苦参碱对结肠癌耐药细胞化疗药物敏感性及自噬水平的影响

目的探讨苦参碱对结肠癌耐药细胞化疗药物敏感性及自噬水平的影响。方法分别采用浓度为0.5mg/ml、1 mg/ml、2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml苦参碱作用于结肠癌细胞HCT-8/VCR,分别在24 h、48 h,采用CCK-8法检测苦参碱对结肠癌细胞HCT-8及其耐药细胞HCT-8/VCR的抑制作用,并计算出抑制率;运用Western Blotting检测自噬相关基因P62、Beclin-1、LC3蛋白表达。采用流式细胞术检测苦参碱作用耐药细胞后的细胞凋亡率。结果在苦参碱作用24 h和48 h后,HCT-8细胞增殖的抑制作用随着苦参碱浓度的增加而增强,苦参碱对HCT-8细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.001)。对各组细胞的凋亡率检测发现,采用苦参碱的实验组的细胞凋亡率大大高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。在苦参碱应用24 h后,HCT-8/VCR细胞质中出现了自噬泡。Western Blotting检测显示随着苦参碱浓度的增加,P62、Beclin-1、LC3蛋白的表达水平也随之增强。结论苦参碱能够提高结肠癌耐药细胞的自噬水平,逆转结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的多药耐药性,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。

人参皂甙对白血病耐药细胞化疗药物敏感性的研究

目的 :通过观察人参皂甙 ( GS)协同化疗药物对 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr白血病耐药细胞株的抑制作用 ,探讨 GS是否能提高肿瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性。方法 :选用 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr两耐药细胞株作为靶细胞 ,液体培养和半固体集落培养法观察不同浓度的 GS对耐药细胞增殖的影响 ,及 GS协同化疗药物对 K5 62 /VCR、K5 62 /Adr耐药细胞集落生成的抑制作用。结果 :1单用 GS作液体培养 MTT分析法和集落培养法均显示低、中等浓度的 GS5～ 5 0 μg/ml对细胞增殖无明显影响 ,但当浓度升高至 75 μg/ml时 ,则抑制细胞增殖和集落形成 ( P<0 .0 1 )。2当 GS与化疗药物联合应用时 ,即使化疗药物浓度 ( 1 μg/ml)不变 ,K5 62 /VCR、K5 62 /Adr耐药细胞对化疗药物的敏感性与 GS呈剂量依赖关系。即 GS浓度达到 5 0μg/ml时 ,化疗药物对细胞的抑制作用明显 ( P<0 .0 1 ) ,且随着 GS浓度的升高 ,抑制作用逐渐增强。结论 :GS通过提高耐药细胞对化疗药物的敏感性而与化疗药物起协同作用 ,同时在一定浓度下 。

循环肿瘤细胞中YAP基因拷贝数变异实时监测骨肉瘤化疗敏感性的研究展望

骨肉瘤5年生存率徘徊在70%左右[1],且近30年无显著提高。目前临床上骨肉瘤患者化疗敏感性的判断多基于化疗后疾病进展时间的回顾性分析,很难在化疗前对患者化疗的有效性做出评价。但骨肉瘤补救性化疗不能改善其生存率。由于耐药细胞群逐渐扩增或新的突变使肿瘤产生获得性耐药,使得治疗过程中肿瘤对化疗药的敏感性发生动态变化。基因水平上不同个体间存在不同的耐药机制,在不同时间点,发生耐药的基因突变也不同。

化疗药物耐药怎么办?——抑制肿瘤细胞自噬可增强吉西他滨的化疗敏感性

吉西他滨是临床上最常用的治疗膀胱癌的化疗药物。它是一种抑制肿瘤细胞DNA合成的脱氧胞嘧啶核苷类似物，其抗瘤谱广，毒性反应小，已被广泛应用于非肌层浸润膀胱癌的灌注化疗和肌层浸润性膀胱癌的静脉全身化疗。

卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及耐药相关基因和凋亡抑制基因表达关系的初步探讨

目的分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系IL-6、IL-8分泌与其化疗敏感性及部分耐药相关基因和凋亡抑制基因表达的关系,为今后研究IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药的机制奠定基础。方法IL-6、IL-8及其受体的表达采用RT-PCR、ELISA及免疫印迹技术进行检测,卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性采用MTT试验进行分析,耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达则采用RT-PCR进行测定。结果1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致。2)4种卵巢癌细胞均表达IL-6受体和IL-8受体。3)4种卵巢癌细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,ES-2细胞次之,CAOV-3和SKOV-3细胞则有不同程度的耐药性。4)部分耐药相关基因和凋亡抑制基因在A2780和ES-2细胞中的表达水平均较低,而在CAOV-3和SKOV-3细胞中的表达水平均较高。结论卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平(尤其是IL-6的水平)与其对顺铂和紫杉醇的敏感性基本呈负相关趋势,与其部分耐药相关基因和凋亡抑制基因的表达水平相一致。

细胞膜渗透性对氟喹诺酮耐药表皮葡萄球菌药物敏感性的影响

目的 研究表皮葡萄球菌细胞膜渗透性下降对氟喹诺酮 (FQNs)类药物敏感性的影响。方法 比较合用杆菌肽 (BAC)、EDTA前后 ,敏感菌及耐药菌分别对环丙沙星 (CPLX)、司帕沙星 (SPLX)药物敏感性的变化 ;测定敏感菌、耐药菌细胞内的药物浓度及乙二胺四乙酸 (EDTA)对药物浓度的影响。结果 杆菌肽与 2种FQNs合用对 8株突变耐药菌的部分浓度抑菌指数分别为 0 .5 9和 0 .72 ,表现出协同或相加的抗菌作用。合用EDTA对敏感菌株的MIC影响不大 ,但可显著增加耐药菌对FQNs的敏感性 ,合用 2 .0mmol·L-1EDTA后CPLX和SPLX对耐药菌的MIC均下降了 90 %以上。敏感菌细胞内的FQNs药物浓度明显高于耐药菌 ,合用 2mmol·L-1EDTA可使耐药菌细胞内的CPLX浓度从 40ng·10 -9(cells)增加到 30 0ng·10 -9(cells) ,SPLX的浓度从 12 0ng·10 -9(cells)增加到 30 0ng·10 -9(cells) ,而敏感菌细胞内的药物浓度上升不超过 2 0 %。结论 FQNs耐药的表皮葡萄球菌细胞膜的渗透性显著下降 ,导致进入细胞内的药物减少而引起细菌耐药。合用BAC ,EDTA等可提高细胞膜渗透性的药物或试剂后 。

mdr1基因转染小鼠骨髓细胞在化疗中药物耐受量的研究

肿瘤细胞对抗癌药物多药耐药性的产生及化疗中出现的骨髓抑制是目前临床治疗恶性肿瘤面临的主要问题。多药耐药基因(mdr1)编码产生的相对分子量为170 kD的跨膜蛋白(P-gp),可将多种化疗药物排出细胞外,从而避免药物对细胞的损害。正常骨髓造血于祖细胞mdr1基因表达水平极低,故化疗中易产生骨髓抑制。本研究旨在探讨将已转染mdr1基因的小鼠骨髓细胞回输入同种小鼠体内后,受体鼠对化疗药物骨髓毒性的耐受性有无增强,从基因水平寻找一种解决化疗中骨髓抑制的措施。

化疗药物体外干预乳腺癌MCF-7细胞株的耐药基因表达

目的体外评价蒽环类及紫杉类化疗药物与乳腺癌耐药相关基因MDR1(多药耐药基因)和BCRP(乳腺癌相关耐药基因)表达的关系。方法利用RT-PCR技术和荧光定量PCR技术检测体外化疗药物干预后乳腺癌细胞株MCF-7的耐药相关基因表达情况。结果蒽环类药物与MDR1基因表达量间有密切关系,随蒽环类药物浓度的增加和作用时间的延长,MDR1基因表达量也随之增加。而蒽环类药物与BCRP基因间及紫杉类药物与MDR1、BCRP间都无明显的量效关系。结论蒽环类药物是MDR1基因编码的p-gp蛋白的特异性底物之一。临床可能通过检测MDR1的表达量较准确的预测蒽环类药物的疗效,并为个体化的选择敏感性药物提供一定的实验依据。

p53基因转染对卵巢癌MDR细胞药物敏感性及恶性表型的影响

研究 ｐ５３基因导入已知内源背景的肿瘤 ＭＤＲ细胞所致的恶性表型和ＭＤＲ表型的改变及两者的关系。方法：用磷酸钙沉淀法将含有野生型及全长反义 ｐ５３ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＤＷｐ５３及 ｐＤＡｐ５３转染病毒包装细胞 ＰＡ３１７，测定病毒滴度。用此病毒感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ鉴定，检测转导基因后细胞株的恶性度、多药耐药性等情况。结果：野生型及反义全长ｐ５３ｃＤＮＡ均转入 ＰＡ３１７细胞获得效价为（１－ １．５） Ｘ１０５ＣＦＵ／ｍｌ的前病毒，以此感染卵巢癌多药耐药细胞株Ａ２７８０／ＡＤＭ，Ｓｏｕｔｈｅｍ Ｂｌｏｔ证实ｐ５３基因导入该细胞并整合到基因组ＤＮＡ中，进一步测试观察到：①导入野生型ｐ５３基因的Ａ２７８０／ＡＤＭ细胞生长被抑制、恶性度降低，细胞形态和生长曲线改变，软琼脂集落形成率及裸鼠接种成瘤率降低；②细胞多药耐药性减弱，对ＡＤＭ耐药性下降，Ｐ－ｇｐ表达降低；③反义ｐ５３的导入也对Ａ２７８０／ＡＤＭ恶性度有一定的影响；④野生型ｐ５３导致的ＭＤＲ细胞恶性表型与ＭＤＲ水平的降低似有平行关系。结论：ｐ５３基因对肿瘤细胞ｍｄｒ－ １基因的表达可能起调控作用，ｐ５３发生突变的 Ｍ?

化疗药物敏感和耐药试验在卵巢癌中的研究现状

化疗药物敏感和耐药试验是近几十年发展起来的一种新技术,主要包括四甲基偶氮唑盐比色法、三磷酸腺苷-肿瘤药物敏感试验、ChemoFx、极端耐药试验等十几种方法,这些方法各有所长;尽管通过多年的研究,国内外学者在CSRA试验结果与卵巢上皮癌临床治疗结果的一致性方面、CSRA指导治疗与经验治疗的疗效对比方面,仍存在一定争议,需要前瞻性大样本随机对照研究确定CSRA在临床应用方面的价值。

抑癌基因p53对非小细胞肺癌化疗药物敏感性的影响

p53基因与肺癌密切相关,可作为诊断肺癌及判断预后的参考指标。研究显示p53基因变异的肺癌预后较差,而且对化疗的敏感性也较低。p53基因异常会降低铂类、吉西他滨、依托泊苷、长春碱类以及环磷酰胺和异环磷酰胺等抗肿瘤药物的敏感性,野生型p53(Wt p53)基因的重建和修复可能作为基因治疗成为与这些类药物联合治疗肺癌的有效治疗手段;对紫杉碱类药物的敏感性没有负面影响。对p53等基因药物学的研究,并有助于肺癌个体化治疗的实施,提高肺癌治疗的有效率。

导入以腺病毒为载体多药耐药基因的脐血有核细胞对化疗药物的耐受性

通过腺病毒载体介导使多药耐药基因转染入脐血有核细胞,提高其对化疗药物的耐受性.结果表明,与未转染的脐血有核细胞相比,转染MDR1基因的脐血有核细胞对化疗药物有明显的抵抗性(P<0.01).通过腺病毒介导的MDR1基因转染脐血有核细胞能有效的抵抗化疗药物对其损伤,从而有望对临床肿瘤的大剂量化疗提供一种有效防护细胞损伤的方法,提高化疗效果.

卵巢癌干细胞对5种化疗药物的耐药性及其机制

目的探讨卵巢癌干细胞(Ovarian Cancer Stem cells,OCSCs)针对化疗药物耐药的作用机制。方法通过免疫磁选方法分离和纯化OCSCs,对比普通卵巢癌细胞(EOC),观察在紫杉醇、卡铂、顺铂、5-FU、阿霉素5种化疗药物作用下OCSCs耐药的情况。通过定量PCR,分析EOC与OCSCs中ABCG2、ABCB1、Nanog、MMP-2和MMP-9基因的表达水平。结果从HO8910细胞分离的CD44+CD117+细胞,对卡铂、顺铂、紫杉醇、阿霉素和5-FU等化疗药物的耐药性明显强于HO8910细胞(P<0.05)。定量PCR检测发现CD44+CD117+细胞中ABCG2、ABCB1、Nanog、MMP-2和MMP-9基因的表达显著高于HO8910细胞(P<0.05)。结论与EOC相比,OCSCs对多种化疗药物的耐药性更为明显的机制可能与其较高水平表达ABCG2,ABCB1,Nanog,MMP-2和MMP-9基因有关。

二线TP、IP化疗方案用于耐药型小细胞肺癌患者治疗中的临床效果

目的：对二线TP、IP化疗方案用于耐药型小细胞肺癌患者治疗中的临床效果进行评定。方法：随机选择某院2012年6月~2015年6月接收的26例耐药型小细胞肺癌患者（治疗组）,接受IP化疗方案治疗;同期选取26例耐药型小细胞肺癌患者（对照组）,接受TP方案治疗,观察两组疗效。结果：对所有入选患者进行系统性评估后,发现治疗组入选患者疾病控制率30.77%,对照组11.54%（P〉0.05）。结论：二线TP、IP化疗方案用于耐药型小细胞肺癌患者均可取得显著疗效,可进一步提升患者预后水平。

塞来昔布促进T细胞淋巴瘤对化疗药物的敏感性

目的:研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞化疗敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度塞来昔布分别作用24、48和72 h,对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性的影响;MTT法检测化疗药物[顺铂(cisplatinum,DDP)、表柔比星(epirubicin,EPI)及长春新碱(vincristine,VCR)]联合塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞增殖活性的影响;并计算IC50值;流式细胞术检测塞来昔布联合化疗药对Jurkat和Hut78细胞凋亡水平的影响;Real-time PCR及Western blotting技术分别从mRNA及蛋白水平检测塞来昔布对Jurkat和Hut78细胞表达MDR1、MRP1、LRP及TopoⅡ的影响。结果:塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78增殖活性具有一定抑制作用,且可明显增强化疗药物对Jurkat和Hut78细胞的杀伤作用;在塞来昔布作用下Jurkat和Hut78细胞的凋亡水平明显增加(P<0.01);与塞来昔布共培养的Jurkat和Hut78细胞,TopoⅡmRNA和蛋白的表达水平均明显增加,而MDR1、MRP1、LRP mRNA及蛋白的表达水平均明显下降(P<0.05)。结论:塞来昔布可通过调控耐药相关基因的表达而增强T淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性,因此在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有良好应用前景。

导入MDR1的脐血有核细胞对化疗药物耐受性的体外研究

目的探讨一种抵抗大剂量化疗药物的方法。方法通过腺病毒载体介导使多药耐药(MultidrupResistance,MDR1)基因转染入脐血有核细胞(CordBloodNucleateCells,CBNC),提高其对化疗药物的耐受性。结果转染MDR1基因的CBNC对化疗药物有明显的抵抗性(P<0.01,与未转染的CBNC相比)。结论通过腺病毒介导的MDR1基因转染CBNC能有效的抵抗化疗药物对其的损伤,从而有望对临床肿瘤的大剂量化疗提供一种有效的防护细胞损伤的方法,提高化疗效果。

BMP4增强结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的作用及机制

目的研究骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)对结直肠癌耐药细胞化疗敏感性的影响及机制。方法采用5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理结直肠癌细胞株LoVo,建立耐药细胞株LoVo/5-Fu;通过CCK-8法检测LoVo/5-Fu细胞和亲本细胞对5-Fu、奥沙利铂或伊立替康的敏感性,并检测不同浓度BMP4对LoVo/5-Fu细胞生长的抑制效应;用5-Fu联合BMP4处理LoVo/5-Fu细胞3d,采用Annexin-Ⅴ/PI法检测5-Fu联合BMP4处理后LoVo/5-Fu细胞的凋亡情况;通过裸鼠体内成瘤实验观察BMP4在体内对LoVo/5-Fu细胞化疗敏感性的影响;采用Western blot检测BMP4处理后LoVo/5-Fu细胞中AKT信号通路活性和Bcl-2的蛋白水平。结果 5-Fu诱导形成的耐药细胞株LoVo/5-Fu可以在含5μg/mL 5-Fu的培养液中稳定生长,并对奥沙利铂和伊立替康有交叉耐药;BMP4可以抑制LoVo/5-Fu细胞的生长,抑制效应呈时间和浓度依赖性;细胞凋亡实验显示BMP4可以促进培养在含5μg/mL 5-Fu培养液中的LoVo/5-Fu细胞发生凋亡;裸鼠体内成瘤实验显示BMP4可以有效增强LoVo/5-Fu细胞在体内的对5-Fu的敏感性,抑制其在裸鼠体内的生长;Western blot检测发现BMP4可以抑制LoVo/5-Fu细胞中AKT的磷酸化,并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 BMP4可以增强结直肠癌耐药细胞对化疗的敏感性;其机制有可能是通过抑制细胞中AKT通路的活性和Bcl-2表达,降低细胞抵抗凋亡的能力。

化疗药物诱导肿瘤细胞耐药研究进展

近年化疗药物在肿瘤治疗中取得了较好的疗效,但耐药性仍然是多种癌症治疗的重要障碍,常导致治疗失败甚至复发。其中,化疗药物自身诱导耐药成为新的研究热点,部分化疗药物在治疗疾病的同时,通过诱导肿瘤细胞或周围基质细胞释放可溶性分子,上调抗凋亡蛋白表达等保护肿瘤细胞,改变肿瘤微环境,使肿瘤细胞避免被化疗药物杀伤,引发耐药。本文就化疗药物诱导肿瘤细胞耐药的研究进展进行综述,主要包括化疗药物诱导可溶性细胞因子和高表达抗凋亡分子介导化疗耐药。

非小细胞肺癌奥希替尼获得性耐药细胞株的建立及耐药后化疗敏感性

目的建立人非小细胞肺癌(NSCLC)奥希替尼获得性耐药细胞株PC-9/ZDOR,探讨其耐药机制及耐药后化疗敏感性。方法体外采用逐步递增奥希替尼剂量诱导已对吉非替尼产生获得性耐药的NSCLC细胞株PC-9/ZD建立奥希替尼耐药细胞株PC-9/ZDOR;二代测序(NGS)检测EGFR基因突变;CCK-8法检测细胞生长,通过耐药指数(RI)确定化疗药物敏感性;Western blot法检测EGFR及其信号蛋白表达。结果 (1)CCK-8法测得PC-9/ZDOR的RI为44,显示PC-9/ZDOR为奥希替尼耐药细胞。(2)NGS显示:PC-9/ZDOR的EGFR19及20外显子T790M突变消失,也无EGFR扩增。(3)Western blot显示:与PC-9/ZD细胞相比,PC-9/ZDOR细胞株EGFR及其磷酸化蛋白表达显著减少(P <0.05),p-ERK和p-AKT表达水平下降(P <0.05)。(4)PC-9/ZDOR细胞株对化疗药物多西他赛、吉西他滨、紫杉醇敏感性较PC-9/ZD细胞增加(P <0.05),而对培美曲塞、顺铂敏感性较PC-9/ZD细胞无明显差别(P> 0.05)。结论 PC-9/ZDOR为吉非替尼耐药后奥希替尼获得性耐药NSCLC细胞,EGFR基因突变消失和(或)EGFR及其磷酸化蛋白表达显著减少、EGFR信号传导蛋白减少可能是耐药机制之一,耐药后细胞株对紫杉类、吉西他滨化疗药物敏感性增加。