耐酸耐胆盐乳酸菌的鉴定及筛选

从自然发酵的酸奶中分离出2株细菌,经16S rDNA分子鉴定为Lactobacillus plantarum SN1和Lactobacillus rhamnosus SN6,并对其生长曲线、产酸速率、耐酸耐胆盐能力进行了研究。L.plantarum SN1和L.rhamnosus SN6在2 h后进入对数期,16 h后达到稳定期,其OD_(600nm)值分别为8.47、7.43。L plantarum SN1和L.rhamnosus SN6的产酸速率较快,pH值在8 h后就降到了4.2以下,48 h后降到3.3左右。L.plantarum SN1和L.rhamnosus SN6在pH 4的培养基培养16 h后,其相对OD_(600nm)值分别为49.29%、47.14%,具有较强的耐酸能力。L.plantarum SN1和L.rhamnosus SN6在0.3 g/L胆盐质量浓度下培养16 h后,相对OD_(600nm)值分别为57.7%、69.48%;在0.6 g/L胆盐质量浓度下的相对OD_(600nm)值分别为48.22%、29.56%,具有较强的耐胆盐能力。结果表明:L.plantarum SN1和L rhamnosus SN6是生长性能好、产酸能力强、耐酸耐胆盐的益生菌株。

乳酸菌的抗氧化活性和耐酸耐胆盐性能的研究

以清除DPPH自由基和还原能力为指标,对实验室保藏的25株乳酸菌的菌体和无细胞提取物进行体外抗氧化性研究;将抗氧化性强的10株乳酸菌,进行对模拟胃液酸度和肠道胆盐的耐受性研究,比较不同乳酸菌株的抗氧化和耐酸耐胆盐能力,为开发功能性乳酸菌食品提供理论依据。研究表明:不同属和同属的不同菌株的乳酸菌抗氧化能力和耐酸耐胆盐存在差异,且其抗氧化活性物质存在部位不同。比较发现干酪乳杆菌GL-2抗氧化性高且耐酸耐胆盐。干酪乳杆菌GL-2菌体浓度为109cfu/mL时,菌体和无细胞提取物DPPH自由基清除率分别为37.22%、42.78%,还原活性分别相当于104.84、107.10μmol/L L-半胱氨酸;pH=3.0的酸性缓冲溶液处理2h后存活率均达100%,在改良MRS培养基(胆盐为0.5%(W/V))处理4h存活率为0.35%。

耐酸耐胆盐嗜酸乳杆菌的紫外诱变选育

通过紫外诱变提高嗜酸乳杆菌的耐酸耐胆盐能力。通过正交试验确定了诱变参数:20 W紫外灯,菌液稀释至OD6000.65左右,照射60 s,照射距离为30.5 cm,此条件的致死率为90.5%。诱变处理后的菌体在模拟人肠道胆汁盐浓度(0.3%)以及pH=2的选择性培养基中处理不同时间后,活菌计数,最终筛选出具有耐胆盐能力显著增强的突变体L.a.abr。在含0.3%胆盐和pH为2的选择性培养基中培养1.5、2.0、2.5 h时的存活率分别为19.57%、10.87%和4.78%,而出发菌株的相应存活率分别为3.68%、1%、0.23%。

人源乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇作用研究

利用选择性培养基、人工胃液及含胆盐培养基,从如皋长寿地区的人群肠道中分离筛选出耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其降胆固醇能力及方式。结果表明,分离筛选的60株乳酸菌在pH 3.0的人工胃液中存活率均>30%;来源于中年组、老年组及长寿组的乳酸菌存活率分别为69%,71%,70%,均显著高于青少年组(P<0.05);在0.3%及0.5%胆盐培养基中的存活率均>20%,老年组及长寿组的乳酸菌在0.3%胆盐培养基中的存活率分别为53.85%,55.26%,均显著高于青少年组和中年组(P<0.05);来源于长寿组的乳酸菌降胆固醇能力显著高于中年组(P<0.05),其中,乳杆菌属与魏斯氏菌属的胆固醇降解率显著高于肠球菌属(P<0.05),其降胆固醇的主要方式为细胞吸收和共沉淀。来源于长寿地区人群的乳酸菌耐酸耐胆盐能力及降胆固醇能力较强,其中长寿组的乳酸菌要高于其他年龄组。

降胆固醇和耐酸耐胆盐益生菌的筛选研究

本研究通过含有胆固醇胶束的MRS-胆固醇液体培养基从五株益生菌中筛选出降胆固醇能力较强的益生菌,接着对筛选出的益生菌进行耐酸、耐胆盐试验。结果表明,五株益生菌都有降胆固醇的功能,其中干酪乳杆菌LCA-1、鼠李糖乳杆菌LR-D和植物乳杆菌LP-C的胆固醇去除率较高,分别为25.26%、22.18%和20.03%;LR-D能够短时耐受低p H值环境,在p H 2.5的发酵液中培养2h的存活率能够达到14.39%,但是耐胆盐能力较差;LP-C能够长时间耐受低p H值的环境,具有较强的胆盐耐受能力,在高胆盐环境(0.5%)中培养2 h的存活率高达133.75%,培养24 h的活菌数仍保持在1.13×105 cfu/m L,此时其余两株菌的活菌未检出,说明LP-C能够耐受高胆盐环境。植物乳杆菌LP-C具有较高的胆固醇去除率,能够耐受低p H值和高胆盐环境。因此,可用于进一步研究与开发。

2株耐酸及耐胆盐嗜酸乳杆菌的分离筛选及其发酵特性研究

从乌克兰发酵食品中分离出2 200株乳杆菌,采用含0.3%胆盐和pH为4.0的MRS平板筛选出2株耐酸及耐胆盐能力强的嗜酸乳杆菌,并命名为La-W2和La-W3.对2株菌在脱脂乳中37℃培养48 h的pH值、滴定酸度和活菌数等发酵特性进行了研究,结果表明:La-W2和La-W3有较强的耐酸性和耐胆盐能力,其发酵特性适于乳酸发酵食品要求.

原生质体融合提高嗜酸乳杆菌耐酸及耐胆盐能力

两株不同来源嗜酸乳杆菌La-w1和La-w2进行原生质体融合,获得一株耐酸和耐胆盐能力强的菌株La-F1,并对其生长特性进行研究。结果表明,融合菌株La-F1耐酸性和耐胆盐能力明显高于初始菌株,其生长特性适于乳酸发酵食品要求。

酸驼乳中优势乳酸菌的胃肠道耐受特性研究

本试验通过体外耐酸、耐胆盐实验,从传统发酵酸驼乳中的优势乳酸菌中筛选出耐受性较强的优良益生特性较强的乳酸菌菌株。结果显示,其中15株乳酸菌具有强耐酸特性,其中有14株菌对0.3%牛胆奥盐有一定的耐受性;耐受性较好的是M1-1、M3-3(Lactobacillus brevis)、5-d(Enterococcus sp.)、Le2-1、M4-5(Enterococcus durans strain)、M3-11、M1-4、Le3-3、Le2-10(Leuconostoc lactis strain)、M1-1、M4-3-2、M1-1,以上这些菌株在pH 2.0和胆盐浓度0.3%条件下均能生长,其存活率也大于1%;研究结果为开发出适合于驼乳发酵的益生发酵剂提供理论基础。

屎肠球菌降胆固醇作用的初步研究

血液中胆固醇含量增加会严重威胁人类健康。利用皂化-比色法检测了22株屎肠菌株体外降胆固醇的能力,结果显示屎肠菌株的胆固醇去除率在85.93%~21.25%之间。选取3株胆盐耐受能力较好的菌进行后续研究,其中,屎肠球菌SP5-6L的耐酸能力较差;JS2和ML13-5菌株具有一定的耐酸和耐胆盐能力;3株菌株的胆盐水解酶活性都很高。在0.3%胆盐培养基中,屎肠球菌的胆固醇去除率不同,其中ML13-5菌株的去除率由52.71%增加到68.01%。此外,屎肠球菌无溶血性,但其抗药性各有不同。本文对屎肠球菌降低胆固醇的机制进行了初步研究,为进一步利用其开发相关功能性食品和药物提供了依据。

新疆拜城赛里木镇传统发酵酸乳中优势菌株的胃肠道耐受特性

通过体外耐酸、耐胆盐实验,从新疆拜城赛里木镇传统拉丝酸乳中的优势乳酸菌中筛选出耐受性和优良益生特性较强的乳酸菌菌株。结果表明:筛选出来的9株乳酸菌,在p H 2.0的条件下表现出极强的耐受能力,S5-8和S2-1L用人工胃液处理后的活菌数量在108 CFU/m L以上,其中S5-8有明显的增长趋势,其他7株菌株活菌数量在107CFU/m L以上,远远超过了106 CFU/m L以上的临界值,对9株强耐酸性乳酸菌进行耐胆盐实验。

优良乳酸菌的筛选及其耐药性研究

从传统发酵食品分离的乳酸菌中筛选出发酵特性较好,耐酸耐胆盐能力较强的乳酸菌,并研究其耐药性。结果表明,60株乳酸菌中有28株乳酸菌的凝乳时间在10h-24h之间,p H在3.85-4.78,产酸速率中等;其中有10株乳酸菌在p H3.0和0.3%胆盐的环境中培养3h的OD值均分别大于0.61和0.42,并显著高于其他菌株(P<0.05);对阿莫西林、头孢唑啉均为敏感,对阿米卡星、卡那霉素均为耐药。菌株A59、A14的凝乳特性较好,耐酸耐胆盐能力较强,对抗生素较为敏感。

华南虎源乳酸菌的分离筛选及体外益生特性

乳酸菌对动物肠道健康具有非常重要的作用。为了筛选出具有益生特性的优良菌株,对健康华南虎(Panthera tigris amoyensis)粪便中的乳酸菌进行分离培养、纯化及鉴定,并通过研究菌株对大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella sp.)和迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的抑菌性及菌株的耐酸、耐胆盐、溶血性和对24种药敏纸片的耐药性,对菌株生物学特性进行评价。结果显示:共分离得到78株乳酸菌,其中15株具有较好的抑菌性能,对以上4种致病菌的抑菌圈均大于15 mm,含6株罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri,22YY08、22DC20、22XX19、22Hui09、22LL14和22XX03)、3株卷曲乳杆菌(L. crispatus,22HH02、22YY13和22YY09)、2株动物乳杆菌(Ligilactobacillus animalis,22Hui15、22LL07)、1株戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus,22DC18)、1株黏膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae,22DC10)、1株约氏乳杆菌(L. johnsonii,22DC09)和1株格氏乳球菌(Lactococcus garvieae,GaL110)。通过进一步试验筛选出8株乳酸菌,在pH=2.5和胆盐浓度为0.1%时表现出较好的耐酸、耐胆盐性能,均不产生溶血性,但其中3株罗伊氏乳杆菌22Hui09、22YY08和22LL14对多种药物耐药,其他菌株对多种药物敏感。本试验筛选获得的3株罗伊氏乳杆菌(22DC20、22XX03和22XX19)、1株戊糖片球菌(22DC18)和1株格氏乳球菌(GaL110)有希望作为具有益生特性的菌株应用到华南虎益生菌制剂的开发。

贵州腌鱼微生物多样性和益生特性分析

采用Illumina Miseq高通量测序平台,研究贵州腌鱼样品的微生物多样性和种群结构,进而对优势菌进行分离纯化和耐酸耐胆盐特性分析。测序共得到有效序列为98695条,结果表明,厚壁菌门(Firmicutes)为腌鱼样品中的优势菌门,乳杆菌属(Lactobacillus)、魏斯氏菌属(Weissella)、盐单胞菌属(Halomonas)、Ignatzschineria属、四联球菌属(Tetragenococcus)、盐厌氧菌属(Halanaerobium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)为腌鱼中的优势菌属,累积占比90%以上。3份腌鱼样品中Y2与Y3菌群组成相似性较高。从腌鱼样品中分离出11株优势乳酸菌,其中,菌株YY16、SS5、MM9在0.2%胆盐中的生长率在90%以上,菌株YY4、SS4、YY16在人工胃液中培养3 h后存活率在90%以上。经鉴定具有较好耐酸耐胆盐能力的菌株YY16为植物乳杆菌,可用于功能性食品的开发。

益生性植物乳杆菌的温度胁迫处理及其对发酵冰淇淋品质和菌活性的影响

为提高冰淇淋中的益生菌活性,对1株分离自西藏灵菇的益生性植物乳杆菌K25进行不同温度的胁迫处理。实验分为低温处理组(4、10、20℃)和高温处理组(45、50、55℃),对菌株K25的处理时间为0.5、1.5、3、5、8、18、24 h,测定上述不同温度和时间组合处理对菌株于-20℃贮存1、15、30 d后活菌数的影响,以未经处理的菌株作为对照组。结果表明,4℃-18 h与55℃-0.5 h胁迫预处理后的菌株在-20℃贮存30 d后活菌数分别为对照组的12倍和15倍,选取4℃-18 h(C-K25)和55℃-0.5 h(H-K25)胁迫处理后的菌株制作冰淇淋并添加巧克力酱作为辅料。对产品理化性质测定结果表明,使用胁迫处理后的K25菌株可以降低冰淇淋产品的酸度,显著提高产品的黏度和硬度(P<0.05),且使用低温胁迫处理后的菌株能够改善冰淇淋的膨胀率和融化率。活菌数测定结果表明,对照组冰淇淋在-20℃贮存60 d后活菌数为5.63(lg(CFU/mL)),而H-K25与C-K25发酵的冰淇淋在-20℃贮存60 d后其活菌数分别为7.26(lg(CFU/mL))和7.32(lg(CFU/mL)),表明温度胁迫预处理对K25低温条件下的存活具有有益影响。而C-K25-巧克力组冰淇淋终活菌数最高为7.56(lg(CFU/mL)),表明巧克力对植物乳杆菌K25具有一定的低温保护作用。产品贮存30 d后,所有组别冰淇淋中的菌株在模拟胃酸和胆盐溶液环境中活菌数均无显著下降(P>0.05)。

臭味发酵食品中益生菌分离鉴定及功能性研究

目的分析臭味天然发酵食品中常见益生菌种类。方法本实验从臭味天然发酵食品中选取了4种常见益生菌株,并对耐酸耐胆盐能力、抗药性进行了研究。结果4株益生菌株经16S rDNA分子鉴定为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)和粪肠球菌(Enterococcus faecium)。嗜酸乳杆菌在pH 4的培养基培养16 h后,其相对OD600 nm值为51.13%,具有较强的耐酸能力。植物乳杆菌在0.3 g/L和0.6 g/L胆盐质量浓度下培养16 h后,其相对OD600 nm值分别为98.88%、66.22%,具有较强的耐胆盐能力。实验结果表明这2株菌的耐药性都低于鼠李糖乳杆菌和粪肠球菌。结论植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌为耐酸耐胆盐低耐药性特点的益生菌株。

筛选具有抑制引起腹泻致病菌黏附功能的益生菌

筛选能够抑制引起腹泻致病菌黏附的益生菌,并且对其适应肠道环境:耐酸、耐胆盐和黏附性能进行评价。从中国西部地区传统发酵食品以及人类粪便样品中分离的14株益生菌作为筛选菌株。对这14株益生菌进行抑制致病菌黏附的筛选,最终筛选出7株使致病菌黏附数量降低到1.5×104CFU/m L的益生菌进行耐受肠道环境能力评价。实验结果显示这7株益生菌在p H2的条件下处理90min后存活的益生菌依然能够达到107CFU/m L左右,在0.3%的胆盐环境中处理2h后菌数降低到原来的百分之一,单层细胞上黏附的益生菌数J5、G15和F0533能够达到106CFU/m L,显示出了较强的黏附能力。经过综合分析筛选出F0533、IN4125、G15、J5和M7益生菌,经16S r DNA基因技术鉴定分别为Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus rhamnosus、Lactobacillus paracasei、Lactobacillus casei和Lactobacillus paracasei。

嗜酸乳杆菌的筛选及培养基的优化

通过模拟正常人体胃内状态,筛选出10株耐酸耐胆盐的嗜酸乳杆菌。针对嗜酸乳杆菌的营养需要,采用正交实验优化基础培养基及增殖因子的用量,得出最佳基础培养基配比:蛋白胨1%,葡萄糖0.5%,大豆低聚糖1.5%,酵母膏1.0%(均为质量分数);最佳增殖因子添加量为西红柿汁12%。最后使用优化出的增菌培养基测定生长曲线,同时测定pH值和OD值的变化确定增菌培养终止时间为16h,通过平板菌落计数,此时菌数可达2.2×1012mL-1。

817肉鸡肠道乳酸菌及生理特性研究

为筛选817肉鸡同源性乳酸菌菌株,从健康30日龄肉鸡盲肠内容物中分离出LB1、LB2、LB3和LB4四种疑似乳酸菌,经革兰氏染色镜检,生化分析及糖发酵试验进行鉴定,并通过耐酸性、耐胆盐性及抑菌性生理特性研究。结果表明:4种菌株均初步判定为乳酸菌属,LB3和LB4在0.3%胆盐浓度的菌落存活数显著高于其他菌株(p<0.05);LB4和LB1在pH4.0酸度的存活菌数显著高于其他菌株(p<0.05);LB4抑菌圈直径最大,抑菌效果最佳。经综合评定,LB4菌株生理特性最佳,可作为乳酸菌制剂菌种备选。

皖北地区腌制咸菜中乳酸菌的益生特性研究

采用纯培养方法,从采集于皖北地区10份不同的腌制咸菜样品中分离出了10株乳酸菌,通过测定产酸能力、耐酸耐胆盐能力、抑菌能力和抗氧化能力,比较了它们的益生特性.筛选出了1株具有优良益生特性的乳酸菌,即植物乳杆菌H-2.该菌株总体益生功能较强,在6 h和24 h的产酸速率分别为0.2880%和0.4545%.对酸和胆盐具有较好的耐受性,对大肠杆菌的抑菌效果较好,抑菌圈直径可达21.51 mm,抑菌圈清晰,对金黄色球菌的抑菌效果一般.对超氧自由基清除率、对羟基自由基清除率、亚铁离子螯合率分别为54.44%,53.30%,58.51%.

产抑菌物质乳酸菌的筛选及其抑菌特性研究

目的筛选具有抑菌活性的乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB),为其在食品保鲜中的应用奠定基础。方法以De Man Rogosa Sharpe(MRS)和M17为培养基,对韩国传统泡菜中乳酸菌进行分离鉴定,通过琼脂孔扩散法筛选具有广谱抑菌活性的乳酸菌,并分析它的耐酸、耐胆盐能力,及对温度、pH、发酵时间的敏感性。结果以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肠炎沙门氏菌、枯草芽孢杆菌为指示菌进行抑菌活性筛选,获得一株抑菌效果最佳的植物乳杆菌PC4-5。植物乳杆菌PC4-5在酸性条件(pH=2)处理2 h后存活率达到43.79%,0.5%胆盐处理2 h后存活率达到21.02%,说明植物乳杆菌PC4-5具有较好的耐酸、耐胆盐能力。经排酸排过氧化氢实验后,发酵上清依然保留抑菌活性,蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明该抑菌物质为细菌素。该细菌素在pH为2;的范围有抑菌能力,且有较好的热稳定性。结论植物乳杆菌PC4-5适用于酸性食品的防腐保存,在食品保鲜中的应用有较大的潜力。