胡椒碱对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM细胞的逆转作用

目的探讨胡椒碱对人乳腺癌阿霉素(ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM的逆转作用及其机制。方法采用CCK-8法观察胡椒碱联合阿霉素(ADM)对乳腺癌耐药株MCF-7/ADM细胞生长增殖的影响;应用免疫印迹技术(Western-blot)测定胡椒碱联合ADM对MCF-7/ADM细胞表面P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果 60,80,100μmol/L胡椒碱试验组细胞耐药逆转倍数分别为1.62,2.08,3.78倍,差异有统计学意义(P<0.05)。胡椒碱能显著抑制MCF-7/ADM细胞膜P-gp蛋白的表达,其作用随浓度的增加而增强。结论胡椒碱与ADM共同作用于MCF-7/ADM细胞,可使细胞对ADM的敏感性增强。胡椒碱具有部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药的作用,其逆转作用机制可能与通过下调P-gp的表达有关。

细胞内GSH耗竭逆转人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM对阿霉素的耐药性

目的:探讨癌细胞内GSH浓度在肿瘤细胞耐药机制中的作用。方法:以马来酸二乙酯(DEM)处理人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM 3小时,以消耗其细胞内还原型谷胱甘肽(GSH),MTT法检测DEM处理前后MCF-7/ADM细胞对ADM耐药程度的变化,并采用荧光分光光度法同步检测其细胞内GSH的消耗程度,分析细胞内GSH浓度的变化与MCF-7/ADM细胞对ADM耐药程度变化间的相关关系。结果:0.1umol/L DEM使细胞内GSH浓度减少37.4%(P<0.01);ADM亦使细胞内GSH含量呈ADM浓度依赖性的下降;DEM与ADM合用时,GSH浓度显著下降,其下降程度大于DEM和ADM单独应用之和。随着细胞内GSH数量的减少,MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性增强、耐药性下降(P<0.01)。结论:DEM耗竭细胞内GSH的作用与ADM有协同效应,耗竭细胞内GSH可部分逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。

BI2536对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/阿霉素增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

乳腺癌是威胁人类健康的一大疾病，2007年全世界新发病例为130万，死亡病例为46．5万人。阿霉素自问世以来，在治疗乳腺癌方面取得了好的疗效，但随着阿霉素（ADM）的广泛应用，临床上常出现不敏感、耐药等现象，进而导致治疗的失败。因此，急需寻找新的治疗方案。PLK1是一种多功能丝氨酸，苏氨酸激酶，对细胞周期的正常进行、中心体复制、胞质分裂以及肿瘤发生均有重要作用。在细胞增殖与凋亡的平衡机制中起重要作用。特异性抑制PLK1的活性，可以诱导细胞凋亡，B12536正是通过这一机制研发的抗癌药物。本实验探讨了B12536对乳腺癌ADM耐药株MCF-7／ADM细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用，为耐药乳腺癌寻求有效的药物提供了实验依据。

塞来昔布对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的增殖抑制作用

目的:通过研究选择性环氯化酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合阿霉素(ADM)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞株生长的作用,探讨塞来昔布的抗肿瘤作用。方法:MCF-7/ADM细胞加入不同浓度等倍稀释的ADM(0.05、0.10、0.20、0.40、0.80和1.60mg.L-1)为对照组,MCF-7/ADM细胞加入无细胞的完全培养基为阴性对照组,在对照组的基础上联合应用10、20μmol.L-1塞来昔布为实验组,各组细胞于24、48、72h后采用CCK-8检测细胞生长抑制率。MCF-7/ADM细胞单加0.05mg.L-1 ADM及联合塞来昔布(10、20μmol.L-1)处理后3h收集细胞,采用流式细胞术检测细胞内ADM水平。结果:不同浓度ADM单药及联合塞来昔布(10和20μmol.L-1)作用于MCF-7/ADM 24、48和72h后细胞生长受到抑制,实验组不同时间细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05),且20μmol.L-1塞来昔布实验组细胞生长抑制率高于10μmol.L-1塞来昔布实验组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组24、48和72h的细胞未见明显变化,但实验组细胞作用48和72h后出现细胞改变及死亡,呈塞来昔布剂量依赖性。与对照组比较,塞来昔布实验组(10和20μmol.L-1)细胞内ADM浓度升高(P<0.05);20μmol.L-1塞来昔布实验组细胞内ADM浓度高于10μmol.L-1塞来昔布实验组(P<0.05)。结论:选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合ADM可有效逆转乳腺癌ADM细胞株耐药。

粉防己碱逆转耐阿霉素的人乳腺癌MCF-7细胞的抗凋亡作用

肿瘤细胞的多药耐药性与抗细胞凋亡作用关系密切。本研究用抗肿瘤药物阿霉素 (5μmol· L- 1 )处理人乳腺癌敏感和耐药的 MCF- 7细胞 2 4hr后 ,观察到在敏感细胞中 ,有较多的漂浮细胞 ,阿霉素主要分布在细胞核中 ;而在耐药细胞中 ,细胞形态未发生变化 ,阿霉素主要分布在细胞质中 ,其含量明显减少。阿霉素诱导 MCF- 7细胞的凋亡作用进一步用 An-nexin V - FITC染色法证实。此外 ,用高效逆转耐药性的药物粉防己碱 (2 0μmol· L- 1 )与阿霉素合用处理敏感和耐药的细胞 ,用线粒体荧光染料 Mitosensor TM染色 ,证明合用组凋亡细胞明显增多。通过流式细胞术分析显示 :细胞凋亡的发生与细胞周期无关。本研究表明 :粉防己碱能逆转耐阿霉素的人乳腺癌 MCF- 7细胞的抗凋亡作用。

微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的探讨微波热疗对人乳腺癌阿霉素细胞MCF-7和阿霉素耐药细胞MCF-7/ADM的多药耐药蛋白表达和耐药性的影响。方法应用Real-TimePCR法检测微波热疗对P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的影响和高效液相色谱法(HPLC)检测微波热疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果MCF-7/ADM细胞在微波热疗后4h和24h,P-gp、MRP表达量明显下降(P<0.01)。微波热疗以后肿瘤细胞内阿霉素(ADM)浓度有明显上升(P<0.01)。结论微波热疗抑制了耐药蛋白的表达,增加了细胞内的药物浓度,热疗可能是逆转化疗耐药从而提高化疗效果的一种有效手段。

ATP1B1协同阿霉素抑制乳腺癌细胞MCF-7生长及逆转耐药的作用

背景与目的:Na+-K+ATP酶(Na+-K+泵)是细胞能量转换的重要系统,可能与肿瘤转移有关,其B1亚基基因ATP1B1在高分化的肿瘤细胞中表达高,低分化细胞中表达低。本实验研究ATP1B1协同阿霉素(ADM)在人乳腺癌细胞株MCF-7和其耐药株MCF-7/ADM中的作用以及其逆转耐药效应的影响。方法:将重组质粒PEGFP-ATP1B1转染到MCF-7和MCF-7/ADM细胞,MTT法检测质粒及其B1亚基因沉默后ADM抑瘤效应,荧光显微镜和流式细胞术分析细胞内药物荧光强度,定磷法检测ATP酶活性,RT-PCR和real-time PCR检测MDR1 mRNA的表达,Western blot法检测P-gp蛋白的表达。结果:转染PEGFP-ATP1B1的MCF-7和MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性相对阴性对照ADM-C3组(pEGFP-C3空载体转染)和空白对照ADM-RPMI-1640组均明显增加,且ADM各浓度梯度ADM-ATP1B1组与ADM-RPMI-1640组比较差异有统计学意义(P<0.05);而B1亚基沉默后阴性对照组ADM-shNC,相对实验组ADM-shATP1B1和空白对照ADM-RPMI-1640组细胞对ADM的敏感性明显偏高。荧光显微镜下观察ADM-ATP1B1组MCF-7和MCF-7/ADM细胞ADM红色荧光均高于对照组。流式细胞术显示,ADM-ATP1B1组MCF-7细胞中ADM平均荧光强度较对照组高(P<0.05),ADM-ATP1B1组MCF-7/ADM细胞中ADM平均荧光强度高于对照组(P<0.05)。MCF-7和MCF-7/ADM细胞的ADM-ATP1B1组ATP酶活性均高于ADM-RPMI-1640组(P<0.05),而ADM-C3组与ADM-RPMI-1640组相比差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和real-time PCR检测结果显示,MCF-7/ADM细胞ADM-ATP1B1组MDR1 mRNA相对表达水平与两对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。Western blot显示P-gp蛋白的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ATP1B1对ADM抑制乳腺癌细胞生长具有协同作用,并可逆转耐药细胞MCF-7/ADM对ADM的耐药效应,其机理与MDR1基因无明显的相关性,可能是通过与Na+-K+ATP酶相关的一种新途径而发挥作用的。

β-榄香烯乳剂逆转多药耐药细胞株MCF-7/ADM对阿霉素耐药性研究

目的 :测定中药 β-榄香烯乳剂对 MCF- 7/ ADM细胞的无毒剂量 ,并检测此无毒剂量是否有逆转 MCF- 7/ ADM细胞对化疗药物阿霉素 (ADM)的多药耐药 (multidrug resistance,MDR)性。方法 :采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定药物的细胞毒性及耐药细胞逆转倍数 ;荧光分光光度法测定细胞内药物浓度。结果 :无毒剂量的 β-榄香烯乳剂 (6 μg/ m l)能显著降低化疗药物 ADM对乳腺癌耐药细胞株 MCF- 7/ ADM细胞的 IC50 ,明显增加耐药细胞内药物浓度。结论 :初步研究表明β-榄香烯乳剂具有逆转 MCF- 7/ ADM细胞 MDR的作用。

大黄素对乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/Adr的耐药逆转作用

目的 :探讨中药成分大黄素 (Emodin ,EMD)对乳腺癌多药耐药细胞株MCF 7/Adr的耐药逆转作用。方法 :药物敏感试验采用四唑氮盐 (MTT)比色法 ,P糖蛋白以Western blot法检测。结果 :EMD在 0～ 2 0 μmol/L浓度时作用 14天后对MCF 7/Adr未见明显毒性作用 ;EMD在 10 μmol/L浓度时 ,其耐药逆转倍数为 1 7倍。EMD在 2 0 μmol/L浓度时 ,处理MCF 7/Adr 2、4、6和 11天后 ,检测P糖蛋白发现自第 4天起P糖蛋白表达下降 ,至第 11天无法检测到P糖蛋白的表达。结论 :EMD具有逆转MCF 7/Adr多药耐药性的作用 ,可明显下调P糖蛋白的表达 ,且逆转作用持久。

苦参碱逆转人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株耐药性及对PI3K/AKT信号通路下游因子的影响

目的:探索苦参碱对人乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药性逆转的作用机制及对PI3K/AKT信号通路下游因子的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度苦参碱和MK2206作用MCF-7/ADR细胞24h后的生长抑制率,以抑制率为10%左右为检测标准;用荧光定量RT-PCR、Western blot检测不同浓度苦参碱作用MCF-7/ADR细胞24h后Bcl-2、Bax、Caspase-3、PARP、GSK-3β、p65六种基因mRNA和蛋白的相对表达量。结果:荧光定量RT-PCR结果显示0.6、1.2g/L的苦参碱处理组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高,PI3K/AKT信号通路下游作用因子Bcl-2基因和p65基因的相对表达量逐渐降低,Caspase-3基因的相对表达量变化不显著,而Bax基因、GSK-3β基因及PARP基因的相对表达量逐渐增高;相同抑制率的苦参碱组(0.6g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,两组降低基因表达量的差异不明显,苦参碱组更能增加Bax、PARP和GSK-3β基因的相对表达量并且能够明显减低p65基因的相对表达量。Western blot结果显示0.3、0.6、1.2g/L三组不同浓度苦参碱干预组与空白对照组相比,随着苦参碱浓度的提高Bcl-2和p65蛋白表达量逐渐降低,Bax、PARP和GSK-3β蛋白表达量逐渐增高,Caspase-3蛋白表达量变化不明显;相同抑制率的苦参碱组(0.6g/L)和MK2206组(0.05μmol/L)相比,苦参碱组更明显。结论:苦参碱可能是通过作用AKT靶基因启动PI3K/AKT信号转导通路中下游相关凋亡因子而发挥逆转乳腺癌多药耐药的作用。

受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建和在乳腺癌细胞株(MCF-7)的表达

自杀基因治疗是恶性肿瘤基因治疗中最常用的途径之一 .以逆转录病毒载体———pRevTRE为基础进行载体构建 ,首先使用PCR技术对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSVtk)进行扩增 ,将HSVtk基因插入到pRe vTRE ,形成重组载体pRevTRE/HSVtk ,用磷酸钙共沉淀法 ,经过两轮转染 ,分别将pRevTRE/HSVtk和pRevTet On质粒导入乳腺癌细胞株 (MCF 7) .经过潮霉素B(HygromycinB)和G418筛选 ,建立了一株稳定的受四环素衍生物———强力霉素 (Doxycycline ,Dox)调控、表达HSVtk基因产物的人乳腺癌细胞株MCF/TRE/tk/Tet On .HSVtk基因表达产物可以将无毒性的药物前体Ganciclovir (GCV)转变成一种有毒的代谢产物 ,从而杀死乳腺癌细胞株(MCF 7) ,达到基因治疗的目的 .

化疗药物体外干预乳腺癌MCF-7细胞株的耐药基因表达

目的体外评价蒽环类及紫杉类化疗药物与乳腺癌耐药相关基因MDR1(多药耐药基因)和BCRP(乳腺癌相关耐药基因)表达的关系。方法利用RT-PCR技术和荧光定量PCR技术检测体外化疗药物干预后乳腺癌细胞株MCF-7的耐药相关基因表达情况。结果蒽环类药物与MDR1基因表达量间有密切关系,随蒽环类药物浓度的增加和作用时间的延长,MDR1基因表达量也随之增加。而蒽环类药物与BCRP基因间及紫杉类药物与MDR1、BCRP间都无明显的量效关系。结论蒽环类药物是MDR1基因编码的p-gp蛋白的特异性底物之一。临床可能通过检测MDR1的表达量较准确的预测蒽环类药物的疗效,并为个体化的选择敏感性药物提供一定的实验依据。

miR-142-3p靶向HMGB1逆转乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的耐药性

目的化疗耐药是乳腺癌复发转移、治疗效果不理想的主要因素。本文探讨miR-142-3p通过靶向高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)提高乳腺癌化疗敏感性的分子机制。方法实时荧光定量PCR检测人乳腺癌MCF-7细胞及阿霉素耐药株MCF-7/DOX细胞中的miR-142-3p水平;MTT法检测阿霉素(doxorubicin,DOX)处理后各组的增殖情况、流式细胞术检测凋亡率、Western blot检测HMGB1和自噬有关蛋白的表达水平;双荧光素酶报告实验评价miR-142-3p对HMGB1的靶向调控作用。结果阿霉素耐药株MCF-7/DOX细胞中的miR-142-3p水平明显下调。miR142-3p的过度表达增强了乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性和提高阿霉素诱导的凋亡比率。HMGB1是乳腺癌细胞中miR-142-3p的直接功能靶点,HMGB1的过表达可以明显解除由miR-142-3p上调所产生的细胞凋亡和自噬抑制。结论miR-142-3p的过表达可能通过抑制自噬靶向HMGB1,增强乳腺癌细胞对阿霉素的化学敏感性。miR-142-3p/HMGB1为提高乳腺癌对药物的敏感性提供了新的靶点,具有一定价值。

RNA干扰对乳腺癌细胞株MCF-7/Adr多药耐药性的逆转

目的研究小分子干扰RNA对乳腺癌耐药细胞株MCF7/Adr多药耐药性的逆转作用。方法设计针对mdrl基因的SiRNA,转染进MCF-7/Adr细胞;用荧光定量PCR检测mdrlmRNA的表达,流式细胞仪分析Pgp表达,MTT法检测阿霉素对MCF-7/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)。结果该SiRNA能使耐药细胞株MCF-7/Adr的mdrlmRNA和Pgp表达水平分别显著下调(P<0.01),并使阿霉素对MCF7/Adr的IC50显著降低(P<0.01)。结论RNA干扰可逆转乳腺癌MCF7/Adr细胞株的多药耐药性。

MIF对耐ADM人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外耐药逆转作用

目的:采用动物体内外结合方法探讨米非司酮(mifepristone,MIF)对耐阿霉素(adriamycin,ADM)人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药逆转作用。方法:四甲基偶氮唑蓝法检测5μmol/LMIF对MCF-7/ADM体外耐药逆转作用。MCF-7/ADM接种裸鼠皮下构建裸鼠移植瘤模型,空白对照组(NS组)为0.2mL生理盐水腹腔注射+0.5mL食用油灌胃;ADM组为5mg/kgADM腹腔注射+0.5mL食用油灌胃;MIF组为30mg/kgMIF灌胃+0.2mL生理盐水腹腔注射;ADM+MIF组为5mg/kgADM腹腔注射+30mg/kgMIF灌胃。观察各组裸鼠移植瘤情况。结果:(1)5μmol/LMIF对MCF-7/ADM细胞的抑制率小于5%,与未用MIF组的抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率为17.21mg/L,而对非耐药乳腺癌细胞MCF-7细胞的半抑制率为0.42mg/L,ADM对MCF-7/ADM细胞的半抑制率明显高于MCF-7的半抑制率(P<0.05)。(3)5μmol/LMIF与ADM联合处理MCF-7/ADM细胞后,MCF-7/ADM半抑制率为1.96mg/L,明显低于单用ADM组的半抑制率(P<0.05)。逆转ADM耐药倍数为8.78。(4)ADM+MIF组瘤体积[(232.5149±309.2377)mm3]均低于NS组的瘤体积[(962.2309±261.1313)mm3](均P<0.05),也低于MIF组的瘤体积[(778.2846±42.6919)mm3],还低于ADM组的瘤体积[(508.9648±16.2609)mm3](均P<0.05)。MIF+ADM组的瘤质量抑制率为78.0%。结论:MIF对耐阿霉素的人乳腺癌细胞MCF-7/ADM体内外均有逆转耐药性的作用。

JNJ-7706621对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的研究JNJ-7706621对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用。方法采用MTT试验检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞生长的影响;采用TUNEL染色试验分析JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的激活作用;Caspase酶活性检测分析JNJ-7706621处理后,MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、Caspase-9活化程度;应用流式细胞周期分析检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响。结果 JNJ-7706621能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现明显的浓度依赖性,作用48 h的IC50仅为0.83μmol/L。2μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,TUNEL染色阳性的MCF-7/ADR细胞比率较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、-9酶活性均显著升高,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。在1μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,G2/M期细胞比率由对照(7.1±1.3)%升高至(23.8±3.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 JNJ-7706621能同时激活内外源性凋亡途径,诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并将MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥有效抑制作用。

粉防己碱逆转耐阿霉素的人乳腺癌MCF-7细胞的抗凋亡作用

肿瘤细胞的多药耐药性与抗细胞凋亡作用关系密切。本研究用抗肿瘤药物阿霉素 (5μmol·L-1 )处理人乳腺癌敏感和耐药的MCF 7细胞 2 4hr后 ,观察到在敏感细胞中 ,有较多的漂浮细胞 ,阿霉素主要分布在细胞核中 ;而在耐药细胞中 ,细胞形态未发生变化 ,阿霉素主要分布在细胞质中 ,其含量明显减少。阿霉素诱导MCF 7细胞的凋亡作用进一步用AnnexinV FITC染色法证实。此外 ,用高效逆转耐药性的药物粉防己碱 (2 0 μmol·L-1 )与阿霉素合用外理敏感和耐药的细胞 ,用线粒体荧光染料MitosensorTM 染色 ,证明合用组凋亡细胞明显增多。通过流式细胞术分析显示 :细胞凋亡的发生与细胞周期无关。本研究表明 :粉防己碱能逆转耐阿霉素的人乳腺癌MCF 7细胞的抗凋亡作用。

阿霉素和紫杉醇诱发的人乳腺癌耐药细胞株的比较研究

目的通过比较研究乳腺癌耐药细胞株的细胞生物学特性,探讨不同化疗药物诱发的多药耐药细胞模型的共性。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用阿霉素(Adriamycin,Adr)及紫杉醇(Taxol,Tax)低浓度持续加量诱导法建立了多药耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7Adr及MCF-7Tax。SRB法测定细胞生长曲线、半数致死浓度(IC50)、耐药指数(RF)和耐药谱;显微镜观察细胞形态,FCM分析细胞动力学周期,免疫组化检测细胞表型变化;Hoechst33342染色分析侧群细胞(side population,sp)比例。结果MCF-7Adr及MCF-7Tax细胞较MCF-7亲本细胞对相应药物的IC50提高500倍,撤药培养100 d后RF仍维持在150倍以上,并对多种化疗药物产生交叉耐药性;耐药细胞分化程度低于同步传代的亲本细胞,细胞倍增时间与亲本细胞接近,但S期细胞明显增加,G1期细胞减少,且随着撤药时间的延长,耐药细胞的增殖速度加快;耐药细胞P-gP、LRP和GSTπ的表达水平较亲本细胞有明显增加,ER阳性表达丢失;耐药细胞中SP细胞比例明显增高。结论MCF-7Adr和MCF-7Tax具有多药耐药细胞的基本生物学共性,两者均可作为研究MDR机制的耐药细胞模型。

Twist表达增强乳腺癌MCF-7细胞的多药耐药性

目的探讨MCF-7/Twist稳定表达细胞株的多药耐药性。方法 MCF-7细胞中转染Twist,G418筛选,建立稳定表达细胞株MCF-7/Twist,Western blotting法检测Twist表达;观察增殖状态;MTT法测阿霉素、紫杉醇、长春新碱和羟喜树碱对细胞株增殖活性的影响,分析稳定转染细胞株对药物的敏感性;应用RT-PCR及Western blotting方法,检测耐药相关糖蛋白P-gp和乳腺癌耐药蛋白BCRP转录水平和蛋白水平的变化。结果 G418筛选获得稳定表达Twist的细胞株,对阿霉素、紫杉醇、长春新碱和羟喜树碱具有明显耐药性,耐药相关分子P-gp和BCRP转录和表达明显升高。结论 Twist表达增强乳腺癌细胞的多药耐药性,多药耐药性相关分子的转录和表达升高与耐药性增强现象一致。

血管内皮生长因子C在人乳腺癌细胞株MCF-7及MCF-7/Adr中的表达

背景与目的:血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC,VEGF-C)是近期发现的血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)家族的新成员。研究发现VEGF-C可特异性作用于淋巴管内皮细胞,并在多种人类肿瘤中表达。为探索VEGF-C在肿瘤发生、发展中的作用,我们分别检测了VEGF-CmRNA和蛋白在人乳腺癌细胞株MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr中的表达。方法:根据VEGF-C基因序列,设计合成地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,运用原位杂交方法检测培养的细胞株MCF-7和MCF-7/Adr中VEGF-CmRNA的表达,并运用免疫组织化学方法检测两种细胞中VEGF-C蛋白的表达,实验中用缓冲液分别代替杂交液和一抗作阴性对照。结果:原位杂交法检测到MCF-7和MCF-7/Adr细胞的胞浆中有阳性蓝色颗粒,免疫组化检测发现两种细胞的胞浆中均有阳性棕黄色颗粒,而阴性对照细胞的胞浆中则均无阳性颗粒。结论:人乳腺癌细胞株MCF-7及其耐药株MCF-7/Adr细胞能够转录VEGF-CmRNA,并在其细胞浆中翻译合成相应的蛋白。