超广谱和耐酶抑制剂β-内酰胺酶的研究进展

产超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶是革兰阴性菌对 β -内酰胺类抗生素耐药的重要原因。近几十年 ,这些酶的种类迅速增加 ,掌握它们的分类、构效关系和耐药模式等方面的知识 ,对临床合理使用抗生素和防止耐药菌的产生具有重要意义。对超广谱和耐酶抑制剂 β -内酰胺酶的最新分类 ,它们水解 β -内酰胺类抗生素的主要结构特点 ,及其氨基酸位点突变对构效关系的影响进行了介绍。

耐酶抑制剂β-内酰胺酶的研究现状

产β-内酰胺酶是细菌对β-内酰胺酶类抗生素耐药的一个重要机制,使用酶抑制剂抑制β-内酰胺酶是维持或/和增强β-内酰胺类抗菌活性的有效方法。耐酶抑制剂β-内酰胺酶的出现使酶抑制剂的抑制效力大为降低,抗菌治疗又面临着新的挑战。

单纯产耐酶抑制剂的β-内酰胺酶菌的检测及其耐药性分析

目的：了解产各种耐酶抑制剂的β-内酰胺酶(IRBLs)细菌及其耐药性。方法：应用多底物纸片表型法检测60株大肠埃希菌、60株肺炎克雷伯菌及其它克雷伯菌30株，并分析产IRBLs菌的耐药性。结果：检出IRTs2株，1株为土生克雷伯菌，其仅对阿莫西林／克拉维酸耐药，1株为大肠埃希菌，仅对阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林和环丙沙星耐药。检出IRBSBLs2株，均为大肠埃希菌，其仅对阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林、头孢唑啉、复方新诺明和环丙沙星耐药。检出IRESBLs6株，1株为大肠埃希菌，2株为臭鼻克雷伯菌，3株为肺炎克雷伯菌，它们具有产经典ESBLs菌相似的耐药谱。结论：IRBLs产生菌在我国已出现；IRBLs至少有三种，不同类型的IRBLs耐药谱不同，其中IRESBLs呈三重以上多耐药谱。

酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶研究进展

酶抑制剂耐药的β-内酰胺酶(inhibitor-resistant TEM(IRT)β-lactamases)主要由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌等肠杆菌科细菌产生,对多种青霉素类及其复合抗菌药物耐药,产酶菌在临床中治疗难度增加,越来越引起临床医师的重视。本文就该酶的分类、表型特征、遗传特征、酶的结构与功能作了阐述。

鸭大肠杆菌耐酶抑制剂β-内酰胺酶(IRBLs)的检测及耐药性分析

根据耐酶抑制剂β-内酰胺酶(IRBLs)的耐药表型特点,应用纸片扩散法(K-B法)检测40株鸭大肠杆菌产IRBLs情况并分析产IRBLs菌的耐药性。结果表明:产IRBLs阳性株4株,阳性率为10%,其对阿莫西林、阿莫西林/棒酸、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、替卡西林/棒酸、氟苯尼考、庆大霉素、新霉素、多西环素耐药,说明IRBLs产生菌已在我国兽医临床上出现,且呈现多重耐药的特点。此外,2株产IRBLs菌对哌拉西林/三唑巴坦敏感,表明三唑巴坦对哌拉西林有一定的保护作用。再者,1株产IRBLs菌对三代头孢耐药,该菌株可能同时产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)或AmpC酶,这提示IRBLs发展的新趋势。

β-内酰胺酶抑制剂研究进展

β-内酰胺酶抑制剂能抑制耐药菌产生的β-内酰胺酶,常与β-内酰胺类抗生素联合使用,能使抗生素中的β-内酰胺环免遭水解,保护抗生素的抗菌作用。1976年,英国从链霉菌中发现第一个β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸,其能抑制部分广谱和超广谱β-内酰胺酶,常与阿莫西林联合应用,可使阿莫西林对某些细菌的MIC值降低。随着抗生素的大量使用以及具有β-内酰胺酶相关的耐药性的细菌的增加,许多β-内酰胺酶抑制剂相继被发现。根据β-内酰胺酶抑制剂的结构,主要将其分为含有β-内酰胺环结构的抑制剂和不含β-内酰胺环结构的抑制剂。本文就目前国内外β-内酰胺酶抑制剂的研究现状进行综述。

耐酶抑制剂β-内酰胺酶研究进展

耐酶抑制剂β-内酰胺酶（IR-BLs）是一类不被酶抑制剂所抑制的β-内酰胺酶，主要来自TEM型，故又称为耐酶抑制剂TEM（IRT），其特点是对阿莫西林、替卡西林及其酶抑制剂复合制剂耐药，但对窄谱头孢菌素、氧亚氨基头孢菌素和7-α-甲氧基头孢菌素敏感，这类酶不属于超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）；值得注意的是，TEM-50、-68、-89、-109、-121、-125型酶不仅具有ESBLs的耐药特征，而且具有IRT耐酶抑制剂的特征，这种复杂的TEM变异体（CMT）的出现，不仅对实验室检测是一个挑战，而且也给临床抗感染治疗带来困难。

TEM型β-内酰胺酶的研究进展

TEM型是目前数量最多的一群β-内酰胺酶，迄今已发现155种，少数属于广谱p内酰胺酶，大多数属于超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）。TEM型ESBLs的特点是对青霉素类和氧亚氨基头孢菌素耐药，对碳青霉烯类和7-α-甲氧基头孢菌素敏感，可被β-内酰胺酶抑制剂抑制。但有一些TEM型酶对酶抑制剂抵抗，称之为耐酶抑制剂β-内酰胺酶（IRT），不属于ESBLs；特别是已发现TEM-50、-68、-89、-109、-121、-125型酶不仅具有ESBLs的耐药特征，而且具有IRT的特征，这种复杂的TEM变异体（CMT）的出现，不仅对实验室检测ESBLs是一个挑战，而且也给临床治疗带来困难。

β-内酰胺酶抑制剂的研究进展

β-内酰胺酶抑制剂在对抗β-内酰胺酶耐药菌感染中发挥着重要作用,一直是药物化学领域的研究热点,但β-内酰胺酶变异体多元化及不利突变减缓了新型抑制剂的发展进程。诸多国内外相关文献在深入了解β-内酰胺酶水解机制及活性位点关键氨基酸作用特点的基础上,通过对已有化合物进行结构修饰或基于片段设计来筛选新的β-内酰胺酶抑制剂。详细介绍了β-内酰胺酶抑制剂的研究进展,旨在为进一步深入开展以增强化合物与酶关键氨基酸互作为基础的创新药物筛选提供帮助。

TEM型β内酰胺酶的研究进展

随着第三、四代头孢菌素使用的日益增多，革兰阴性菌对其耐药率呈逐年上升，并广泛导致许多社区获得性感染和医院感染，呈世界性流行趋势。其最主要的耐药机制是超广谱β内酰胺酶（ESBL ）的产生，产ESBL菌株的流行在国内外均较为广泛，产ESBL肠杆菌的耐药问题己经成为当前全球最重要的医院耐药问题之一。

β-内酰胺类抗生素与β-内酰酶抑制剂合剂的临床应用

β-内酰胺类抗生素是目前临床上应用最多的抗生素，其优点是繁殖期杀菌剂，抗菌谱广，血药浓度高，毒副作用低。缺点为长期应用于临床，多数细菌已对之耐药。细菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制是产生了β-内酰胺酶水解约物的β-内酰胺环而使之失活。为克服这一耐药性，除研制具有耐酶性能的新抗生素外，还要不断寻找新的β-内酰胺酶抑制剂。目前常用的β-内酰胺酶抑制剂有克拉维酸(棒酸)、舒巴坦、他唑巴坦，尤其前两者常用。β-内酰胺酶抑制剂本身就是一种新的β-内酰胺类药物。

大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其诱导表达与抑制的研究

目的了解浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型及其携带模式、β-内酰胺类抗生素诱导β-内酰胺酶基因表达及组氨酸激酶抑制剂氯氰碘柳胺（CLO）抑制其表达的作用。方法采用微量稀释法和E—test检测大肠埃希菌临床菌株对β-内酰胺类抗生素耐药率和最低抑菌浓度（MIC）。采用PCR及其产物测序法检测大肠埃希菌耐药菌株β-内酰胺酶基因型及携带模式。采用实时荧光定量RT-PCR和β-内酰胺酶确证试验分别检测1／4MIC头孢噻肟或青霉素及CLO对大肠埃希菌耐药菌株6一内酰胺酶基因转录和表达的影响。结果浙江地区61．7％（285／462）大肠埃希菌对青霉素、氨苄青霉素、头孢西丁、头孢噻肟和头孢他啶耐药。285株耐药菌株中，TEM和CTX-M基因检出率（83．2％和75．1％）显著高于KPC、SHV和OXA基因（1．4％～10．2％）（P〈0．01），两种以上β-内酰胺酶基因携带率（68．8％）显著高于单基因（31．2％）（P〈0．01），其中61．4％菌株携带TEM＋CTX—M基因（P〈0．01）。除KPC基因外，1／4MIC头孢噻肟和青霉素能诱导89株β-内酰胺酶单基因菌株TEM、CTX．M、SHV和OXAmRNA水平迅速升高（P〈0．01），但可被50～500μg／ml CLO所抑制（P〈0．01）。100gg／ml CLO预处理后，82．8％～85．6％耐药菌株对上述抗生素敏感（P〈0．01），β-内酰胺酶检出率也从95．1％下降至16．1％（P〈0．01）。结论TEM和CTX．M是浙江地区大肠埃希菌临床菌株优势β-内酰胺酶基因型，并以TEM-1＋CTX．M为优势携带模式。低浓度头孢噻肟和青霉素可经细菌二元信号系统上调β-内酰胺酶基因表达，但可被组氨酸激酶抑制剂CLO所抑制。

用纸片双抑制剂平行抑制试验分析阴沟肠杆菌AmpC酶

目的 建立一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。方法 分别以大肠埃希菌(ATCC25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC700603)、阴沟肠杆菌(029、029M和1194E)为β内酰胺酶阴性对照、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、普通型阴沟肠杆菌、持续高产型AmpC酶、高诱导型AmpC酶标准菌株,用纸片双抑制剂平行抑制试验(DDIST)对华山医院连续的不重复的58株阴沟肠杆菌临床菌株进行AmpC酶分析,用三维试验检测高产AmpC酶以验证DDIST。结果 三维试验法从58株阴沟肠杆菌中检出持续高产型AmpC酶产株21株,DDIST检出持续高产型AmpC酶产株18株、高诱导型AmpC酶产株6株。结论 DDIST是一种能快速有效分析阴沟肠杆菌AmpC酶的方法。

东莞地区肠杆菌科细菌碳青霉烯酶的表型与基因型分析

目的了解东莞地区耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)临床感染分布、耐药情况以及产碳青霉烯酶的表型与基因型,完善东莞地区耐药监测信息,为临床控制和治疗CRE的感染提供可靠依据。方法使用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏系统分析仪系统对东莞耐药监测网2020年收集的40株CRE菌株进行菌种鉴定与药敏试验,采用纸片扩散法(K-B法)和E-test法测定药敏。采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶表型,采用GeneXpert Carba-R检测和鉴定碳青霉烯酶的基因型。使用WHONET 5.6软件和SPSS23.0软件进行统计分析。结果40株CRE菌株中检出最高的是肺炎克雷伯菌27株(占67.5%),其次是大肠埃希菌10株(占25%);标本中检出率最高的是呼吸道标本(16株,占40%),其次是尿液标本(7株,占17.5%);40株CRE药敏结果显示,亚胺培南的耐药率为92.5%,美罗培南的耐药率为97.5%,替加环素的耐药率较低为40%;碳青霉烯酶型检测结果显示有37株(占92.5%)产生碳青霉烯酶,其中产A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性24株(占60.0%),产B类金属β内酰胺酶阳性13株(占32.5%),未检出碳青霉烯酶菌株3株(占7.5%);GeneXpert Carba-R测定法检测出碳青霉烯酶基因共37株(占92.5%),检出13株blaNDM(占32.5%),24株blaKPC(占60%);携带blaKPC的CRE菌株对阿米卡星、替加环素和氨曲南的耐药率比携带blaNDM的CRE菌株的高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论东莞地区分离的CRE菌株以产A类丝氨酸碳青霉烯酶和产B类金属β-内酰胺酶的菌株为主。检出的碳青霉烯酶基因型主要为blaNDM和blaKPC,其中携带blaNDM的CRE菌株对阿米卡星、替加环素和氨曲南的耐药率较低。GeneXpert Carba-R可以快速检测并鉴定碳青霉烯酶基因型。建议实验室同时进行表型和基因型的检测,指导临床合理使用抗生素。

大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸耐药机制的研究

目的探讨大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸的耐药特点和机制,为临床合理用药提供依据。方法收集四川大学华西医院2005年5月至12月临床分离的544株大肠埃希菌经微量肉汤稀释法确认对氨苄西林/舒巴坦耐药的大肠埃希菌,从中随机选取276株用药敏纸片检测,仅52株对阿莫西林/克拉维酸耐药。对符合耐酶抑制剂β-内酰胺酶耐药表型的2株大肠埃希菌进行TEM型β-内酰胺酶基因的克隆表达。采用多重PCR技术检测耐阿莫西林/克拉维酸大肠埃希菌的TEM、SHV、OXA型3种β-内酰胺酶。结果52株大肠埃希菌含TEM型46株,SHV型1株,OXA型6株。其中同时含TEM型和SHV型1株以及含TEM型和OXA型5株。结论TEM-1型广谱酶的高产是华西医院大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸耐药主要机制,另外本次研究首次在西南地区发现OXA-1型ESBLs,也是造成耐药的重要机制。

大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸耐药机制的研究

目的探讨大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸的耐药特点和机制,从而为临床合理用药及减少耐药的发生和耐药基因传播提供实验研究依据。方法将对氨苄西林/舒巴坦耐药的大肠埃希菌544株,随机选取276株进行阿莫西林/克拉维酸纸片的筛查,对筛出的耐药菌株采用琼脂对倍稀释法进行MIC值测定和PCR扩增分析。对符合耐酶抑制剂β-内酰胺酶耐药表型的大肠埃希菌进行TEM型β-内酰胺酶基因的克隆表达。采用多重PCR技术对耐阿莫西林/克拉维酸大肠埃希菌进行TEM、SHV、OXA型三种β-内酰胺酶的筛查。结果TEM型46株,SHV型1株,OXA型6株,TEM型和SHV型均阳性1株,TEM型和OXA型均阳性5株。产TEM型β-内酰胺酶中TEM-1型最常见,耐酶抑制剂TEM型β-内酰胺酶(IRT)未发现。结论TEM-1型广谱酶的高产是华西医院大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸耐药主要机制,本研究首次在西南地区发现OXA-1,是造成耐药的重要原因。