人肺腺癌亲代与耐顺铂细胞系耐药与凋亡相关基因表达差异及其相关性

目的 探讨人肺腺癌亲代与耐顺铂细胞系A549和A549DDP耐药及凋亡相关基因表达的差异 ,以及多药耐药的发病机制。方法 采用逆转录 PCR及免疫细胞化学方法检测A549和A549DDP细胞多药耐药相关蛋白 (MRP)、肺耐药蛋白 (LRP)、bcl 2及C erbB 2的表达水平。结果 逆转录 PCR结果显示 :A549细胞表达MRP、bcl 2及C erbB 2mRNA ,无LRPmRNA表达 ,A549DDP细胞亦表达MRP、bcl 2及C erbB 2mRNA ,且表达LRPmRNA ,耐药细胞MRP及C erbB 2mRNA表达水平较亲代显著增高 ,bcl 2mRNA表达水平与亲代无显著性差异 (P =0 731 ) ;A549DDP细胞血管生成因子及耐药相关基因mRNA表达水平较A549细胞显著增高 ,差异有显著性 (P =0 0 0 7)。免疫细胞化学结果显示 :亲代和耐药细胞bcl 2蛋白表达呈强阳性 ,亲代C erbB 2及LRP呈阴性 ,MRP轻度阳性 ,耐药细胞MRP蛋白呈中度阳性 ,C erbB 2及LRP轻度阳性。结论 A549细胞的原发耐药与耐药及凋亡相关基因MRP、C erbB 2和Bcl 2的异常表达和协同作用有关。A549DDP细胞MRP和C erbB 2的表达增强 ,且表达LRP ,可能是继发耐药的产生机制。

胃癌细胞系SGC7901耐阿霉素和顺铂细胞系的建立及其耐药可持续性的质控研究

目的建立胃癌耐药细胞模型,并进行耐药细胞耐药可持续性研究。方法以脉冲式诱导方法诱导胃癌耐阿霉素细胞SGC7901/ADR和胃癌耐顺铂细胞SGC7901/DDP。检测细胞的生长曲线和群体倍增时间,电镜观察细胞的超微结构,并进行了体外药物敏感性实验和细胞药物转运实验,Western blot检测耐药细胞内P-gp和MRP的表达,尤其是进行了耐药细胞的耐药可持续性的质控研究。结果耐药细胞的增殖能力比药敏细胞强(P<0.05);电镜下耐药细胞较药敏细胞表现为更多的核大核畸形及细胞膜间突触样联系和细胞间小管结构;体外药物敏感性实验和细胞药物转运实验显示耐药细胞的耐药性明显增强;而且耐药细胞中MRP和P-gp的表达均比药敏细胞SGC7901高;耐药可持续性的质控研究表明在不给与抗肿瘤药维持状况下细胞自第11代耐药性明显下降。结论成功构建了胃癌耐阿霉素细胞系SGC7901/ADR和耐顺铂细胞系SGC7901/DDP;对实验用耐药细胞系建议质控在9代以内以保证耐药细胞的耐药稳定性。