灵菌红素对耐阿霉素乳腺癌细胞体外活性影响

目的研究灵菌红素对乳腺癌细胞MCF-7/ADR增殖、周期、凋亡、迁移的影响。方法以MCF-7/ADR为研究对象,采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验检测灵菌红素对MCF-7/ADR细胞增殖、迁移的影响;流式细胞术和DAPI染色检测灵菌红素对MCF-7/ADR细胞周期及凋亡的影响;Western blot检测灵菌红素对MCF-7/ADR细胞蛋白caspase-3、Bax、Bcl-2表达影响。结果灵菌红素可抑制MCF-7/ADR细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。另外,灵菌红素可增强阿霉素对MCF-7/ADR的抑制作用(P<0.05)。灵菌红素能抑制MCF-7/ADR细胞迁移,且呈浓度依赖性。灵菌红素能改变MCF-7/ADR细胞周期性分布,使其周期阻滞在S期,并诱导MCF-7/ADR细胞凋亡,且与浓度以及时间呈依赖关系。2 mg·L;灵菌红素处理MCF-7/ADR细胞48 h,S期细胞比例增至35.3%,细胞凋亡率高达64.83%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。灵菌红素可调控MCF-7/ADR细胞凋亡蛋白的表达,上调caspase-3、Bax,抑制Bcl-2蛋白的表达。结论灵菌红素对乳腺癌细胞具有抑制增殖、迁移、改变周期分布及诱导凋亡的作用。灵菌红素可以增强MCF-7/ADR对阿霉素的敏感性。

灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用研究

目的探讨灵菌红素对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的作用。方法采用平板发酵粘质沙雷氏菌WA12-1-18生产灵菌红素,CCK-8测定灵菌红素的体外活性及MCF-7/ADR的耐药指数。构建裸鼠皮下移植瘤模型,灵菌红素高、低剂量组分别腹腔注射5.0、2.5 mg/kg灵菌红素,生理盐水对照位腹腔注射等体积生理盐水,每4天1次,连续用药24 d,观察移植瘤的体积、质量及裸鼠体质量,HE染色观察移植瘤组织及裸鼠主要脏器的病理情况,免疫组织化学检测移植瘤Ki-67的表达。结果获得的灵菌红素质量分数为95.18%,对MCF-7和MCF-7/ADR的IC50分别为0.484μg/mL和0.264μg/mL。MCF-7/ADR耐药指数13,符合细胞耐药株的要求。灵菌红素处理组裸鼠移植瘤增长速度较生理盐水组慢,肿瘤细胞排列稀疏,核小且着色较浅,Ki-67染色后棕色明显减少。灵菌红素2.5 mg/kg组和灵菌红素5 mg/kg组,在荷MCF-7/ADR裸鼠中抑瘤率分别为37.23%和53.72%。另外,各组裸鼠体质量差异无统计学意义,主要脏器无明显病理变化。结论灵菌红素可抑制裸鼠体内耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的生长,对心、肝、脾、肺和肾等主要脏器无明显毒副作用,为灵菌红素在耐阿霉素乳腺癌的临床应用提供了实验依据。

甲基莲心碱对耐阿霉素人乳腺癌细胞凋亡抗性的影响

目的 探讨甲基莲心碱 (neferine ,Nef)对耐阿霉素人乳腺癌细胞 (MCF 7/Adr)凋亡抗性的影响及其机制。方法 应用Tunel法和PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡 ,间接免疫荧光流式细胞仪检测P gp的表达 ,高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内阿霉素 (ADR)的浓度。结果 ①MCF 7/Adr细胞能耐受 5mg·L- 1 ADR诱导的凋亡 ,而 1 ,5 ,1 0μmol·L- 1 Nef可使 5mg·L- 1 ADR诱导的MCF 7/Adr细胞凋亡从 7 95 %分别增加至 2 1 3 % ,2 7 9% ,61 3 % ;② 1 0μmol·L- 1 Nef可使MCF 7/Adr细胞内ADR积累由 0 52 μg·(1 0 6 cells) - 1 增加到 1 50 μg·(1 0 6 cells) - 1 ;③ 1 0 μmol·L- 1Nef作用 2 4h后 ,MCF 7/Adr细胞P gp的表达明显下降。结论 甲基莲心碱能逆转MCF 7/Adr细胞的凋亡抗性 ,其作用机制可能与抑制P gp的功能和表达、增加ADR在MCF

华蟾素对耐阿霉素人乳腺癌细胞内阿霉素蓄积的影响

目的:测定华蟾素(cinobufacine,Cino)对耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM内阿霉素(ADM)积累的影响,以探索Cino逆转MCF-7/ADM多药耐药(MDR)的可能机制。方法:MTT法检测CinoMDR的逆转作用,HPLC法检测Cino作用MCF-7/ADM后细胞内ADM的浓度的变化。结果:Cino15mg/L能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度(IC50)由38.14mg/L降至12.93mg/L,显著增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的浓度。结论:Cino能明显增加MCF-7/ADM株细胞内ADM的含量,部分逆转MCF-7/ADM的MDR。

胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM细胞的逆转作用

目的探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素(ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用及其机制。方法采用CCK-8法观察胡椒碱联合阿霉素(ADM)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADM细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术(Western-blot)测定胡椒碱联合ADM对MCF-7/ADM细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果 60,80,100μmol/L胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义(P<0.05)。胡椒碱能显著抑制MCF-7/ADM细胞膜P-gp蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与ADM共同作用于MCF-7/ADM细胞,可使细胞对ADM的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调P-gp的表达有关。

四种聚酰胺-胺树状大分子制剂逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞对阿霉素耐药性的研究

目的探讨带有不同电荷及配体的树状大分子(PAMAM)对逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞多药耐药(MDR)的影响。方法以阿霉素为模型药,比较了四种载药大分子(G 3.5/DOX,G 4.0/DOX,PEG-G 4.0/DOX,FA-G 4.0/DOX)对MCF-7/ADR细胞的细胞毒作用。结果四种大分子制剂的细胞毒均高于DOX溶液,FA-G 4.0(6.74μg/m L)最强,其逆转倍数达到5.07。与大分子制剂孵育2 h后,MCF-7/ADR细胞中阿霉素浓度大小为FA-G 4.0/DOX>G 4.0/DOX≈G 3.5/DOX>PEG-G 4.0/DOX>DOX溶液。结论四种大分子制剂均可一定程度地克服MCF/ADR细胞的耐药性,G3.5/DOX、G 4.0/DOX、PEG-G 4.0/DOX对MDR的影响没有显著区别,FA-G 4.0/DOX克服MDR的效果最好。

MIF对耐ADM人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外耐药逆转作用

目的:采用动物体内外结合方法探讨米非司酮(mifepristone,MIF)对耐阿霉素(adriamycin,ADM)人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药逆转作用。方法:四甲基偶氮唑蓝法检测5μmol/LMIF对MCF-7/ADM体外耐药逆转作用。MCF-7/ADM接种裸鼠皮下构建裸鼠移植瘤模型,空白对照组(NS组)为0.2mL生理盐水腹腔注射+0.5mL食用油灌胃;ADM组为5mg/kgADM腹腔注射+0.5mL食用油灌胃;MIF组为30mg/kgMIF灌胃+0.2mL生理盐水腹腔注射;ADM+MIF组为5mg/kgADM腹腔注射+30mg/kgMIF灌胃。观察各组裸鼠移植瘤情况。结果:(1)5μmol/LMIF对MCF-7/ADM细胞的抑制率小于5%,与未用MIF组的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率为17.21mg/L,而对非耐药乳腺癌细胞MCF-7细胞的半抑制率为0.42mg/L,ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率明显高于MCF-7的半抑制率(P<0.05)。(3)5μmol/LMIF与ADM联合处理MCF-7/ADM细胞后,MCF-7/ADM半抑制率为1.96mg/L,明显低于单用ADM组的半抑制率(P<0.05)。逆转ADM耐药倍数为8.78。(4)ADM+MIF组瘤体积[(232.5149±309.2377)mm3]均低于NS组的瘤体积[(962.2309±261.1313)mm3](均P<0.05),也低于MIF组的瘤体积[(778.2846±42.6919)mm3],还低于ADM组的瘤体积[(508.9648±16.2609)mm3](均P<0.05)。MIF+ADM组的瘤质量抑制率为78.0%。结论:MIF对耐阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外均有逆转耐药性的作用。

低毫安(10mA)电化学治疗对人乳腺癌细胞耐药性的逆转作用

目的:研究低毫安(10m A)电化学治疗对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株(MCF-7/ADR)多药耐药(MDR)性的逆转作用及其机制。方法:用MTT法测定电化学治疗对细胞的生长抑制作用,荧光分光光度法检测细胞内阿霉素(ADR)的浓度,流式细胞术检测细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达。结果:低毫安电化学治疗(0.1C-2C)能不同程度降低ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50;2C的电化学治疗能显著提高ADR在MCF-7/ADR细胞内的浓度,降低MCF-7/ADR细胞P-gp的表达。结论:电化学治疗能逆转MCF-7/ADR细胞的MDR,其机理可能是抑制了P-gp的功能表达,增加了细胞内ADR的积累。

山柰酚诱导人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素凋亡的研究

目的研究山柰酚对人乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/阿霉素(ADR)的增殖与凋亡的作用机制。方法(1)将人乳腺细胞MCF-7分为2组:空白组(培养基)和实验组。实验组分别用含不同浓度的山柰酚(20,50,100,150,200,300,400,500μmol·L^(-1))的培养基干预。干预48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。(2)将MCF-7/ADR细胞分为3组:ADR组(ADR 0.1μmol·L^(-1))和低、中2个浓度山柰酚联合组(ADR 0.1μmol·L^(-1)+分别加山柰酚20,50μmol·L^(-1)),MTT法测定细胞存活率,计算半抑制浓度(IC_(50))。(3)将MCF-7/ADR细胞分为8组:空白组(培养基)、ADR组(ADR 0.1μmol·L^(-1))、低、中、高3个浓度的山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L^(-1))和低、中、高3个联合组(ADR 0.1μmol·L^(-1)+分别加山柰酚20,50,100μmol·L^(-1))。干预后,流式细胞术检测细胞凋亡率。(4)将细胞分为2组:MCF-7组与MCF-7/ADR组;再将MCF-7/ADR细胞分为4组:空白组合低、中、高3个浓度山柰酚组(山柰酚:20,50,100μmol·L^(-1))。干预后,蛋白质印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白表达水平(灰度值比值)。结果(1)根据细胞存活率选择低、中、高3个浓度(20,50,100μmol·L^(-1))的山柰酚进行以下实验。(2)ADR组和低、中2个浓度山柰酚联合组的IC_(50)分别为(43.68±0.71),(17.68±3.14)和(23.51±0.07)μmol·L^(-1)。低、中2个浓度山柰酚联合组与ADR组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。(3)空白组、ADR组、3个浓度(由低到高)的山柰酚组和低、中、高3个联合组的细胞凋亡率分别为(0.17±0.24)%,(23.00±1.14)%,(9.53±1.24)%,(17.07±1.04)%,(22.20±1.15)%,(16.03±1.74)%,(21.43±2.21)%和(21.93±3.57)%。ADR组、山柰酚组和联合组与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01),低剂量联合组与ADR相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)MCF-7组与MCF-7/ADR组的Bcl-2蛋白表达分别为1.47±0.33和0.56±0.20,这2组的Caspase-9蛋白表达分别为0.89±0.67和4.12±1.25。2组相比,上述蛋白表达的差异均有统计学意义(P<0.05)。空白组和低、中、高3个浓度山柰酚组的Bcl-2蛋白表达分别为1.30±0.19,1.20±0.05,1.45±0.15和0.81±0.16;这4组的Caspase-9蛋白表达分别为1.02±0.09,0.96±0.07,0.79±0.07和0.40±0.18。高剂量组与空白组相比,上述2种蛋白表达的差异有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论山柰酚对MCF-7细胞有毒性作用,与ADR联合用药后降低ADR在MCF-7/ADR中的IC_(50),山奈酚提高MCF-7/ADR细胞的凋亡,可能与降低Bcl-2蛋白表达与升高Caspase-9蛋白表达有关。

两株毛筒腔菌属真菌逆转人乳腺癌细胞多药耐药性

高水平的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)基因在肿瘤细胞中过量表达是肿瘤细胞耐药的内在原因,是导致肿瘤化疗失败的主要原素。寻求一种抑制MDR活性的抑制剂是提升抗肿瘤药物药效的重要途径。本研究采用低浓度持续诱导方法建立人乳腺癌细胞(MCF-7)耐药细胞系,结果显示,阿霉素(ADM)、紫杉醇和顺铂对MCF-7耐药细胞系有交叉耐药性,耐药指数(resistance index,RI)分别为5.11、3.55和1.79。菌株对肿瘤细胞的逆转活性筛选表明,红棕毛筒腔菌Tubeufia rubra PF02-2和河池毛筒腔菌T.hechiensis XSL05具有逆转肿瘤细胞多药耐药性为敏感性的活性,逆转倍数(reversion fold,RF)分别为3.79和1.07。结果表明,T.rubra和T.hechiensis具有开发为MDR逆转剂的潜能。

Reversal of Multidrug Resistance by Neferine in Adriamycin Resistant Human Breast Cancer Cell Line MCF-7/ADM

Objective: To study the reversal effect of neferine on adriamycin (ADM) resistant human breast cancer cell line MCF-7/ADM. Methods: The cytotoxic effect of Nef or ADM was determined by 3-[4, 5-dimethylthiazol-2.-yl], 5-diphenyl tetraxolium bromid (MTT) assay. Apoptosis and the expression of P-glycoprotein (P-gp) were detected by flow cytometry (FCM). The intracellular ADM concentration was measured by HPLC. Results: Nef at 1, 5, 10 mol/L decreased the IC50 of ADM to MCF-7/ADM from 11.63 g/mL to 4.59, 2.44, 0.27 g/mL respectively. MCF-7/ADM could resist the apoptosis induced by ADM while Nef (1-10 mol/L) could augment ADR-mediated apoptosis. Nef (10 mol/L) increased the accumulation of ADM up to 2.88 fold in MCF-7/ADM but not in sensitive cells MCF-7/S and reduced the expression of P-gp in MCF-7/ADM cells. Conclusion: Nef can circumvent multidrug resistance (MDR) of MCF-7/ADM cells and the mechanism was associated with the increase of intracellular accumulation of ADM and the reduced expression of P-gp in MCF-7/ADM cells.