VNTR技术用于安徽省耐药结核分支杆菌基因分型的初步研究

目的探讨VNTR(variable number of tandem repeat)技术在安徽省耐药结核分支杆菌基因分型中的应用。方法初步选取13个分型效果较好的VNTR基因位点。应用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,建立检测耐药结核分支杆菌DNA指纹多态性的方法,分析耐药结核分支杆菌DNA多态性。结果共对78株耐药结核分支杆菌的13个VNTR位点进行了检测,根据这些菌株的指纹多态性特征,共分为4个基因型(Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型),分别为Ⅰ型3.8%(378)、Ⅱ型6.4%(578)、Ⅲ型10.3%(878)、Ⅳ型所占比例最大,为79.5%(6278)。在Ⅳ型菌中,耐药菌株主要为耐多药(结核分支杆菌至少耐异烟肼和利福平两种药)和单耐利福平菌株,其所占比例分别为45.8%和22.6%。结论本资料分析表明,安徽省耐药结核分支杆菌的传播似以Ⅳ型菌株为主,应加强此型菌株流行的监控。

结核分支杆菌耐药分子机制的检测技术的研究

目的 :探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制 ,建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法 :采用聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KatG基因、rpoB基因突变。结果 :78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照 ,3 6株药物敏感株的KatG、rpoB基因SSCP图谱均正常。 42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中 ,KatG和rpoB基因突变率分别为 66.7% (2 8/4 2 ) ,90 .5 % (3 8/4 2 )。结论 :结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR -SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼。

耐多药结核分支杆菌突变基因检测

目的研究耐多药结核分支杆菌耐药分子机制 ,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过 16SrRNA聚合酶链反应 单链构象多态性 (polymerasechainreaction singlestrandconformationpolymorphism ,PCR SSCP)方法对 30株耐多药分离株和 2 0株药物敏感株进行初步分子菌种鉴定 ;通过PCR SSCP分析 30株耐多药结核病临床分离株的rpoB、katG、rpsL基因。 结果经 16SrRNAPCR SSCP菌种鉴定 ,所分析菌株均为结核分支杆菌 ;30株耐多药分离株经SSCP分析 ,5 6 .7%存在rpoB基因突变 ,43 .3 %有katG基因突变 ,91.3 %有rpsL基因突变。 结论rpoB、rpsL、katG基因突变分别是结核分支杆菌耐利福平、链霉素、异烟肼的分子机制 ,耐多药结核病是药物靶基因突变所致。通过PCR SSCP可简便。

7种中药抗耐多药结核分支杆菌的实验研究

目的:耐药结核病再度成为医学界的难题。探索中药治疗耐多药结核病,寻找有效的抗耐多药结核菌的中药。方法:选择连翘、射干、黄芩、地骨皮、百部、夏枯草、鱼腥草7种中药,采用绝对浓度法进行实验室抗菌活性实验。结果:7种中药抗菌活性分别为连翘1:6、射干1:4、黄芩>1:10、夏枯草1:4、地骨皮1:2、百部1:1、鱼腥草无作用。结论:7种中药抗耐多药结核分支杆菌的效果,从强到弱依次为黄芩、连翘、射干、夏枯草、地骨皮、百部、鱼腥草无作用。

喹诺酮类药物治疗耐多药性结核病

运用喹诺酮类药物环丙沙星、氯氟沙星、左氧氟沙星、斯帕沙星治疗耐多药性结核病 ,疗效显著。

月华胶囊对耐多药结核分支杆菌感染自噬的影响

目的:以月华胶囊含药血清对耐多药结核分支杆菌感染小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)进行干预,探讨其对耐多药结核分支杆菌感染巨噬细胞自噬的作用及其机制。方法:低温冷冻干燥法制备月华胶囊,大鼠按3.02 g·kg^-1灌胃给药7 d,制备月华胶囊含药血清。体外培养RAW264.7,耐多药结核分子杆菌。以细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)检测含药血清对RAW264.7的增殖能力并选定其有效浓度。细胞分为模型组(10%胎牛血清);月华胶囊含药血清组(10%月华胶囊);自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华胶囊含药血清组(5 mg·L^-1的3-MA+10%月华胶囊含药血清);雷帕霉素(Rap)组(200 mg·L^-1的Rap+10%胎牛血清);正常组(10%胎牛血清)。除正常组外,各组细胞培养24 h后,按细胞-细菌1∶10感染4 h。透射电镜观察细胞自噬体的出现和形成;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中I型微管相关蛋白轻链3(LC-3Ⅰ),Ⅱ型微管相关蛋白轻链3/I型微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ),Beclin-1蛋白的表达;间接免疫荧光染色法观察细胞中LC3B荧光颗粒、斑点及亮度;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞中LC3,Beclin-1 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量均无显著变化,细胞无荧光颗粒、斑点,无荧光亮度。与模型组比较,月华胶囊含药血清组及Rap组细胞,均可观察到自噬体的形成,细胞LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均明显升高(P<0.05),月华胶囊含药血清组细胞荧光颗粒和荧光斑点明显增多,Rap组细胞荧光颗粒和荧光斑点增多非常明显,荧光闪亮,可判定细胞荧光呈现为阳性;自噬抑制剂3-MA+月华胶囊含药血清组细胞未见自噬体,细胞中LC-3Ⅱ,LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ,Beclin-1蛋白及LC3,Beclin-1 mRNA的相对表达量值均无明显升高。结论:月华胶囊含药血清能使耐多药结核分支杆菌感染细胞产生自噬而发挥抗结核的免疫效应,其机制是通过调控自噬相关蛋白LC3,Beclin-1蛋白及其mRNA的表达水平,促使LC3-I趋向LC3-Ⅱ的转化加快而实现的。

百合固金汤加减治疗肺结核合并肝病的疗效观察

由于耐药结核分支杆菌菌株的出现，导致耐药肺结核发病率的增加，而耐药肺结核是目前防治结核病的难点。肺结核如合并肝脏疾病，或对化疗药物极度敏感易引起肝功能严重损害的患者来说，治疗上则是令人头痛的问题。我院从2000年开始采用中医百合固金汤加减治疗肺结核合并肝病患者26例，取得较满意的效果，现报告如下。

利奈唑胺可有效治疗慢性广泛耐药结核病

利奈唑胺表现出体外抗耐多药和广泛耐药结核分支杆菌的作用。近期一项前瞻性、随机对照研究发现，利奈唑胺可有效治疗慢性难治性广泛耐药结核（NEnglJMed，2012，367：1508—1518）。