当归补血汤对感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后细胞凋亡的影响

目的探讨感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后干细胞凋亡的时程特点及当归补血汤的抗凋亡作用。方法分离胚胎大鼠Corti器的耳蜗干细胞进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,用Nestin免疫荧光法进行耳蜗干细胞鉴定。建立感音神经性聋大鼠模型,将其分为耳蜗干细胞移植组(45只)、当归补血汤干预组(45只)及对照组(35只),分别将耳蜗干细胞悬液、含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液和生理盐水移植入三组大鼠耳蜗鼓阶,于移植后1、3、5、10、15天采用原位末端标记法结合流式细胞仪及免疫荧光方法对三组动物干细胞凋亡情况进行定量分析。结果移植后1、3、5、10、15天耳蜗干细胞移植组的耳蜗干细胞凋亡率分别为27.84%、49.37%、44.78%、39.37%、34.82%,当归补血汤干预组分别为18.35%、26.92%、23.18%、21.38%、18.19%,细胞凋亡在移植后3～5天达到高峰;当归补血汤干预组各时间点凋亡率均明显低于耳蜗干细胞移植组(P<0.05)。结论感音神经性聋大鼠耳蜗干细胞移植后3～5天是干细胞凋亡的高峰期;当归补血汤具有抗移植耳蜗干细胞凋亡的作用。

归芪地黄汤干预对耳蜗干细胞治疗感音性耳聋的影响

背景:将中医中药与干细胞移植学科相结合,开辟了传统中药学在干细胞移植学科应用方面的新道路,希望可以采用中药干预的方法来提高耳蜗干细胞的存活比率和分化为毛细胞的比例。目的:观察归芪地黄汤干预对耳蜗干细胞治疗感音性耳聋的影响。方法:将感音性耳聋豚鼠分成耳蜗干细胞移植+中药干预组,干细胞移植组和空白对照组,分别向内耳耳蜗移植含有药物血清的耳蜗干细胞悬液,耳蜗干细胞悬液和生理盐水。于移植后7,28,56 d 3个时间点进行ABR检测和免疫荧光观测实验。结果与结论:(1)在耳蜗干细胞移植+中药干预组和干细胞移植组观测到Nestin阳性细胞和MyosinⅦA阳性细胞,耳蜗干细胞移植+中药干预组的Nestin阳性细胞和MyosinⅦA阳性细胞数量要多于干细胞移植组;(2)耳蜗干细胞移植+中药干预组和干细胞移植组ABR检测数值都下调,耳蜗干细胞移植+中药干预组豚鼠的听力恢复优于干细胞移植组;(3)结果表明,归芪地黄汤干预可以显著提高耳蜗干细胞的存活率和分化为毛细胞的比例。

当归补血汤对耳蜗干细胞鼓阶内移植治疗药物性感音神经性耳聋大鼠增效作用研究

目的:观察当归补血汤对耳蜗干细胞移植治疗感音神经性耳聋大鼠增效作用。方法:感音神经性耳聋大鼠分为耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组和空白对照组3组。体外培养耳蜗干细胞进行内耳移植,耳蜗干细胞移植组将耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,当归补血汤组将含有当归补血汤的耳蜗干细胞悬液移植入内耳耳蜗结构,空白对照组移植生理盐水。分别于术后1、3、6和12个月采用听觉脑干诱发电位方法检测模型大鼠的听力恢复情况,处死大鼠,通过免疫荧光染色方法观察移植的耳蜗干细胞在内耳存活、分化和迁移情况。结果:从E14大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化悬浮生长的Nestin阳性细胞团,Brdu表达阳性,说明是具有自我更新和增殖潜能的干细胞。免疫荧光检测发现在耳蜗干细胞移植组、当归补血汤组在移植针道两侧可见移植的干细胞,有些还迁移到基底膜区。存活的细胞部分呈My-osinⅦA阳性染色。与耳蜗干细胞移植组比较,当归补血汤组MyosinⅦA阳性染色细胞数量较多,差异有统计学意义(P<0.05)。听觉脑干诱发电位结果显示当归补血汤组的感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复情况较耳蜗干细胞移植组和对照组好,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经体外培养的耳蜗干细胞移植入内耳鼓阶后能够存活和迁移,并分化为内耳毛细胞;当归补血汤可以提高耳蜗干细胞分化为内耳毛细胞的比例,并促进感音神经性耳聋模型大鼠听力恢复。

白黎芦醇对耳蜗干细胞体外分化为毛细胞的诱导作用

目的:观察白藜芦醇对耳蜗干细胞体外诱导分化的影响作用。方法:分离新生大鼠Corti器的耳蜗干细胞,以白黎芦醇诱导分化后,采用Myosin ⅦA免疫荧光方法鉴定内耳毛细胞的数量。结果:白藜芦醇可使耳蜗干细胞诱导分化的内耳毛细胞数量明显增多。结论:白黎芦醇对耳蜗干细胞体外分化为内耳毛细胞有诱导作用。

干细胞移植治疗噪声性和药物性聋的比较实验研究

目的比较耳蜗干细胞移植治疗噪声性聋豚鼠和药物性聋豚鼠模型的效果。方法选用清洁级健康成年纯白红目豚鼠120只,建立噪声性聋模型耳蜗干细胞移植组、噪声性聋模型空白对照组、药物性聋模型耳蜗干细胞移植组、药物性聋模型空白对照组,每组30只;向噪声性聋模型耳蜗干细胞移植组和药物性聋模型耳蜗干细胞移植组耳蜗分别注入耳蜗干细胞悬液10μl,向噪声性聋模型空白对照组和药物性聋模型空白对照组耳蜗分别注入10μl生理盐水。于术后7、28、56d进行ABR检测并进行免疫荧光观测Nestin阳性细胞数和MyosinⅦA阳性细胞数。结果在噪声性聋和药物性聋耳蜗干细胞移植组的耳蜗鼓阶处观测到Nestin阳性细胞和MyosinⅦA阳性细胞,但噪声性聋干细胞移植组的Nestin阳性细胞和MyosinⅦA阳性细胞数量多于药物性聋干细胞移植组;耳蜗干细胞移植后噪声性聋和药物性聋组ABR反应阈均下降,但术后28天和56天噪声性聋干细胞移植组ABR阈值分别为52.61±5.14和40.39±4.59dB SPL,低于药物性聋干细胞移植组(分别为66.39±4.77和60.41±4.17dB SPL)。结论耳蜗干细胞移植对于噪声性聋豚鼠模型的治疗效果优于药物性聋豚鼠模型。