强噪声对耳蜗组织化学影响的研究

本实验将豚鼠分为四组:一组为对照组,另三组为实验组。所有豚鼠实验前都作耳廓反射阈测试,分别暴露于150 dB、156 dB和162 dB声压级的强噪声场5分钟。噪声暴露毕,再作耳廓反射阈测试。然后斩头处死豚鼠,速取双侧颞骨,打开骨泡,暴露耳蜗,一耳作琥珀酸脱氢酶试验、一耳作糖原和核酸(RNA和DNA)试验。结果如下:150 dB组耳廓反射阈增高3.8 dB;156 dB组近半数豚鼠(12只耳)耳廓反射阈完全消失,其余(18只耳)耳廓反射阈增高35.6 dB;162 dB组几乎全部豚鼠(28只耳)耳廓反射阈完全消失。三组实验豚鼠琥珀酸脱氢酶和糖原都有类似变化。150dB组豚鼠耳蜗螺旋器毛细胞中,这两种物质较对照组轻度损失(++~+),而且从底部向顶部越加明显。156dB和162 dB组,各耳蜗圈螺旋器毛细胞琥珀酸脱氢酶和糖原,一致性明显损失(+~±)。三组豚鼠耳蜗螺旋器和螺旋神经节细胞核酸(RNA和DNA)都未见明显变化。本实验表明,随噪声声压级增高,听力损伤程度也越加严重。琥珀酸脱氢酶和糖原都是与能量代谢有密切关系的物质,因此可认为,噪声刺激的早期主要引起耳蜗能量代谢障碍。

胆红素对离体小鼠耳蜗组织毒性作用的研究

目的观察不同浓度胆红素对离体培养小鼠耳蜗组织的损伤效应。方法取新生5天的C57BL/6J小鼠,解剖获得耳蜗基底膜组织离体培养48小时,将耳蜗基底膜组织随机分为四组:对照组、25μmol/L胆红素组、50μmol/L胆红素组、100μmol/L胆红素组。实验组培养基按照分组浓度,加入相应胆红素溶液,对照组加入相应容积的生理盐水。所有标本继续培养24小时后终止,进行组织固定和免疫荧光染色,通过激光共聚焦显微镜观察,最后行统计学分析。结果不同浓度胆红素作用后,25μmol/L胆红素组中耳蜗神经纤维减少,50μmol/L胆红素组中神经纤维明显减少,100μmol/L胆红素组中神经纤维几乎完全消失,而各组内外毛细胞形态和数量无变化。各胆红素组的神经纤维数与对照组有统计学差异(P<0.05),且各胆红素组之间的神经纤维数有统计学差异(P<0.05)。结论胆红素对于离体培养的新生小鼠的耳蜗神经纤维的毒性作用呈浓度依赖性;在胆红素浓度不超过100μmol/L时,胆红素对于离体培养的新生小鼠的耳蜗组织的内毛细胞和外毛细胞不造成损害。

miRNA-183在噪声性耳聋大鼠耳蜗组织中的表达及临床意义

目的:探究噪声性耳聋大鼠耳蜗组织中miRNA-183表达情况,并分析其表达水平变化对噪声性耳聋发生发展的影响。方法:将50只SD大鼠分为两组,其中10只设为空白对照组,另40只建立噪声性耳聋动物模型,并随机分为噪声暴露1 d组(n=10)、噪声暴露7 d组(n=10)、噪声暴露14 d组(n=10)、噪声暴露28 d组(n=10)。处死各组大鼠取出耳蜗组织,应用生物显微镜观察耳蜗基底膜内外毛细胞排列情况,并应用RT-PCR法检测miRNA-183表达水平,比较各组大鼠耳蜗基底膜镜检结果及miRNA-183表达差异。结果:在生物显微镜下可见,空白对照组大鼠耳蜗基底膜的内毛、外毛细胞列整齐,而噪声暴露1 d组、噪声暴露7 d组、噪声暴露14 d组、噪声暴露28 d组的外毛细胞排列均紊乱。Tamhane事后检验显示,外毛细胞缺失率随噪声暴露时间延长而显著升高(P<0.05)。与空白对照组相比,噪声暴露1 d组、噪声暴露7 d组、噪声暴露14 d组、噪声暴露28 d组的miRNA-183相对表达量均显著降低(均P<0.05)。结论:miRNA-183在噪声性耳聋大鼠耳蜗组织中呈低表达,miRNA-183表达量下调可能会促进噪声性耳聋发生发展,而且对耳蜗毛细胞损伤修复评估具有一定的临床意义。

促红细胞生成素对老年性耳聋小鼠血清和耳蜗组织中IL-6和IL-17表达的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对老年性耳聋小鼠血清和耳蜗组织中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-17(IL-17)表达的影响。方法:使用SPF级雄性5周龄小鼠48只。其中12只为空白对照组(CK组),36只行老年性耳聋的造模后,分为EPO干预组(EPO组)、生理盐水干预组(NS组)和对照组(C组)。EPO组应用EPO共8周,NS组应用生理盐水8周,对照组不进行任何处理。应用免疫组化法检测各组小鼠耳蜗组织中IL-6和IL-17的表达,应用ELISA法检测各组小鼠血清中IL-6和IL-17的表达,应用实时荧光定量PCR法检测各组耳蜗组织中IL-6 mRNA和IL-17 mRNA的表达水平。结果:免疫组化结果显示:C组和NS组IL-6和IL-17的阳性率明显高于CK组,EPO组IL-6和IL-17的阳性率明显低于C组和NS组。ELISA结果显示:C组和NS组血清中IL-6和IL-17的表达量明显高于CK组,EPO组IL-6和IL-17的表达量明显低于C组和NS组。实时荧光定量PCR结果显示:C组和NS组耳蜗组织中IL-6 mRNA和IL-17 mRNA的表达量明显高于CK组,EPO组IL-6 mRNA和IL-17 mRNA的表达量明显低于C组和NS组。结论:EPO可以减少老年性耳聋小鼠模型血清和耳蜗组织中IL-6和IL-17的表达,减少局部的炎症反应,对延缓病变的进展及促进病变恢复可能有一定价值。

耳复康口服液对豚鼠耳聋模型血清中SOD、MDA含量及耳蜗组织形态的影响

目的:观察耳复康口服液对庆大霉素造成豚鼠药物性耳聋模型血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量及耳蜗组织形态的影响。方法:96只豚鼠随机分为正常对照组,模型组,耳聋左慈丸组,耳复康口服液高剂量组、中剂量组、低剂量组。除正常对照组每天肌肉注射生理盐水2 mL·(kg·d)^(-1)外,其余各组豚鼠按80 mg·(kg·d)^(-1)每天注射庆大霉素,同时给药组灌胃相对应的药物,连续14 d,第15天时每只豚鼠腹主动脉取血,测血清指标,并断头处死,取耳蜗标本。结果:与模型组比较,耳复康口服液各剂量可使豚鼠血清中SOD活力显著升高(P<0.01,P<0.05),MDA水平显著降低(P<0.01)。耳复康口服液各剂量可显著减轻豚鼠耳蜗组织形态病理变化。结论:耳复康口服液可抑制耳聋模型豚鼠氧化应激损伤,预防耳蜗基底膜毛细胞凋亡。

东南大学附属中大医院:揭示耳蜗组织细胞外囊泡在耳蜗发育和听力形成中发挥着重要的生物学功能

本刊讯(通讯员 程守勤)2月28日, 东南大学附属中大医院耳鼻咽喉-头颈外科柴人杰教授团队在Cell Mol Life Sci上在线发表了题为"Characterization of the microRNA transcriptomes and proteomics of cochlear tissue-derived small extracellular vesicles from mice of different ages after birth"的研究论文。研究中, 提出了一种分离耳蜗组织小的细胞外囊泡(small extracellular vesicles, sEVs)的方法, 并且探究了在耳蜗发育过程中耳蜗组织sEVs发挥的生物学功能。柴人杰教授博士生江佩、马翔宇为本论文第一作者, 柴人杰教授、张莎莎副研究员和东南大学生物科学与医学工程学院陶纬国教授为本论文通信作者。

耳蜗琥珀酸脱氢酶的组织化学观察

电生理实验表明血管栓子和窒息等缺氧,内耳神经动作电位(AP),内淋巴电位(EP)和耳蜗微音器电位(CM)都很快消失或下降,这主要由于维持这些生理特性的内耳有氧能量代谢丧失所致,说明内耳重要的听力和前庭功能与这种氧化还原代谢过程有密切关系^([1])。内耳氧化还原反应又是由氧化还原酶催化进行的,因此,研究此种酶,对感音性聋发病机制的探讨;治疗药物对内耳组织的作用;寻找有效的治聋药物都有意义。

清肝通窍汤对突发性耳聋豚鼠听力及耳蜗形态学影响的研究

目的:观察清肝通窍汤对突发性耳聋豚鼠听力及耳蜗形态学的影响。方法:以噪音刺激加肾上腺素皮下注射,造成突发性耳聋豚鼠模型,以清肝通窍汤治疗,并用血府逐瘀口服液为阳性对照组观察各组豚鼠的听力及耳蜗形态学变化。结果:造模后豚鼠ABR反应阈明显提高,耳蜗外毛细胞出现不同程度的破坏。清肝通窍汤能够降低其阈值,减轻毛细胞坏死、基底膜及螺旋器的增厚程度。结论:清肝通窍汤可通过改善受损的耳蜗组织病理学改变,达到治疗的目的。

耳蜗半薄切片细胞凋亡检测

目的尝试在耳蜗半薄切片上用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡。方法基因敲除Smad5小鼠耳蜗,分别作常规石蜡切片和环氧树脂包埋的半薄切片,用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡。结果在半薄切片上Smad5基因敲除小鼠,耳蜗内有大量的凋亡细胞产生,主要集中在螺旋神经节细胞、血管纹上的细胞,以及基底膜上的间皮细胞等,而且能够更清楚的显示凋亡的毛细胞。而在石蜡切片上只在螺旋神经节细胞、血管纹上的细胞,以及基底膜上的间皮细胞检出凋亡细胞,但是毛细胞没有凋亡细胞的检出。结论用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡半薄切片明显好于石蜡切片。

川芎嗪对药物性聋大鼠自噬相关蛋白表达水平影响

目的 通过观察川芎嗪对顺铂诱导大鼠耳蜗组织中自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和P62表达水平的影响,探讨川芎嗪对药物所致耳聋的大鼠耳蜗毛细胞自噬的干预及其作用机制。方法 选择110只健壮的听力正常的SD大鼠常规适应性养殖7 d后,将其分为2组,其中模型组(n=65)在腹腔内注入顺铂,对照组(n=45)在腹腔内注射相同计量的生理盐水。持续输注5 d后,经模式评估(每组各取5只大鼠)后,对照组随机分配为正常对照组和川芎嗪对照组各20只。模型组随机分配为模型对照组(n=20)、川芎嗪治疗组(n=20)和3-MA组(n=20),腹腔注射同等计量药剂,连续注射7 d。实验采用免疫组化和Western-blot的方法,观察实验中大鼠耳蜗组织中自噬蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ和P62表达水平的变化。结果 与3-MA组比较,空白对照组和川芎嗪对照组中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值略微上升(P<0.05);与空白对照组耳蜗组织中P62蛋白表达水平比较,模型对照组和川芎嗪治疗组蛋白表达水平下降(P<0.01);与模型对照组耳蜗组织中P62蛋白表达水平比较,川芎嗪治疗组蛋白表达水平下降,3-MA组耳蜗组织中蛋白表达水平上升,差异均具有统计学意义(P<0.01);与空白对照组耳蜗组织中LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达水平比较,模型对照组和川芎嗪治疗组蛋白表达水平上升,差异均具有统计学意义(P<0.01);与模型对照组耳蜗组织中LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达水平比较,川芎嗪治疗组蛋白表达水平上升,而3-MA组蛋白表达水平下降,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 川芎嗪能够上调顺铂所致药物性聋大鼠耳蜗组织中的自噬蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的表达,下调自噬蛋白P62的表达,促进耳蜗保护性自噬的发生,从而抑制顺铂诱导的听力损伤作用。

耳复康口服液对顺铂致豚鼠耳聋的影响

目的探究耳复康口服液对顺铂所致豚鼠耳聋的影响。方法腹腔注射顺铂注射液4mg/kg致豚鼠耳聋,造模成功后,将豚鼠随机分为6组,每组12只。除空白组及模型组外,其余各组给予相应药物,耳聋左慈丸组给予耳聋左慈丸2.7g/kg,耳复康大、中、小剂量组给予耳复康口服液18、9、4.5ml/kg,1次/d,持续给药14d。观察豚鼠听觉耳动反射,检测血清中SOD、MDA,观察耳蜗组织病理切片。结果与空白组比较,模型组动物耳廓反射显著减弱(P<0.01),说明模型制作成功。与模型组相比,耳复康大、中、小剂量均可显著改善顺铂致豚鼠听觉耳动反射情况(P<0.01);耳复康大、中剂量可显著改善豚鼠听力总反应能量,升高血清SOD水平,降低MDA水平(P<0.01),耳复康小剂量可明显改善豚鼠听力总反应能量、升高SOD水平,降低MDA水平(P<0.05),改善耳蜗病理组织。结论耳复康口服液能对抗顺铂所致豚鼠耳聋的情况。

地塞米松经鼓室给药对豚鼠耳蜗结构和功能的影响

目的评价地塞米松经鼓室给药途径对豚鼠耳蜗结构与功能的影响。方法45只豚鼠利用随机数字表法被分为3组,正常组、生理盐水经鼓室给药组、地塞米松经鼓室给药组,每组15只。利用听性脑干反应(auditorybrainstemresponse,ABR)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)活力测定、耳蜗组织中一氧化氮(nitricoxide,NO)含量测定、耳蜗铺片从形态与功能评价地塞米松经鼓室给药时对豚鼠耳蜗结构与功能的影响。结果3组动物ABR波形Ⅲ波阈值差异无统计学意义(F=0.5,P=0.75);3组动物SOD活性差异无统计学意义(F=2.45,P=0.96);3组动物NO含量差异无统计学意义(F=3.01,P=0.83);3组耳蜗坏死毛细胞数目相比差异无统计学意义(F=0.93,P=0.45)。结论地塞米松经鼓室给药没有对耳蜗造成结构与功能的影响。

老年聋研究在衰老进程中内源性病因对听觉损伤的研究及延缓老年聋的探索

随着我国人口老龄化的进展,在老年聋者日益增加的状况下、探索延缓老年聋的发生与发展具有现实意义与实用价值。本研究重点观察。

高压氧治疗在临床的应用近况

高压氧（HBO）于本世纪30年代由英国人开始应用于临床,获得较好治疗效果,此后在荷兰、美国、日本、加拿大、苏联和澳大利亚等广泛利用.我国于50年代末至60年代初始对HBO研究与应用.HBO能短时间内提高机体的HbO2量,改善组织缺O状态.作为临床治疗方法之一,兹将近年来有关HBO治疗概况作一综述.

关于噪声性听力损失几个问题概述

噪声是一种重要的“能量污染”,它对作业工人最主要的危害是导致噪声性听力损失(Noise Induced Heariog Loss,简称NIHL),多年来,学者们对NIHL进行了大量的调查研究,积累了不少资料,限于篇幅,本文试择如下几个问题作一概述。

内皮素在噪声性内耳损伤过程中的作用

目的研究噪声性内耳损伤过程中耳蜗微循环的病理变化以及内皮素(endothelin,ET)在这一病理过程中的作用及意义。方法30只大鼠按电脑产生随机数字法分为5组:对照组、噪声暴露(115dB白噪声每天8h)1、4、8和15d组。分别用扫描电镜观察毛细胞的形态,血管纹铺片观察耳蜗微循环的状态,放射免疫方法检测血浆ET含量,免疫组化染色观察ET1、ETA、ETB的分布。结果噪声4、8、15d组出现了血管纹明显缺血,外毛细胞形态异常。血浆ET于4d组出现暂时性升高。ET1于耳蜗组织中有广泛的阳性表达,噪声暴露前后差异无统计学意义;ETA主要分布于血管纹中间细胞与微血管壁周围的细胞,对照组与1d组表达呈弱阳性(+),噪声4、8、15d组表达呈强阳性(+++)。ETB主要分布于血管纹毛细血管内皮细胞,其变化趋势与ETA相似。结论噪声性内耳损伤过程中出现了明显的耳蜗微循环障碍,同时大鼠耳蜗组织的ET系统活性增高,二者在时间上有明显的一致性。推测噪声所致的耳蜗微循环障碍过程中ET起了重要的介导作用。

听力学

891485 大白鼠听皮质脑组织移植初步研究(移植组织的细胞构筑和纤维联系)/朱新安…∥新疆医学院学报.-1989,12(1).-4～9 取Wistar大白鼠15d胚胎听皮质植入到成年受体脑相应皮质的预制脑腔中。在受体动物脑内存活4～6个月后,检查结果表明移植组织的成活率达78％。移植组织内未见细胞分层,细胞呈“团簇”状排列。