双黄连注射剂及参麦注射液类过敏反应的剂量相关性研究

目的研究双黄连注射剂及参麦注射液类过敏反应的发生及其与给药剂量的相关性。方法首先进行双黄连注射剂及参麦注射液致敏剂量考察,将64只ICR雄性小鼠分为对照Ⅰ组、阳性Ⅰ组及双黄连组(低、中、高组)、参麦组(低、中、高组),每组8只。确定致敏剂量后进行类过敏反应验证实验,分为对照Ⅱ组、阳性Ⅱ组、双黄连高组、参麦高组,每组16只,共64只。分别于10、30 min两个时间点采血,对各组进行检测。对照组小鼠一次性尾静脉注射生理盐水,阳性组小鼠一次性尾静脉注射Compound48/80试液,药物组一次性尾静脉注射相应剂量的药物,其中64只剂量考察ICR小鼠对照药及受试药含0.4%伊文思蓝。以小鼠全身类过敏反应行为学表现、耳郭蓝染反应率为评分标准,判断类过敏反应程度。类过敏反应各组小鼠眼眶采血,通过ELISA法检测血浆中组胺浓度,并进一步研究组胺浓度与小鼠类过敏反应的相关性。结果对照Ⅰ组个别小鼠有竖毛现象;阳性Ⅰ组小鼠以不安宁、步态不稳、排粪等症状为主,与对照Ⅰ组相比,行为学评分升高(P<0.05);双黄连低、中、高组小鼠以排粪、步态不稳等症状为主,与对照Ⅰ组相比,行为学评分升高(P<0.05);参麦高组小鼠以搔鼻、竖毛、不安宁等症状为主,与对照Ⅰ组相比,行为学评分升高(P<0.05)。对照Ⅰ组双耳蓝染评分低于阳性Ⅰ组,双黄连低、中、高组,参麦高组(P<0.05)。选取双黄连高组(1293 mg·kg^(-1))及参麦高组(18.0 mL·kg^(-1))建立两种中药注射剂的类过敏反应模型。给药后10 min,与对照Ⅱ组比较,阳性Ⅱ组、双黄连高组血浆中组胺浓度升高(P<0.05)。与给药10 min后阳性Ⅱ组比较,给药30 min后阳性Ⅱ组组胺浓度降低(P<0.05)。组胺增高率集中在给药后30 min内。结论小鼠的行为学及耳郭蓝染指标表明,随给药剂量的增加,小鼠类过敏反应级别越高,但行为学评分与耳郭蓝染评分类过敏反应级别结果存在不一致的现象,其中小鼠的类过敏反应等级越高伴随着小鼠自发性活动减少。

基于RBL-2H3细胞的复杂基质生化药类过敏反应评估及体内外相关性评价

目的 建立适宜的细胞模型对复杂基质生化药骨肽类注射剂和垂体后叶注射剂类过敏反应风险进行评估,并与类过敏反应体内评价模型实验结果的相关性进行比较。方法 采用RBL-2H3细胞脱颗粒实验,选择β-氨基己糖苷酶作为适宜的评价指标以评估骨肽类注射剂和垂体后叶注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响;采用实验室已建立的类过敏反应体内评价模型小鼠耳郭蓝染实验,以蓝染率及伊文思蓝升高率为指标评价两种复杂基质生化药注射剂体内类过敏反应风险的相关性。结果 骨肽类注射剂可诱导β-氨基己糖苷酶的释放率增加,与阴性对照组相比差异存在统计学意义(P <0.01),垂体后叶注射剂不可诱导β-氨基己糖苷酶的释放。小鼠耳郭蓝染实验高剂量组中,复方骨肽注射液和骨肽注射液为临床等效剂量的6.67、10倍,类过敏反应阳性率分别为100%、66.7%;随着剂量的降低,复方骨肽注射液和骨肽注射液为临床等效剂量的1.67、2倍时,类过敏反应均判定为阴性,垂体后叶注射剂类过敏反应均为阴性,与体外结果一致。结论通过结合RBL-2H3细胞脱颗粒模型与小鼠耳郭蓝染模型可对药物类过敏反应风险进行评估和筛查,同时也可为复杂基质类生化药类过敏反应物质基础及机制的研究评价提供参考和手段。