顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡

目的 探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法 对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果 连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和Corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。

豚鼠耳蜗Corti器外隧道的结构

目的观察豚鼠耳蜗Corti器外隧道的解剖特征。方法健康杂色豚鼠11只,共22耳,借助火棉胶切片(5只10耳)和扫描电镜(6只12耳)观察和分析豚鼠耳蜗Corti器外隧道的解剖。结果豚鼠耳蜗Corti器外隧道的内侧壁在耳蜗基底回和第一回由第三排外毛细胞和Deiter细胞的指状突起构成,外侧壁和顶壁由Hensen细胞构成。自耳蜗基底回逐渐向顶回,Deiter细胞的指状突起逐渐移向外侧,形成外隧道的外侧壁和顶壁。外隧道的内侧壁由第三排外毛细胞构成,Deiter细胞指突移向Hensen细胞构成外隧道的外侧壁和顶壁,外隧道腔隙逐渐缩小。第三、四回的外隧道完全被Deiter细胞所充填,Deiter细胞指突和Hensen细胞密切接触。结论豚鼠耳蜗Corti器外隧道的这种结构特征在研究Corti器的微细结构方面增加了新的认识。

正常豚鼠耳蜗Corti器钙调素的分布

正常豚鼠耳蜗Ｃｏｒｔｉ器钙调素的分布高下，王锦玲，刘乾初钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ）是一种多功能耐热小分子酸性钙结合蛋白，进化上十分保守，抗原性较弱，广泛存在于多种真核细胞中，并以Ｃａ￣（２＋）受体形式参与细胞中多种酶和许多钙依赖性生理过程...

耳蜗Corti器内部结构病变对听力的影响

目的从微观层面探究耳蜗病灶导致的Corti器内部结构病变对耳听觉功能的影响。方法基于Corti器内部结构的实验数据和几何关系建立Corti器有限元数值模型,通过变化耳蜗各结构的生物材料参数,模拟分析病变对内耳感音功能的影响。经过与实验测量数值的套图对比,验证了模型的正确性。结果耳蜗的宏观结构基底膜和微观结构静纤毛、外毛细胞病变都将导致听力响应曲线向高频移动,同时也都将导致基底膜的振幅减少。

新生SD大鼠G418耳蜗Corti器离体损伤模型的建立

目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损害,200μg/ml的终浓度,内外毛细胞均有不同程度损害,以外毛细胞为著。结论:G418可用于建立耳蜗Corti器离体损伤模型。

耳蜗Corti器及微血管肾上腺素能神经纤维的分布特点

目的 探讨耳蜗 Corti器及微血管肾上腺素能纤维的分布特点 .方法 采用免疫组化 ABC技术及针对肾上腺素能合成过程中不同酶的多克隆抗体 ,包括酪氨酸羟化酶(TH ) ,多巴胺β-羟化酶 (DBH)及苯乙醇胺 - N -甲基转移酶(PNMT) ,研究耳蜗 Corti器和蜗轴螺旋动脉及耳蜗微血管不同类型肾上腺素能神经的分布 .结果 蜗轴螺旋动脉及其放射状小动脉含有丰富的 TH免疫反应阳性的神经纤维 ,动脉近端 TH阳性纤维成致密的神经网 ,一些纵行的神经纤维聚集成神经束沿血管的长轴走行 ,但血管阳性纤维的数量及密度明显不同 .DBH阳性纤维的数量很少 ,未见 PNMT阳性纤维 .在耳蜗 Corti器 ,TH阳性的纤维分成两类 ,一类阳性纤维定位于内螺旋束 ,隧道螺旋束及隧道横贯纤维组成类似“铁轨样”结构 .在外毛细胞区偶可见 TH阳性的终末 ;另一类纤维沿耳蜗 Corti器的微血管走行 ,包绕血管形成致密的神经网 .Corti器微血管较少见到 DBH阳性的纤维 ,未见 PNMT阳性纤维 .结论 耳蜗微血管的肾上腺素能神经支配主要是多巴胺 ,而肾上腺素、去甲肾上腺素的作用甚微 .

新生小鼠耳蜗Corti器的体外培养与观察

目的建立新生昆明小鼠耳蜗Corti器体外培养的简便方法并观察耳蜗毛细胞的组织学形态。方法取生后3～5 d昆明小鼠耳蜗基底膜,平铺在胶原凝胶表面,然后在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察耳蜗毛细胞的生长情况。结果耳蜗基底膜经24、48 h和72 h培养后,内、外毛细胞均生长良好,其结构完整,纤毛束排列有序,无任何缺失。结论本培养方法简便有效,可用于耳蜗Corti器体外培养实验研究。

豚鼠耳蜗Corti器铺片方法改进与免疫荧光染色比较研究

目的提高本实验室豚鼠耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片的实验效率,为内耳研究探索一种更为快捷的免疫荧光染色方法。方法 15只成年Dunkin Hartley豚鼠注射过量1%戊巴比妥钠处死,断头取双侧耳蜗,右侧为对照组,采用常规耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片方法,左侧为实验组,采用减少了组织固定、免疫荧光染色一抗孵育及漂洗时间的改良耳蜗基底膜免疫荧光染色铺片方法,激光共聚焦扫描显微镜在20倍、40倍、63倍镜下观察并比较两组经荧光素标记的基底膜Corti器上的肌球蛋白7a或神经丝蛋白的表达情况。结果对照组耗时37.5小时,实验组耗时5.25小时。两种染色方法均能清楚显示肌球蛋白7a或神经丝蛋白的表达情况,成像效果未见明显差异。结论快速耳蜗基底膜铺片免疫荧光染色方法耗时短、可重复性好,值得在耳科学基础研究尤其是内耳形态研究领域推广。

基于有限元模型的圆窗激振与正常感声下耳蜗微观动态特性

为了确定传统基于基底膜位移的评价指标用于圆窗激振式人工中耳是否准确,基于沙鼠耳蜗微观扫描电镜图,建立了耳蜗Corti器三维有限元力学模型。通过与文献中的实验结果对比,对模型进行验证,最后,基于该模型,对比分析圆窗激振和正常感声下基底膜、内毛细胞纤毛、外毛细胞纤毛的动态特性。结果表明:在评价圆窗激振式人工中耳的听力补偿性能时,将基底膜的运动位移作为评价指标将高估其实际的听力补偿效果。

豚鼠上橄榄外侧核γ－氨基丁酸阳性神经元向耳蜗和耳蜗核的分支投射

为探讨豚鼠上橄榄外侧核内γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）阳性神经元是否同时支配同侧Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核，采用逆行追踪的方法，将Ｆａｓｔｂｌｕｅ（ＦＢ）和Ｄｉａｍｉｄｉｎｅ黄（ＤＹ）两种不同性质的荧光素分别注入耳蜗鼓阶及同侧耳蜗核，观察上橄榄外侧核内ＧＡＢＡ阳性神经元的分支投射。结果发现，同侧上橄榄外侧核内ＦＢ单标细胞占标记细胞的８０．８％；ＤＹ单标细胞占１２．４％；ＦＢ－ＤＹ双标细胞占６％；ＧＡＢＡ、ＦＢ、ＤＹ三标阳性细胞占０．７％。对侧上橄榄外侧核内ＦＢ、ＤＹ单标细胞均较少，未见双标细胞。结果表明，豚鼠上橄榄外侧核内有ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元向同侧的Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核并行投射，但数量较少，支配Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核的传出神经纤维，分别来自不同的听觉传出神经核团。

基于电镜图像的Corti器三维建模

目的探讨建立 Corti 器的三维可视化模型的方法,为进一步建立其力学模型打下基础。方法制备豚鼠 Corti 器标本并行扫描电镜和透射电镜观察。以 Corti 器电镜图像为参照标准,在三维建模软件3DStudio MAX 的支持下,结合多种高级建模方法,创建 Corti 器的三维数字模型。结果成功建立了 Corti 器三维可视化模型,该模型正确展示了 Corti 器三维组成结构及各结构之间的空间位置关系。结论本实验应用电镜图像建立 Corti 器的三维模型的方法是可行的,Corti 器三维模型为研究耳蜗机械力学提供了重要基础。(中国眼耳鼻喉科杂志,2007,7:144-146)

急性化脓性中耳炎豚鼠耳蜗形态和功能改变

对3只因听泡置管导致急性化脓性中耳炎发作的豚鼠进行了脑干诱发电位（ABR）测试和耳蜗Corti氏器扫描电镜观察。发现3只豚鼠患耳Corti氏器均有程度不等损害，ABR阈分别提高45、60和30dB。提承急性中耳炎可引起内耳形态和功能变化。文中对引起损害的机制进行了讨论。

谷氨酸在小鼠耳蜗中的定位

目的研究传入神经物质-谷氨酸在小鼠耳蜗Corti器中的表达。方法应用免疫组化技术简洁而又成功地在光镜下对小鼠游离耳蜗Corti器中谷氨酸进行定位。结果显示小鼠耳蜗内,外毛细胞染色阳性,染色颗粒细而均匀。克服了谷氨酸神经递质用传统常规前包埋染色技术电镜下不能显示的缺点。结论证实谷氨酸是毛细胞的传入性神经递质。

小鼠耳蜗毛细胞体外培养研究方法

目的建立耳蜗Corti器体外培养模型.方法取刚出生2～3天小鼠耳蜗,采用鼠尾胶表面平铺培养并结合荧光染色方法观察耳蜗毛细胞的生长情况.结果耳蜗基底膜经1～5天培养,内、外毛细胞和支持细胞生长良好,排列有序,无任何衰亡和缺损.结论耳蜗Corti器可以在体外培养环境存活一定时间并健康生长.

P物质、脑啡肽在豚鼠耳蜗的分布——免疫组织化学观察

本研究应用免疫组织化学方法系统地观察了P物质(SP)、亮氨酸脑啡肽(L-ENK)在豚鼠耳蜗的分布以及SP、L-ENK免疫反应阳性神经纤维与Corti's器毛细胞之间的关系,结果表明:SP的免疫反应活性(SP-IR)存在于耳蜗螺旋神经节的部分神经细胞及传入神经纤维中,在Corti's器的毛细胞下方亦可见SP免疫反应阳性纤维;L-ENK的免疫反应活性(ENK-IR)存在于耳蜗的传出神经纤维中。节内螺旋束、内螺旋束、隧道螺旋束、横贯纤维均含有大量的L-ENK免疫反应阳性纤维,Cort's器中的L-ENK免疫反应阳性终末与毛细胞之间具有密切接触,由此提示,SP可能为听觉初级传入神经递质之一;L-ENK作为传出神经递质或调质对听觉传入起调控作用。

耳蜗生后发育的实验研究

借助扫描电镜对不同年龄的小白鼠Corti器及毛细胞发育进行研究,探索哺乳动物耳蛹发育过程及主要规律。本实验测定了从新生到生后21天及成年鼠的发育情况,包括测量蜗管长度,沿蜗管五个不同部位毛细胞直径及这些细胞间距,并对这些解剖上的发育与功能成熟关系进行探讨。