大黄酸/大黄素抗多药耐药肿瘤细胞研究

肿瘤细胞多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因之一，也是白血病、肿瘤缓解后复发的重要根源。如何加强对耐药肿瘤细胞的杀灭是目前肿瘤研究领域的重要课题。大黄酸、大黄素与阿霉素、柔红霉素等抗癌药均属于蒽醌类化合物。我们以对阿霉素、柔红霉素已经产生抗药性的三株...

用于耐药肿瘤细胞代谢组学的细胞内核苷类组分离子对色谱分析法

目的:建立测定 K562及 K562/A 细胞内核苷类代谢物含量的高效液相色谱法,用于两者代谢组学研究。方法:采用1.2mol·L^(-1)HClO\-4沉淀蛋白,用苯硼酸柱进行固相萃取富集样品中的核苷酸。色谱柱为汉邦 C_(18)(4.6mm×250mm,5μm),流动相由两种缓冲液组成,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^(-1)。A 相缓冲液含10 mmol·L^(-1)四丁基氢氧化铵,10 mmol·L^(-1)KH_2PO_4及0.25%甲醇,pH7.0;B相缓冲液含5.6 mmol·L^(-1)四丁基氢氧化铵,50 mmol·L^(-1)KH_2PO_4及30%甲醇,pH7.0。柱温25℃,检测波长260nm。结果:各种核苷类代谢物分离良好,内源性物质无干扰,K562及 K562/A 细胞内核苷类代谢物平均回收率分别为88.3%～109.2%、84.5%～115.6%。结论:该法简便及重现性好,可同时测定肿瘤细胞中核苷、单核苷酸、二核苷酸及三核苷酸含量。分析结果表明,K562与 K562/A 细胞核苷类代谢物组存在明显差异。

PP放疗增敏放化疗同步与放化疗序贯治疗复发耐药肿瘤疗效对比研究

目的探索复发耐药肿瘤的治疗方法。方法小剂量紫杉醇（Paclitaxel PTX,P）60~90 mg＋顺铂（Cisplatin DDP,P）40 mg每周给药1次（即d1、8、15、22、29给药）,为放疗增敏,每周连续放射治疗5 d休2 d,连续4~5周完成同步放化疗。此22例作为同步组;另将复发耐药肿瘤患者未接受放化疗同步的给予放化疗序贯治疗者28例,作为对照组（序贯组）。分别对比两组的近期疗效和远期疗效。近期疗效包括有效率（RR）、稳定（SD）间期、临床受益率（CBR）,不良反应等;远期疗效包括生活质量（QOL）和生存期（OS）。用统计学方法处理各数字,对比优化出较好的治疗方法。结果同步组较序贯组明显提高有效率,延长SD（P〈0.05）。不良反应不增加,甚至减轻。生活质量、生存率和生存期两组无统计学差异（P〉0.05）。结论 PP放化疗同步组较放化疗序贯组治疗复发进展期肿瘤疗效更优,不良反应较轻,且易于实践操作。

浙贝母抑制耐药肿瘤P糖蛋白的活性组分研究

目的:阐明浙贝母抑制耐药肿瘤细胞P-糖蛋白(P-gp)的活性组分。方法:利用回流提取法通过树脂纯化技术,制备浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖。建立Hep G2/mdr细胞株。利用Calcein-AM试剂盒Hep G2/mdr细胞摄取实验对浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖进行P-gp潜在抑制剂的筛选。结果:制备的浙贝母总生物碱、总核苷、总多糖含量为51.45%、47.84%、23.78%。Hep G2/mdr细胞株P-gp的相对蛋白表达为(26.22±1.09),极显著高于亲本Hep G2细胞株(8.91±2.00)(P<0.01)。阳性对照组Calcein荧光比率为(173.96±12.87)%,极显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.01)。浙贝母总生物碱、总核苷低剂量组Calcein荧光比率为(134.96±11.91)%、(126.89±10.42)%,显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.05)。浙贝母总生物碱、总核苷高剂量组Calcein荧光比率为(209.72±9.44)%、(162.42±7.83)%,极显著高于空白组(100.00±11.49)%(P<0.01)。浙贝母总多糖低、高剂量组与空白组无显著差异。结论:Hep G2/mdr细胞株表现出耐药性,阳性抑制剂抑制P-gp的外排活性;浙贝母总生物碱、总核苷抑制P-gp的外排活性,呈现浓度依赖性。

铜代谢异常可影响肺耐药肿瘤细胞对顺铂化疗的反应

从细胞水平上研究了人肺腺癌A549细胞获得DDP药物抗性后,调节铜代谢状态对DDP反应的影响.采用DDP抗性为5.25倍的肺腺癌A549/DDP细胞株,观察添加铜和加入铜络合剂TEPA去除铜后A549/DDP对DDP的反应性,结果显示铜代谢变化可影响DDP的作用规律.铜与低浓度的DDP具有协同作用,铜和处于有效抑制浓度的DDP联合具有拮抗作用.用TEPA去除铜后,可显著降低DDP的细胞毒作用(P＜0.01).进一步分析表明,铜代谢异常影响A549/DDP对DDP的反应与细胞周期改变和细胞凋亡有关.

PP放疗增敏放化疗同步与放化疗序贯治疗复发耐药肿瘤疗效的比较分析

目的探究不同方法治疗复发耐药肿瘤的临床疗效,分析不同方法的优点。方法选择在本院初次治疗或者转诊到本院的80例耐药肿瘤复发病例,按患者自愿将其分成对照组41例患者和试验组39例患者,试验组患者采用PP放疗增敏放化疗同步进行治疗,对照组选用放化疗序贯治疗对复发肿瘤进行治疗。近期治疗效果监测指标包括:RR(有效率),稳定间期,不良反应等;及远期疗效。结果试验组与对照组相比有效率明显提高,延长稳定期间(P<0.05)。不良反应不变或减轻。远期疗效两组没有差异(P>0.05)。结论 PP放疗增敏放化疗同步法治疗复发进展期肿瘤临床总体疗效优于放化疗序贯组治疗,不良反应相对较轻,而且实践操作难度低。

介孔碳纳米粒的构建及化疗-光疗联合抗多药耐药肿瘤研究

目的:构建负载化疗药物并具有光热和光动力联合治疗效果的介孔碳纳米粒(MCNs),研究其体外抗多药耐药肿瘤的作用。方法:利用低浓度水热法制备MCNs,通过混酸超声法将MCNs表面羧基化制成MCNs-COOH(MCNC),对其形貌、表面性质等进行表征。利用吸附法构建负载阿霉素(ADR)的ADR/MCNC,通过紫外吸光度计算其载药量,利用透析法考察其释放特性。选用耐ADR人乳腺癌MCF-7/ADR细胞通过共聚焦激光显微镜观察ADR/MCNC的细胞摄取和定位,MTT法考察ADR/MCNC的细胞毒性,用流式细胞术测定NIR光照下细胞内活性氧自由基(ROS)水平。结果:所制备的MCNC的粒径约为90 nm,表面含有羧基,BET比表面积为541.62 m^2/g,孔容为0.34 cm^3/g,孔径分布约为2.5 nm,具有显著光热效应。ADR/MCNC的载药量为47.4%,具有pH/NIR响应性释放特性;NIR光照下能促进ADR的细胞摄取和核内蓄积,能诱导MCF-7/ADR细胞产生ROS,并对细胞有显著的抑制作用。结论:成功制得MCNs,此外ADR/MCNC具有抗多药耐药肿瘤的作用。

葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株KBV_(200)的表达及其与肿瘤多药耐药性的关系

目的 观察葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylcerarnide synthase,GCS)基因在人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV_(200)的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系。方法 采用RT-PCR分析KBV_(200)及其亲本KB细胞株GCS基因表达的差异,运用MTT法分析KBV_(200)经糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(DL-PPMP)及钙离子通道阻滞剂异搏定处理前后细胞MDR的变化,应用RT-PCR技术检测KBV_(200)细胞耐药逆转后GCS及mdrl基因的表达。结果 KBV_(200)细胞GCS和mdrl基因的表达明显强于KB细胞,而KB细胞mdrl基因表达为阴性。5～25μmol/L DL-PPMP均可抑制KBV_(200)GCS mRNA表达,25 μmol/L时抑制强度最大;10 μmol/L异搏定即可抑制KBV_(200)GCS mRNA表达,15 μmol/L时抑制作用明显。DL-PPMP和异搏定均可抑制mdrl基因的表达,KBV_(200)经25μmol/L DL-PPMP作用48h后细胞内mdrl表达为阴性。结论 异搏定和DL-PPMP对GCS和marl基因表达的抑制调节呈浓度依赖性,它们可通过抑制GCS和mdrl基因表达,逆转KBV_(200)对长春新碱的耐药。KBV_(200)GCS基因的表达与MDR存在正相关,GCS基因可能在肿瘤的多药耐药过程中起着重要作用。

SWI/SNF染色质重塑复合物在肿瘤耐药中的作用

肿瘤耐药是化疗和靶向药物治疗面临的重要问题,它是一个涉及染色质重塑的复杂过程。SWI/SNF是肿瘤发生中研究最多的ATP依赖性染色质重塑复合物之一,在染色质结构稳定性、基因表达和翻译后修饰的协调过程中起着重要作用,但其调控肿瘤耐药的机制尚未被系统梳理。SWI/SNF按其亚基组成可分为BAF、PBAF和ncBAF 3种,这3种亚型均包含ATP酶催化亚基、核心亚基和调节亚基,可以通过调控染色质结构来控制基因表达。SWI/SNF复合物亚基的改变是调控肿瘤耐药和进展的重要因素之一,充分了解该复合物在肿瘤耐药中的分子机制可以改善癌症的治疗。本文总结了SWI/SNF复合物的组成、引起肿瘤耐药的突变或异常表达亚基类型、主要的耐药机制以及肿瘤耐药的克服方法等,为临床上SWI/SNF亚基突变或异常表达引起的肿瘤预后不良的诊断和治疗提供了思路。

肿瘤抗血管生成治疗耐药机制

血管生成指的是通过内皮细胞的迁移、增殖和分化,从现有血管网络中形成新的血管网络的过程。这一过程对于实体肿瘤的生长和扩散至关重要,尤其是在肿瘤体积超过2 mm^(3)之后,新生的血管网络为肿瘤提供了至关重要的氧气、营养及生长因子。抗血管生成已经成为临床常用靶向治疗肿瘤的方案之一。首个抗血管生成药物贝伐单抗已广泛应用于多种实体肿瘤治疗,但由于获得性耐药现象,疗效仅能维持1~2年。即使血管内皮细胞的基因组相对稳定,不易产生耐药性,但临床实践中仍观察到多种类型的耐药现象,这表明抗血管生成治疗的耐药问题仍然是一个具有挑战性的研究领域。本文主要综述了肿瘤抗血管生成治疗耐药机制的最新进展,并探讨了抗肿瘤血管生成治疗的新前景,以期为临床实践提供有力的理论支持和指导。

RNA甲基化修饰调控DNA损伤修复过程及其在肿瘤耐药中的作用

DNA损伤修复是指纠正DNA两条单链间错配的碱基、清除DNA链上受损的碱基、恢复DNA正常结构的过程。细胞内存在多种机制来应对不同类型的DNA损伤,同源重组修复便是重要的修复机制之一。在同源重组修复过程中,RNA的合成发挥着重要作用,而RNA甲基化修饰作为一个普遍存在于真核细胞中的调控机制,也参与了这一复杂的修复过程。肿瘤发生过程中普遍存在RNA甲基化修饰失调导致的DNA损伤累积,从而引起肿瘤的恶性转化。此外,RNA甲基化修饰还可以影响放化疗后细胞对DNA损伤的修复能力,使肿瘤细胞的放化疗敏感性发生改变,进而影响治疗效果。本文综述了目前已知的不同类型RNA甲基化修饰在DNA损伤修复过程中的作用,并进一步分析RNA甲基化修饰介导的DNA损伤修复异常在肿瘤临床诊断、预后判断和作为治疗靶点等方面的应用前景。

Warburg效应在肿瘤耐药中的研究进展

肿瘤细胞的增殖和生长需要营养物质的支持,并进行能量代谢重编程。其中,线粒体功能改变是多种类型肿瘤发生的标志之一。Warburg效应是指肿瘤细胞通过激活乳酸脱氢酶、抑制丙酮酸代谢而产生大量乳酸,并在线粒体中进行能量代谢重编程的过程。肿瘤耐药是当前肿瘤临床治疗中较为棘手的问题之一。研究发现Warburg效应与抗肿瘤药物的耐药性息息相关。本文阐述Warburg效应在肿瘤耐药中的研究进展,为临床攻克肿瘤耐药提供新思路。

基质刚度重构染色质对肿瘤细胞耐药性的影响

目的研究表明,肿瘤干细胞是肿瘤对临床化疗药物产生耐药性的元凶,但目前对其耐药性形成的力学机制所知甚少。本研究发现,肿瘤干细胞相比普通肿瘤细胞,细胞牵引力更低,染色质更疏松。而染色质构象又与DNA损伤修复效率密切相关。那么力学信号能否通过改变染色质构象调控肿瘤干细胞的耐药性,其机制仍需进一步探索。方法首先通过构建不同刚度的基质研究基质刚度对肿瘤细胞耐药性及DNA损伤修复的影响;通过细胞拉伸仪加力,调控染色质构象,探究其调控肿瘤细胞耐药的机制;随后通过RNA干扰,质粒过表达,RNA seq等方法探究力学信号调控肿瘤细胞染色质构象的机制;最后在体内验证力学干预逆转肿瘤耐药策略。结果初步证实基质刚度越高,肿瘤细胞耐药性越低,DNA损伤修复因子的表达和募集效率越高。相同浓度的化疗药物处理后,肿瘤干细胞DNA损伤程度显著低于普通肿瘤细胞。并且相较于普通肿瘤细胞,肿瘤干细胞的Ku70总量无明显变化,但更倾向于聚集在细胞核内。结论细胞外基质刚度可以作为一种力学信号影响肿瘤细胞的耐药性,目前实验结果表明力学信号可能通过调控Ku70在细胞内的定位,影响肿瘤细胞的DNA损伤修复能力,进而影响其耐药性。

m^(6)A甲基化修饰在肿瘤耐药中的作用机制研究进展

N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)甲基化是哺乳动物体内最常见、规模最大的一类RNA修饰过程,属于表观遗传学修饰之一,在甲基化酶、去甲基化酶、识别酶等调控下参与RNA转录、核输出、翻译和微RNA的加工处理等,因此m^(6)A甲基化修饰可调控基因的表达。肿瘤耐药性是肿瘤临床治疗的主要障碍,在细胞癌变过程中,m^(6)A甲基化修饰可通过调控基因的表达、激活或抑制信号转导通路等引发相应信使RNA翻译改变,促进肿瘤进展,导致再次使用靶向药物时产生耐药性。因此,深入研究m^(6)A甲基化修饰在肿瘤耐药中的作用机制,可以为肿瘤的治疗提供新思路。

沙利度胺对裸鼠移植骨髓瘤达雷妥尤单抗耐药的逆转作用及其机制

目的观察沙利度胺对裸鼠移植骨髓瘤达雷妥尤单抗耐药的逆转作用,并探讨相关机制。方法将Balb/c裸鼠分为空白组、模型组、实验组,每组10只,模型组与实验组取对数生长期的裸鼠浆细胞瘤细胞MPC-11接种到裸鼠的右腋窝,建立裸鼠皮下骨髓瘤模型。实验组分别于成瘤后第1天、第8天皮下注射达雷妥尤单抗144 mg/kg,在第1次皮下注射达雷妥尤单抗注射后48 h给予沙利度胺15 mg/kg每天1次灌胃,空白组与模型组每日给予蒸馏水灌胃。实验组检测在注射达雷妥尤单抗不同时间点的NK细胞耗竭情况;实验组在裸鼠首次给予达雷妥尤单抗前、注射达雷妥尤单抗后NK细胞耗竭点、给予沙利度胺第3天及第二次给予达雷妥尤单抗前检测NK细胞变化情况;实验结束后统一采用流式细胞术检测各组NK细胞数量及CD38表达情况,采用ELISA法检测IL-15、IFN-γ、TNF-α。结果注射达雷妥尤单抗后,实验组NK细胞数量先呈上升趋势,在24 h达最高,之后呈下降趋势。模型组NK细胞数低于空白组,实验组NK细胞数高于模型组(P均<0.01)。模型组CD38表达高于空白组,实验组CD38表达低于模型组(P均<0.01)。首次给予达雷妥尤单抗前、注射达雷妥尤单抗后NK细胞耗竭点、给予沙利度胺第3天及第二次给予达雷妥尤单抗前,实验组裸鼠NK细胞数量分别为3.25±0.23、12.65±1.27、26.48±0.66、37.67±1.45,呈上升趋势。模型组血清IL-15、IFN-γ、TNF-α水平高于空白组,实验组血清IL-15、IFN-γ水平高于空白组(P均<0.05)。实验组血清IFN-γ、TNF-α水平低于模型组(P均<0.01)。结论NK细胞耗竭是骨髓瘤细胞达雷妥尤单抗耐药的重要原因之一,沙利度胺可能通过缓解NK细胞耗竭、调节炎症因子表达从而逆转小鼠移植骨髓瘤对达雷妥尤单抗的耐药。

肿瘤及肿瘤基质细胞释放的外泌体对肿瘤耐药产生的影响

恶性肿瘤已成为当今严重威胁人类健康的疾病之一,存在早发现难、治愈率低和预后差等三大难点。虽然,化疗是癌症治疗的主要手段,但由此产生的耐药也是当今影响疗效的最棘手问题之一,从而使患者面对无药可用的尴尬境地。外泌体(exosomes)作为细胞间信息传递的重要通讯员,在肿瘤耐药传递方面发挥重要作用。研究发现,肿瘤细胞和肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中的基质细胞均可分泌携带耐药相关分子(包括蛋白质和miRNAs等)的外泌体,并通过外泌体在TME中相互作用,传递耐药分子,从而增强肿瘤细胞对药物的耐受性;同时肿瘤细胞外泌体还可以介导药物外排,从而影响药效;基质细胞也可与肿瘤细胞相互作用影响肿瘤细胞对药物的敏感性。同时,这些机制的发现也为克服肿瘤耐药提供了新思路,研究表明通过去除或抑制含耐药分子的外泌体,或者通过改变外泌体的成分(减少耐药分子或增加抗耐药分子),可在一定程度上逆转耐药。本文就肿瘤及肿瘤基质细胞释放的外泌体在肿瘤耐药中的作用以及由此而来的耐药逆转的研究进展作一综述。

药物代谢酶在肿瘤耐药性中的研究进展

肿瘤化学治疗法是目前肿瘤治疗最常用且最有效的方法之一,而在肿瘤化疗过程中出现的耐药现象是导致化疗失败的主要原因。肿瘤耐药的产生机制复杂多样,其中药物代谢酶在肿瘤耐药的发生发展中也极为重要。目前研究显示,有多种药物代谢酶如Ⅰ相代谢中的细胞色素P450酶、环氧合酶等,Ⅱ相代谢中的谷胱甘肽转移酶、葡萄糖醛酸转移酶、葡萄糖神经酰胺合成酶、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)依赖型醌还原酶等以及一类被称作Ⅲ相反应酶类的药物外排泵,如P-糖蛋白等与肿瘤多药耐药的发生密切相关。本文就近年来有关的药物代谢酶与肿瘤耐药的相关性研究作一综述。

MicroRNA与肿瘤铂类耐药的研究

化疗是目前临床上治疗恶性肿瘤主要手段之一,铂类药物是临床上最常用的周期非特异性抗肿瘤药物,在临床治疗实体肿瘤中显示了良好的疗效,然而铂类抗肿瘤药物结构上的相似性使得耐药性或交叉耐药性成为限制该类药物临床应用的主要障碍之一。microRNA是近年来的研究热点之一。miRNA在生物学中起着重要的作用,包括细胞增殖、分化、凋亡、应激耐受及生理新陈代谢。microRNA对靶基因的调控与肿瘤耐药关系密切。该文主要就microRNA在肿瘤铂类耐药中作用的研究进行了综述。

卵巢癌细胞卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达变化及其启动子区甲基化观察

目的观察卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达变化及其启动子区甲基化状态。方法应用分子生物信息学方法,从卵巢癌卡铂耐药基因表达谱芯片中筛选13个肿瘤抑制基因(VHL、COPS2、NOL7、GGNBP2、RBL1、S100A2、PARG1、PERP、TCF3、DNAJA3、ING1、RARRES3、RBBP8),并采用RT-PCR法检测这些基因在卵巢癌卡铂耐药细胞系(SKOV3-CB)及其亲本细胞系(SKOV3)的表达;分析肿瘤抑制基因启动子区CPG岛并设计出8个基因(VHL、COPS2、NOL7、RBL1、PARG1、PERP、DNAJA3)的引物,采用甲基化特异性PCR法检测SKOV3-CB、SK-OV3细胞8个基因启动子区甲基化状态。结果与SKOV3相比,除GGNBP2基因外,其余12个基因均在SKOV3-CB中表达下调。SKOV3-CB、SKOV3的ING1、DNAJA3、VHL甲基化引物均能够扩增出产物,未甲基化引物均不能扩增出产物;COPS2、PERP甲基化引物均不能够扩增出产物,未甲基化引物均能够扩增出产物;PARG1、NOL7、RBL1甲基化引物与未甲基化引物均能够扩增出产物。结论卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因表达下调,其启动子区无甲基化;甲基化机制与卵巢癌卡铂耐药相关肿瘤抑制基因的表达下调无关。