,且能有效缩小AMP对沙门菌的耐药突变选择窗,不同加药顺序对联合用药效果无影响。

耐药突变选择窗理论的研究与意义

随着抗菌药的广泛应用，细菌的耐药性问题变得越来越严重。现在几乎每一种有效的抗菌药物都发现了相应的耐药菌，其耐药水平越来越高，甚至出现了多重耐药菌株。传统的基于最小抑菌浓度（MIC）的治疗策略是通过抗菌药物杀死或抑制敏感细菌而控制感染，再通过宿主防御系统清除耐药变异菌。

3种中药注射液突变选择窗的测定

目的探讨双黄连粉针、喜炎平注射剂、大蒜素注射剂3种中药制剂对金黄色葡萄球菌ATCC29213的抑菌作用,以期指导临床合理用药。方法在体外研究用琼脂平板二倍稀释法测定双黄连粉针、喜炎平注射剂、大蒜素注射剂3种中药制剂对标准金黄色葡萄球菌的突变选择窗(MSW)并计算其选择指数(SI)。结果双黄连粉针的MSW为1.905～14.737mg/mL,SI为7.736;喜炎平注射液的MSW未测得;大蒜素注射液的MSW为5.960～38.500μg/mL,SI为6.460。结论 3种中药注射剂对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,其对金黄色葡萄球菌的抑制作用强弱为大蒜素注射液大于双黄连注射液大于喜炎平注射液。

万古霉素单用及联合利福平或磷霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的研究

目的在体外探讨万古霉素单用及其分别与利福平、磷霉素联合使用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)防耐药突变浓度的影响,为防止细菌耐药的产生提供理论依据。方法应用肉汤法富集浓度为1010 CFU.ml-1细菌,琼脂平板倍比稀释法测定上述抗菌药物单用及联合使用对10株MRSA临床分离株的防耐药突变浓度,并计算相应的选择指数和耐药频率。结果万古霉素单用对上述10株MRSA的选择指数为16～64;分别与利福平、磷霉素联合使用选择指数下降为2～16和1～8,联合用药较单独用药选择指数下降2～32倍,其耐药频率也大幅下降。结论万古霉素分别与利福平、磷霉素联合使用均可降低其单用对MRSA的防耐药突变浓度,缩小耐药突变选择窗,防止耐药突变菌的产生。

亚胺培南或美罗培南联合利福平降低不动杆菌防耐药突变浓度的体外研究

目的在体外探讨亚胺培南(IMP)和美罗培南(MER)单用及其分别与利福平(RFP)联用对不动杆菌的防耐药突变浓度(MPC)的影响,为防止细菌耐药的产生提供理论依据。方法采用琼脂二倍稀释法,测定IMP或MER与RFP在体外单独以及联合应用的最低抑菌浓度(MIC)、计算部分抑菌浓度(FIC)指数。用肉汤法富集浓度为1010CFU/ml不动杆菌,采用琼脂平板二倍稀释法测定IMP和MER单药以及分别与RFP联用时对16株临床分离不动杆菌的MPC,并计算相应的选择指数(SI)。结果 IMP或MER分别与RFP联合应用后均以无关作用为主,未见拮抗作用,存在一定比例协同作用。IMP和MER单用对上述16株不动杆菌的SI均为16～128;分别与RFP联合使用SI均下降为1～32,联合用药较单独用药SI下降2～32倍。结论 IMP或MER分别与RFP联合使用均可降低其单用对不动杆菌的MPC,缩小MSW,防止耐药突变菌的产生。

万古霉素联合用药降低对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的研究

目的体外研究万古霉素(vancomycin,VAN)分别与左氧氟沙星(levofloxacin,LVX)、利福平(rifampincin,RFP)、磷霉素(fosfomycin,FOM)联用对降低对金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度(MPC)的比较,为指导临床联合应用抗菌药物,制定新的用药策略,防止细菌耐药产生提供理论依据。方法采用肉汤富集1010CFU/mL金黄色葡萄球菌ATCC29213,采用琼脂平板二倍稀释法测定单独用药的最低抑菌浓度(MIC),琼脂平板稀释法测定单独应用VAN以及与其他三种药物联用对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC。并计算出各药单独应用的MSW(MPC/MIC)。结果 VAN、LVX、RFP、FOM单药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC分别为1,0.125,0.008和2μg/mL;MPC分别为64,2,>32,64μg/mL,MSW为64,6,>4000,32。联合用药后各药的MPC(μg/mL)降低程度如下:VAN+LVX(MPCNVA–4,MPCLVX–0.125),VAN+RFP(MPCNVA–4,MPCRFP–0.008),VAN+FOM(MPCNVA-1,MPCFOM-2)。联合LVX和RFP可使VAN的MPC降至原来的1/16倍,联合FOM可使VAN的MPC降至原来的1/64倍。结论 VAN与另三种药物联用,可以明显降低各自单独用药对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MPC,其中联合FOM降低其MPC幅度最大,缩小其MSW效果最好。

氟喹诺酮类药物对粪肠球菌的防耐药突变浓度研究

目的通过测定4种氟喹诺酮类药物(FQ)对粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药突变浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其抗菌活性及防耐药突变的能力。方法采用4种FQs(环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星)筛选粪肠球菌ATCC29212同源的第一步耐药突变体,用加替沙星筛选第二步耐药突变体;采用琼脂二倍稀释法测定粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC,并计算MIC90、MPCpr90、选择指数SI(MPCpr90/MIC90及MPC/MIC)。结果加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对粪肠球菌ATCC29212的MPC分别为1.2、1.2、5.6和6.4μg/m L,选择指数分别为3.4、6、8和8;对30株环丙沙星敏感的粪肠球菌临床分离株的MPCpr90分别为2、1、4和4μg/m L,选择指数分别为4、4、8和8;而加替沙星和莫西沙星对15株环丙沙星中介耐药株的MPCpr90分别为32和16μg/m L,选择指数均达到了32。4种FQs药物对ATCC29212第一步耐药突变体的MIC及MPC值均较其源菌株升高;加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变体的MPC已高达32μg/m L;加替沙星、莫西沙星和左氧氟沙星对第一步耐药突变体的MSW较源菌株增宽。结论对于粪肠球菌临床分离株、ATCC29212及其同源的耐药突变体,加替沙星和莫西沙星的抗菌活性均高于左氧氟沙星和环丙沙星,且加替沙星和莫西沙星限制粪肠球菌耐药突变体被选择出来的能力强于左氧氟沙星和环丙沙星,结合药动学参数,加替沙星和莫西沙星能限制下一步耐药突变株的产生,而环丙沙星和左氧氟沙星则很容易筛选出下一步耐药突变株。但对于第二步耐药突变株,加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。因此,临床上为延长加替沙星和莫西沙星的使用寿命,对于环丙沙星非敏感的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。