微渗透压泵耳蜗灌注bFGF对庆大霉素所致豚鼠耳毒的拮抗作用

目的 应用微渗透压泵将碱性成纤维细胞因子 (bFGF)导入耳蜗 ,观察其对庆大霉素所致活体耳蜗毒性的拮抗作用。方法 豚鼠皮下注射庆大霉素造成耳毒性聋的模型。实验将bFGF以微渗透压泵导入实验组右耳蜗 ,对照组右耳以微渗透压泵导入等量PBS。用扫描电镜观察两组动物右耳毛细胞的损伤 ,同时比较其用药前后ABR听阈的改变。结果 对照组右耳的损伤明显重于实验组。

微泵耳蜗灌注碱性成纤维生长因子对庆大霉素致聋豚鼠的作用

目的 :应用微量渗透泵 (MOP)向豚鼠耳蜗灌注碱性成纤维生长因子 (bFGF) ,观察其对庆大霉素中毒所致耳聋的保护作用。方法 :10只豚鼠分成庆大霉素致耳聋组及正常组 ,于 2组豚鼠右耳耳蜗植入MOP灌注bFGF ,分别于灌注前 ,灌注后 1周、2周测ABR阈值 ,扫描电镜观察耳蜗组织形态。结果 :耳聋组在灌注bFGF后 1周、2周ABR阈值较灌注前降低 (P <0 .0 5 ) ,耳蜗毛细胞形态得以恢复 ;正常组ABR阈值及形态均无明显改变。结论 :MOP持续恒速耳蜗灌注bFGF对耳蜗中毒的毛细胞有修复作用 。

豚鼠耳蜗灌注的流速安全阈

行全耳蜗人工外淋巴灌注，观察不同灌注速度对蜗内电位的影响，并作耳蜗连续切片，观察内耳结构的形态变化。灌注速度分别为：５μｌ／ｍｉｎ，５０μｌ／ｍｉｎ，１００μｌ／ｍｉｎ，２５０μｌ／ｍｉｎ，５００μｌ／ｍｉｎ。当灌注速度为１００μｌ／ｍｉｎ时可使蜗内电位下降，但停灌后电位可恢复。而灌注速度进一步提高为２５０μｌ／ｍｉｎ以上后，蜗内电位即出现不可逆的下降。在灌注速度分别为５μｌ／ｍｉｎ，５０μｌ／ｍｉｎ和１００μｌ／ｍｉｎ时，连续切片观察未发现异常。在２５０μｌ／ｍｉｎ组中有１耳发现有前庭膜塌陷。在５００μｌ／ｍｉｎ组中发现３耳有前庭膜塌陷或破裂。人工外淋巴灌注速度不宜过快，在豚鼠耳所作试验提示，流速以不超过１００μｌ／ｍｉｎ为宜。

葛根素对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤时听功能和NF-к Bp65的影响

目的探讨葛根素在豚鼠椎基底动脉缺血/再灌注耳蜗损伤中的保护作用及分子机制。方法纯白雄性豚鼠32只随机分为4组:正常对照组(n=8)、缺血再灌注7d组(n=8)、生理盐水组(n=8)和用药组(n=8)。除正常对照组外的所有豚鼠均进行手术造模。用药组在缺血再灌注开始时,腹腔注射葛根素150mg/(kg·d),每日1次,连用6d。生理盐水组操作同用药组,但以等容量生理盐水代替葛根素。应用听觉脑干反应评价听功能。采用石蜡包埋的免疫组织化学技术,对各组近中轴位切片行NF-кBp65免疫组织化学染色。结果用药组ABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期明显缩短,阈值降低。正常对照组、缺血再灌注7d组、用药组与生理盐水对照组ABR各波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期和阈值比较差异有显著性(P<0.01)。正常对照组与用药组ABRⅢ、Ⅳ波潜伏期、Ⅰ～Ⅲ波间期和阈值比较差异无显著性(P>0.05)。用药组NF-кBp65表达与缺血再灌注7d组比较明显下调差异有显著性(P<0.01)。结论葛根素具有保护耳蜗缺血再灌注损伤的作用。其保护作用的机制可能与下调NF-кBp65表达表达有关。

泻火化瘀通窍法对感音性耳聋大鼠HMGB1/RAGE信号通路的影响

目的探讨泻火化瘀通窍法对高迁移率族蛋白B1(highy mobility group proteinboxl,HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(advanced glycation end product receptor,RAGE)介导的耳蜗缺血再灌注损伤(cochlea ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的作用效果及机制。方法36只健康SPF级SD大鼠,雌雄各半,平均体质量(220±20)g。采用随机数字表法将大鼠分为假手术组、模型组、泻火化瘀通窍低剂量组(12.5g/kg)、泻火化瘀通窍中剂量组(25.0g/kg)、泻火化瘀通窍高剂量组(37.5g/kg)和地塞米松组(20mg/kg),每组各6只。以血管阻断法建立CIRI大鼠模型,并给予相应药物干预。测定大鼠脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)阈值,苏木精-伊红染色观察大鼠耳蜗组织病变并定量评分,酶联免疫吸附法测定耳蜗组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量及活性,蛋白质印迹法检测大鼠耳蜗组织HMGB1、RAGE、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylation nuclear factor-κB p65,p-NF-κB p65)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)及活化caspase-3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠耳蜗毛细胞变形、缺损严重,苏木精-伊红半定量评分均显著增加(P<0.01),SOD、CAT活性含量均显著降低(P<0.01),而BAEP阈值、MDA含量均显著升高(P<0.01),HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、p-NF-κB p65、cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著增加(P<0.01);与模型组相比,泻火化瘀通窍各剂量组和地塞米松组大鼠的CAT活性含量均显著上升(P<0.01),泻火化瘀通窍中、高剂量组和地塞米松组大鼠的苏木精-伊红半定量评分、BAEP阈值、MDA含量、HMGB1和cleaved-caspase-3/caspase-3蛋白表达均显著降低(P<0.05),泻火化瘀通窍高剂量组和地塞米松组大鼠的RAGE、p-NF-κB p65、TNF-α、IL-1β蛋白表达均显著降低(P<0.05)。结论泻火化瘀通窍法对CIRI大鼠具有改善作用,其作用与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

针刺百会穴对内淋巴积水豚鼠听力及耳蜗血流灌注量的影响

目的:观察电针百会穴对内淋巴积水(EH)豚鼠听觉脑干诱发电位(ABR)、耳蜗电图(EcochG)及耳蜗血流灌注量(CoBF)的影响。方法:采用腹腔注射精氨酸加压素诱导EH豚鼠模型。造模组豚鼠100只随机分为模型组、电针穴位组(电针百会穴)、电针非穴位组(电针股部非穴位)、药物组(灌胃血管加压素拮抗剂OPC-41061)和针药联合组(电针百会穴+OPC-41061灌胃),每组20只。另设20只正常豚鼠为对照组。对照组和模型组豚鼠不予干预,其他各组分别进行相应干预。治疗28 d后,采用Navigator PRO听觉脑干诱发电位诊断系统检测豚鼠ABR和EcochG,采用激光多普勒血流仪检测CoBF。结果:①与对照组相比,模型组在各频率的ABR阈值均明显升高(P<0.05)。与模型组相比,电针穴位组在250、500、1 000、4 000、6 000、8 000 Hz频率下的ABR阈值均显著降低(P<0.05),电针非穴位组在4 000、6 000、8 000 Hz频率下的ABR阈值亦显著降低(P<0.05),药物组和针药联合组在各频率的ABR阈值均明显降低(P<0.05)。与电针穴位组相比,药物组在1 000和8 000 Hz频率的ABR阈值明显降低(P<0.05),针药联合组在500、1 000、4 000、8 000 Hz频率的ABR阈值明显降低(P<0.05)。针药联合组与药物组在各频率的ABR阈值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②在8 000 Hz频率下,模型组-SP/AP值较对照组显著升高(P<0.05);与模型组相比,电针穴位组、药物组和针药联合组的-SP/AP值显著降低(P<0.05);电针非穴位组的-SP/AP值明显高于电针穴位组(P<0.05)。电针穴位组与药物组、针药联合组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。③模型组豚鼠的CoBF较对照组明显降低(P<0.05);与模型组相比,电针穴位组和针药联合组CoBF显著升高(P<0.05)。电针穴位组与药物组、针药联合组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:电针百会穴可明显改善EH豚鼠的听力和电生理,其作用可能与增加CoBF有关。

水杨酸钠致耳蜗电生理改变

目的 :了解水杨酸钠对耳蜗功能的影响 ,探讨其可能的作用机制。方法 :采用水杨酸钠在活体豚鼠耳蜗进行灌注 ,同时监测豚鼠耳蜗电位中的复合动作电位 (CAP)和总合电位 (SP)的阈值及输入 输出曲线变化 ,对耳蜗功能进行评估。结果 :水杨酸钠可引起CAP和SP阈值同步改变 ,两者的变化呈一一对应关系。结论 :水杨酸钠主要作用于耳蜗外毛细胞 ,通过影响外毛细胞的能动作用而影响耳蜗功能。

两种豚鼠听毛细胞分离法比较

目的对耳蜗灌注法和酶解加机械分离法的结果进行比较，并观察单离毛细胞的形态和存活情况。方法用耳蜗灌注法及酶解加机械分离法分离豚鼠听毛细胞，并在倒置相差显微镜下观察单离毛细胞。结果用耳蜗灌注法，７只豚鼠，７耳，平均每耳可分离出长于３０μｍ的外毛细胞１７３个（１１６～３３９），短于３０μｍ的外毛细胞１３０个（５０～４４７），内毛细胞０～１０个。室温下短期培养６ｈ后，长于３０μｎ的外毛细胞有１２３个（５８～３３６），短于３０μｍ的外毛细胞有１０３个（２０～２９６）。用酶解加机械分离法，７只豚鼠，７耳，平均每耳可分离出长于３０μｍ的外毛细胞７２个（２１～１５２），而短于３０μｍ的外毛细胞及内毛细胞则未能分离出。室温下短期培养６ｈ后，长于３０μｍ的外毛细胞有３０个（８～５６）。毛细胞损伤表现为细胞扭曲，细胞顶部表皮板脱落。细胞变性表现为细胞膜不平，细胞水肿，随时间变化逐渐加重。死亡表现为细胞核不被中性红染色。结论用耳蜗灌注法分离毛细胞简便易行，能提供足够量的存活时间较长的外毛细胞，而用酶解加机械分离法分离的毛细胞数相对较少，存活时间相对较短。