APE/Ref1在H_2O_2诱导耳蜗螺旋神经节细胞氧化损伤过程中的表达

目的研究氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor1,APE/Ref-1)在过氧化氢(H2O2)诱导耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGCs)氧化损伤过程中的表达。方法原代培养离体大鼠SGCs,采用免疫荧光和Western blot方法检测APE/Ref-1在H2O2诱导SGCs氧化损伤过程中的表达。台盼蓝染色法计算SGCs氧化损伤过程中的死亡率。结果APE/Ref-1在体外正常培养SGCs细胞质和细胞核均有表达,细胞核较强。H2O2浓度≥60μmol/L时,SGCs死亡率显著升高,APE/Ref-1在细胞核表达明显减弱,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论APE/Ref-1在氧化环境下SGCs细胞核表达减少,细胞死亡率升高,提示氧化环境下细胞活性降低可能与APE/Ref-1表达减少有关。

耳蜗螺旋神经节细胞在声损伤中的改变

耳蜗螺旋神经节细胞是听觉传入的初级神经元,与听觉信息的传输过程密切相关。噪声可造成耳蜗螺旋神经节细胞的损伤。本文就噪声引起螺旋神经节细胞的损伤机理、预防研究等进行综述。

耳蜗螺旋神经节细胞的电生理实验研究现状

耳蜗螺旋神经节细胞 (spiralgaaglioncell,SGC) ,可将毛细胞的信号传向听觉中枢 ,在听觉信息的传导中起着极其重要的作用。目前 ,应用全细胞记录膜片钳技术 ,证实了SGC细胞膜上可表达多种离子通道 ,如电压门控离子通道 ,ATP控制的离子通道 ,神经递质受体介导的离子通道等 ,而各种病理状态下的SGC均伴有某些特定离子通道的电变化。对这些电变化的研究 ,将为我们在细胞和分子水平上诊断和治疗许多由内耳疾病所导致的耳聋和听力障碍提供可能。

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞Ih电流的研究

目的了解小鼠耳蜗螺旋神经节细胞超极化激活阳离子通道电流(Ih电流)的基本电生理学特性。方法应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的阻断剂,记录Ih电流。结果实验记录到了Ih电流,对BaCl2不敏感,但可被5 mM CsCl抑制,冲洗后电流恢复,符合Ih电流的药理学特点,其反转电位为-40.5±7.2 mv,二分之一最大活化电压(V1/2)为-103.3 mv,斜率(K)为10.5;在-160 mv钳制电压条件下其活化过程符合二次幂方程,时间常数分别为66.2 ms和403.7 ms,不同部位之间Ih电流的活化时间常数无明显差异(P>0.05)。结论Ih电流对不同部位耳蜗螺旋神经节细胞完成其功能所起的作用可能是相似的,但需要进一步的深入研究。

神经营养因子-3和胶质细胞衍生的神经营养因子共转导对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用

目的 探讨新型的病毒载体 (HSV Amplicon)介导的神经营养因子 3(NT 3)和胶质细胞衍生的神经营养因子 (GDNF)共同表达 ,对耳蜗螺旋神经节细胞 (SGNC)的保护作用。方法 构建能够在独自的转录控制条件下 ,同时表达NT 3和GDNF的HSV Amplicon重组体 (HSVnt 3myc/gdnf)。包装后 ,转导体外培养的内耳细胞 (MOI =1) ,4 8h后分别测定培养基中NT 3和GDNF的含量。建立顺铂 (DDP)致聋的小鼠动物模型 ,2 4只实验小鼠被分成 3组 ,经鼠尾静脉隔日注射DDP两次 ,8mg/kg ,4 8h后再分别经圆窗将 10 μlHSVnt 3myc/ gdnf、HSVnt 3myc/lac和HSVlac病毒悬液注入鼓阶 ,饲养 4周后 ,取出耳蜗 ,采用NIH软件分析系统 ,定量分析耳蜗内SGNC的总数。结果 ELISA显示HSVnt 3myc/gdnf转导的内耳细胞培养基中 ,NT 3的含量达 11 4 4 μg/ml,而GDNF的含量达 1 79ng/ml,与对照组比较 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。在DDP致聋的小鼠模型中 ,定向转染HSVnt 3myc/ gdnf、HSVnt 3myc/lac和HSVlac的耳蜗平均SGNC存活率分别为 88%、77%和2 2 % ,各组间差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论 HSV Amplicon介导的NT 3/GDNF共同表达 ,可以刺激SGNC分泌NT 3和GDNF ,有效拮抗耳毒性药物所致的SGNC损伤 ,提高SGNC的残留数量 ,促进SGNC突起的再生。

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电生理学特性的研究

目的:应用膜片钳技术记录小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的全细胞电流,了解电压依赖性离子通道的基本电生理学特性,并比较耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异。方法:应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的电极内液及阻断剂,在不同的刺激参数下记录耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的电压依赖性离子通道电流,并进行分析比较。结果:实验记录到了内向的钠电流、延迟整流钾电流、超极化激活内向阳离子通道电流及瞬时外向钾电流,并发现耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流的电生理学特性具有显著性差异(P<0.05)。结论:实验记录到的各种离子电流数据表明耳蜗螺旋神经节细胞具有完成动作电位的形成、传导并对其功能进行调节的离子通道基础;耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异有助于听觉的形成过程。

豚鼠螺旋神经节细胞中钙磷脂结合蛋白Ⅵ表达及意义

目的钙离子在耳蜗功能中具有重要作用。本实验探讨与钙离子结合蛋白相关annexin家族中重要成员annexinⅥ在螺旋神经节细胞中的表达和意义。方法用原位杂交的方法检测正常和经过倍频窄带噪声刺激6小时的豚鼠基底膜铺片和石蜡包埋中轴切片中annexinⅥmRNA表达,所选用的探针为经过FITC标记的寡核苷酸。结果在正常未经处理的和接受噪声刺激的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中均可见annexinⅥmRNA表达。接受噪声刺激的豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的染色明显较正常豚鼠强烈。结论annexinⅥ参于内耳的生理活动,短期的噪声刺激后annexinⅥ在螺旋神经节细胞中表达增高。

S100B蛋白在C57/BL6J小鼠螺旋神经节细胞内的表达

目的研究S100B蛋白在C57/BL6J小鼠螺旋神经节细胞内的表达,探讨其在老年性聋发病中的作用。方法将40只C57/BL6J小鼠分成2月龄和12月龄组,每组20只,完成ABR检测后,取每只小鼠内眦静脉血0.8ml,采用ELISA法检测小鼠血清中S100B的含量,HE染色观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞形态,免疫组化检测螺旋神经节细胞内S100B蛋白表达。结果 2、12月龄组小鼠平均ABR阈值分别为20±5、55±5dB SPL,前者低于后者(P<0.05);血清中S100B含量分别为0.255±0.032、0.869±0.045μl/g,前者低于后者(P<0.05);S100B蛋白在两组小鼠螺旋神经节细胞均有表达,表达部位和密度不同,2月龄小鼠主要分布在胞膜和胞浆,12月龄小鼠则胞核见大量表达,2、12月龄小鼠S100B表达光密度值(IOD)分别为1.106±0.030、3.558±0.05,前者低于后者(P<0.05)。结论 12月龄C57/BL6J小鼠听功能符合老年性聋改变,其体内血清中S100B含量比2月龄小鼠增高,耳蜗螺旋神经节细胞内S100B蛋白表达较2月龄小鼠增多,推测S100B蛋白可能参与老年性聋的发病过程。

电刺激下听神经兴奋性研究

本文主要介绍近年来电刺激听神经兴奋性研究进展,阐述了电刺激与声刺激听神经兴奋性的异同,电刺激下影响听神经兴奋性因素和刺激对于耳蜗螺旋神经节细胞的影响。

氧自由基与氨基糖苷类抗生素致听觉损害的相关性研究

目的:探讨氨基糖苷类抗生素导致小鼠耳蜗螺旋神经节细胞毒性作用的机理。方法:细胞毒性分析采用MTT法检测庆大霉素对耳蜗螺旋神经节细胞的毒性作用,用紫外分光光度法分别测定各实验组耳蜗螺旋神经节细胞总超氧化物歧化酶活性,谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛含量。结果:庆大霉素(5 0mg/kg及以上浓度)对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞具有显著毒性作用P <0 . 0 1,并呈浓度依赖性。它能显著降低耳蜗螺旋神经节细胞中总超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性P <0 . 0 1,使丙二醛含量升高P <0. 0 1。结论:在氨基糖苷类抗生素致内耳神经细胞毒性过程中,氧自由基和细胞脂质过氧化反应发挥了重要的作用。

α-硫辛酸对脑震荡后听功能的保护作用

有学者报道脑震荡后患者遗留听功能障碍占脑震荡后遗症的23．2％，仅次于头晕、头痛，其病理表现为耳蜗微循环障碍、突触损伤等，脑震荡对听功能的损伤已逐渐引起耳鼻咽喉头颈外科医师的关注。路虹等发现豚鼠脑震荡伤后可以引起畸变产物耳声发射（DPOAE）、听性脑干反应（ABR）的异常和耳蜗螺旋神经节细胞的损伤，说明脑震荡伤后一定程度的听力障碍不仅与耳蜗受损有关，还与螺旋神经节细胞的病理改变有关。