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无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者的预防作用研究 被引量:7
1
作者 徐苗 罗永艾 +3 位作者 陈保文 沈小兵 苏城 王国治 《药品评价》 CAS 2006年第2期102-104,共3页
目的初步探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者的预防作用。方法1.动物实验:将结核杆菌感染的豚鼠随机分为不同剂量的无细胞耻垢分枝杆菌疫苗组(A组:7.0μg/次,B组:35.0μg/次)和阴性对照组(C组),观察疫苗对豚鼠PPD皮肤反应、病... 目的初步探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者的预防作用。方法1.动物实验:将结核杆菌感染的豚鼠随机分为不同剂量的无细胞耻垢分枝杆菌疫苗组(A组:7.0μg/次,B组:35.0μg/次)和阴性对照组(C组),观察疫苗对豚鼠PPD皮肤反应、病变指数和活菌负荷的影响。2.人体试验:将31名PPD皮试强阳性者随机分为不同剂量的无细胞耻垢分枝杆菌疫苗组(D组:8.7μg/次、E组:17.5μg/次、F组:35.0μg/次),观察受试者注射疫苗前后PPD皮肤反应情况。结果1.动物实验:A、B、C组豚鼠PPD皮肤反应强度依次为(9.87±3.36、7.04±3.09、12.67±1.47)mm,A组、B组和C组比较,均有极显著性差异(P<0.01);A、B、C组豚鼠病变指数依次为34.6±13.7、29.6±12.3、49.6±16.7,A组、B组和C组比较,均有显著性差异(P<0.05);A、B、C组豚鼠脾脏分离的结核杆菌对数值依次为4.32±1.58、4.00±1.39、4.94±0.41,B组和C组相比有显著性差异(P<0.05)。2.人体实验:D、E、F组受试者注射疫苗前PPD皮试结果依次为(36.1±4.5、34.0±3.6、33.5±3.1)mm,注射疫苗后PPD皮试结果依次为(20.6±0.6、16.0±1.6、17.82±1.2)mm,各组注射疫苗前后PPD皮试结果比较均有显著性差异(P<0.05)。结论无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对结核杆菌感染者有较好的预防效果。 展开更多
关键词 结核病 预防和控制 耻垢分枝杆菌疫苗/治疗应用 疫苗 无细胞
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无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的Ⅰ期临床研究 被引量:10
2
作者 叶隆昌 陈保文 +12 位作者 朱永东 徐苗 刘林飞 沈小兵 左于会 苏城 王兆军 殷玉和 汪华 马玉杰 张远涛 王国治 许卫国 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期565-568,共4页
目的:通过Ⅰ期临床研究探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(M.S疫苗)的人群安全性和耐受性,并初步观察该疫苗对结核病高危人群皮试反应强度的影响。方法:给55例健康志愿者注射不同剂量的疫苗(8.7,17.5和35.0μg),每例注射6次,每2周注射1次。通... 目的:通过Ⅰ期临床研究探讨无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(M.S疫苗)的人群安全性和耐受性,并初步观察该疫苗对结核病高危人群皮试反应强度的影响。方法:给55例健康志愿者注射不同剂量的疫苗(8.7,17.5和35.0μg),每例注射6次,每2周注射1次。通过对受试者的随访、心率和血压测试、血液常规、尿液常规、肝功能、胸部X-片以及肝、胆、脾、胰的B超检查以及PPD皮肤试验,评估M.S疫苗的不良反应,并比较疫苗注射前后PPD反应强度的变化。结果:在55例、330例次M.S疫苗注射过程中,发生14例、17例次的轻度不良反应,包括局部疼痛、淋巴结肿大、发热、局部硬结、心慌、皮疹和乏力,轻度不良反应总发生率为25.5%(14/55),未发生中度及重度不良反应;PPD皮试强阳性者经不同剂量M.S疫苗的注射,PPD皮试反应强度均显著降低(P<0.05)。结论:M.S疫苗具有较高安全性,并可显著降低结核病高危人群PPD皮试反应的强度。 展开更多
关键词 分枝杆菌 疫苗 Ⅰ期临床研究
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耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠巨噬细胞产生一氧化氮的影响 被引量:3
3
作者 徐苗 陈保文 +2 位作者 沈小兵 苏城 王国治 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期410-412,共3页
目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色... 目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色法测定培养上清中一氧化氮的含量。结果生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组产生的一氧化氮分别为(3.50±3.11)、(16.63±6.47)、(13.97±6.20)和(7.55±2.26)ng/ml,不同剂量疫苗免疫小鼠产生的一氧化氮水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论耻垢分枝杆菌疫苗可促进小鼠巨噬细胞产生一氧化氮。 展开更多
关键词 分枝杆菌 疫苗 一氧化氮
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结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的研究进展 被引量:6
4
作者 李文桂 陈蕊 陈雅棠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第2期148-149,152,共3页
结核分枝杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该病的唯一疫苗,但其免疫效果极不稳定。文章介绍了4种结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展。
关键词 医学免疫学 重组分支杆菌疫苗 综述 结核分枝杆菌
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表达幽门螺杆菌外膜蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗菌对小鼠的免疫保护作用 被引量:3
5
作者 向廷秀 谯敏 +3 位作者 姜政 陶小红 黄爱龙 王丕龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期694-696,722,共4页
为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,... 为研究含pLAO的重组耻垢分枝杆菌疫苗(Recombinant Mycobacterium smegmatis,rM.S)对小鼠的保护作用。将重组耻垢分枝杆菌疫苗pLAO(MS)2×107灌胃免疫接种BALB/c小鼠,同时设PBS组、耻垢分枝杆菌空菌组,免疫4周后,各组处死一批小鼠,取胃组织待用;余下的小鼠用幽门螺杆菌标准株(Helicobacter pylori SS1,Hp SS1)攻击2次,4周后处死小鼠,进行胃组织快速尿素酶试验、Hp培养、炎症程度及其炎症活动度评分,以评价疫苗对胃黏膜Hp感染的免疫保护作用,ELISA检测Hp特异性血清IgG和IgA水平。结果表明疫苗组Hp定植评分均明显低于PBS组和空菌组,疫苗组不仅可以降低Hp的定植,而且能减轻Hp造成的小鼠胃黏膜的局部慢性炎症反应。免疫后BALB/c小鼠特异性抗体显示rM.S疫苗诱导的Hp特异性血清IgG、IgA水平都升高。因此rM.S疫苗经灌胃接种BLAB/c小鼠能降低Hp定植,减轻胃黏膜的炎症反应,对Hp感染有明显的预防保护作用。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 重组分枝杆菌疫苗
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无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠的长期毒性研究 被引量:1
6
作者 徐苗 陈保文 +3 位作者 沈小兵 苏城 罗永艾 王国治 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第19期1640-1643,共4页
目的:观察无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠的长期毒性。方法:48只豚鼠随机均分成无细胞耻垢分技杆菌疫苗低、中、高剂量组(疫苗用量分别为50,250和500μg·kg-1)和阴性对照组,每周1次,连续7周肌内注射疫苗,阴性对照组给予等体积的生... 目的:观察无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠的长期毒性。方法:48只豚鼠随机均分成无细胞耻垢分技杆菌疫苗低、中、高剂量组(疫苗用量分别为50,250和500μg·kg-1)和阴性对照组,每周1次,连续7周肌内注射疫苗,阴性对照组给予等体积的生理氯化钠溶液。在实验前、中、末期(n=12)和恢复期(n=4)观察动物体重、白蛋白和球蛋白比值、抗疫苗抗体IgG和总IgE的含量;在实验末期和恢复期对豚鼠作病理组织学检查和骨髓细胞学检查。结果:阴性对照组豚鼠抗疫苗抗体IgG始终为阴性,疫苗组豚鼠注射疫苗后抗疫苗抗体IgG阳转;各组豚鼠在整个实验过程中体重稳定增加,白蛋白和球蛋白比值未见明显改变,血清IgE均为阴性;各脏器未见病理性损害和免疫复合物沉积,各脏器系数与阴性对照组比较未见统计学差异;骨髓各系造血细胞未见抑制现象。结论:无细胞耻垢分枝杆菌疫苗对豚鼠无长期毒性。 展开更多
关键词 分枝杆菌疫苗 长期毒性 豚鼠
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耻垢分枝杆菌疫苗经灌胃免疫在小鼠体内的分布与安全性研究 被引量:2
7
作者 徐永柱 吕琳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期871-872,共2页
目的探讨携带编码幽门螺杆菌UreB基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s)经灌胃免疫在小鼠体内的分布和安全性。方法将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌灌胃BALB/c小鼠后8周,处死小鼠,... 目的探讨携带编码幽门螺杆菌UreB基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,M.s)经灌胃免疫在小鼠体内的分布和安全性。方法将携带绿色荧光蛋白(GFP)基因质粒(pLUB)的重组耻垢分枝杆菌灌胃BALB/c小鼠后8周,处死小鼠,观察胃、心、肝、脾、肺和肾组织中荧光蛋白的分布,测定小鼠肌酐及ALT;处死小鼠,分离出肺、肾、肝并分别测定其重量及HE染色。结果在BALB/c小鼠胃、脾组织中均检测到绿色荧光蛋白的表达,其他组织及对照组未检测到绿色荧光;小鼠体质量、各脏器质量、各血清肌酐和ALT含量与对照组无差异(P>0.05)。结论携带GFP的重组耻垢分枝杆菌可在胃和脾组织分布,对小鼠无系统毒性作用。 展开更多
关键词 分枝杆菌疫苗 安全性 绿色荧光蛋白
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重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗的免疫保护作用研究 被引量:1
8
作者 胡佳杰 肖爱清 +1 位作者 黄海浪 皇甫永穆 《疾病控制杂志》 2003年第3期204-206,共3页
目的 初步研究重组耻垢分枝杆菌疫苗 r Mc- Sj2 6 GST (recom binant M.smegmatism c2 1 5 5 - Sj2 6 GST)对小鼠的免疫保护作用。方法 用耻垢分枝杆菌重组疫苗 r Mc- Sj2 6 GST免疫雄性 BAL B/ c小鼠 ,检测小鼠淋巴细胞刺激指数 (SI... 目的 初步研究重组耻垢分枝杆菌疫苗 r Mc- Sj2 6 GST (recom binant M.smegmatism c2 1 5 5 - Sj2 6 GST)对小鼠的免疫保护作用。方法 用耻垢分枝杆菌重组疫苗 r Mc- Sj2 6 GST免疫雄性 BAL B/ c小鼠 ,检测小鼠淋巴细胞刺激指数 (SI) ,腹腔巨噬细胞培养上清释放 NO量 ,小鼠血清IFN- γ、IL- 2的含量 ,并计数小鼠肝、肺活细菌数。结果 小鼠脾淋巴细胞刺激指数 (SI)为 2 .6 4±1 .37,与 Mc组 (载体组 ) 1 .2 8± 0 .4 1相比 ,差异具有显著性 ;小鼠血清 IFN- γ为 1 96 .4 3pg· ml- 1 ,与 Mc组 1 1 2 .5 7pg· ml- 1相比 ,差异有显著性 ,较对照组高 4 1 % ;小鼠血清中 IL- 2的浓度较对照组高。经 r Mc- Sj2 6 GST疫苗免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核杆菌数较对照组少。结论 耻垢分枝杆菌重组疫苗 r Mc- Sj2 6 GST增强了小鼠细胞免疫功能 。 展开更多
关键词 分枝杆菌 疫苗 免疫保护作用 免疫功能 小鼠 结核病 传染病
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重组耻垢分枝杆菌与微卡在鼠结核病免疫治疗作用中的比较
9
作者 杨春 何永林 +5 位作者 徐蕾 张黎 伊正君 李娜 王渝伟 朱道银 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期685-688,共4页
目的比较颗粒溶素/白介素-12重组耻垢分枝杆菌(rMS)和微卡作为免疫治疗佐剂在鼠结核病治疗中的效果及机制。方法结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌(MS)、rMS、INH+PZA,rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA治疗6... 目的比较颗粒溶素/白介素-12重组耻垢分枝杆菌(rMS)和微卡作为免疫治疗佐剂在鼠结核病治疗中的效果及机制。方法结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后,分别用生理盐水、耻垢分枝杆菌(MS)、rMS、INH+PZA,rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA治疗6次,于第1次治疗后3个月处死小鼠,检测器官荷菌量、血清IL-12和IFN-γ分泌水平和肺、脾组织中颗粒溶素表达及观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果rMS+INH+PZA器官荷菌量明显低于微卡+INH+PZA、rMS和INH+PZA药物组;血清IL-12水平rMS+INH+PZA和单纯rMS组明显高于微卡+INH+PZA和INH+PZA组;IFN-γ分泌水平rMS+INH+PZA、单纯rMS组和微卡+INH+PZA明显高于单纯的药物组;用免疫组化检测到单纯rMS组和rMS+INH+PZA组在肺脾组织中颗粒溶素的表达;rMS+INH+PZA、微卡+INH+PZA、单纯rMS组和INH+PZA组肺组织病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛,正常肺泡结构被破坏。结论rMS和微卡对小鼠结核病有一定免疫治疗作用,rMS通过增强宿主Th1型免疫应答和GLS的抗菌活性有关,而微卡主要通过调节免疫应答发挥作用;rMS对临床常用的抗结核药协同作用优于微卡,为结核病的综合治疗打下实验基础。 展开更多
关键词 分枝杆菌 微卡 免疫治疗 结核病
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重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗有关毒性实验研究
10
作者 胡佳杰 文学明 +1 位作者 肖爱清 皇甫永穆 《华南预防医学》 2002年第5期44-45,共2页
目的初步研究重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗对小鼠的有关毒性作用。方法 用重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗免疫雄性BALB/c小鼠,16周后,称小鼠体重,摘眼球取血,测定小鼠的淋巴细胞、血红蛋白、白细胞及血小板含量;剩余血离心得到血清,测... 目的初步研究重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗对小鼠的有关毒性作用。方法 用重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗免疫雄性BALB/c小鼠,16周后,称小鼠体重,摘眼球取血,测定小鼠的淋巴细胞、血红蛋白、白细胞及血小板含量;剩余血离心得到血清,测定小鼠肌酐及ALT;处死小鼠,分离出肺、肾、肝,并分别测定其重量。结果重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗免疫的小鼠,其淋巴细胞数较对照组高(P<0.05),且在正常范围之内;小鼠体重、各脏器重量、各血象指标及血清肌酐和ALT含量与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论重组耻垢分枝杆菌-Sj26GST疫苗免疫小鼠后对小鼠无系统毒性作用。 展开更多
关键词 重组分枝杆菌 实验研究 rMc-Sj26GST疫苗 毒性作用 结核病
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结核分枝杆菌肝素结合血凝素与人IL12融合基因重组耻垢分枝杆菌的构建及鉴定 被引量:2
11
作者 赵勇 张海 +5 位作者 赵善民 伍静 毛峰峰 郭晓雅 张彩勤 师长宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期961-965,共5页
目的构建表达肝素结合血凝素与人IL12融合基因的重组耻垢分枝杆菌并对其进行鉴定。方法通过RT-PCR从人淋巴细胞获得hIL12基因模板,采用PCR技术克隆hIL12的P40和P35两个亚基及结核分枝杆菌的HBHA基因,通过酶切鉴定及DNA测序证实连接的基... 目的构建表达肝素结合血凝素与人IL12融合基因的重组耻垢分枝杆菌并对其进行鉴定。方法通过RT-PCR从人淋巴细胞获得hIL12基因模板,采用PCR技术克隆hIL12的P40和P35两个亚基及结核分枝杆菌的HBHA基因,通过酶切鉴定及DNA测序证实连接的基因片段均正确后,构建分枝杆菌穿梭表达质粒pSMT3-HBHA-hIL12,并用电穿孔法将重组质粒转到耻垢分枝杆菌中。分别用HBHA单克隆抗体和hIL12多克隆抗体检测HBHA和hIL12蛋白在重组耻垢分枝杆菌中的表达,并测定重组耻垢分枝杆菌生长状态的改变。结果重组耻垢分枝杆菌构建成功,通过HBHA单抗和hIL12多抗进行免疫荧光法检测证实HBHA和hIL12均有表达,并且重组的耻垢分枝杆菌的生长速度比正常组有较大的提高。结论成功构建了表达结核分枝杆菌HBHA基因和人IL12的重组耻垢分枝杆菌,为构建一种结核病的候选疫苗提供了实验基础。 展开更多
关键词 HBHA hIL-12 分枝杆菌 重组疫苗 融合蛋白
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ESAT6-CFP10融合蛋白基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达 被引量:3
12
作者 张海 师长宏 +6 位作者 李羽 薛莹 柏银兰 王丽梅 高雪 姜泓 徐志凯 《生物技术通讯》 CAS 2006年第2期164-166,共3页
目的:构建能表达ESAT6-CFP10融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,克隆cfp10基因,将其插入到pGEM-T-easy载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp10融合基因的重组载体pGEM-e6c10。酶切消化pGEM-e6... 目的:构建能表达ESAT6-CFP10融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,克隆cfp10基因,将其插入到pGEM-T-easy载体后与esat6基因连接,构建含有esat6和cfp10融合基因的重组载体pGEM-e6c10。酶切消化pGEM-e6c10重组质粒,将esat6-cfp10基因亚克隆到pDE22分泌表达穿梭载体,以电穿孔方法将重组质粒转化至耻垢分枝杆菌。PCR筛选到的阳性克隆经温度诱导后,SDS-PAGE和Western印迹检测表达蛋白的正确性。结果:可表达出相对分子质量约23000的ESAT6-CFP10融合蛋白。Western印迹证明重组蛋白有较好的免疫原性。结论:获得能表达ESAT6-CFP10融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌,为结核病的预防奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 esat6基因 cfp10基因 融合表达 分枝杆菌 重组疫苗
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融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导小鼠的免疫应答及其保护力
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作者 张海 师长宏 +3 位作者 薛莹 柏银兰 王丽梅 徐志凯 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第9期574-574,共1页
目的研究融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导的小鼠体液和细胞免疫应答水平。方法以106CFU/0.1 mL重组M.S通过尾静脉途径免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。取部... 目的研究融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导的小鼠体液和细胞免疫应答水平。方法以106CFU/0.1 mL重组M.S通过尾静脉途径免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。结果融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6 400。淋巴细胞刺激增殖指数为2.8,明显高于生理盐水组(0.90);IFN-γ和IL-2的含量分别为2230±11 pg/mL和221±17 pg/mL,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时重组耻垢分枝杆菌诱导的脾细胞杀伤率为45%。结论融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌能诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,可作为结核新型疫苗使用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 疫苗 ESAT6 CFP10 融合蛋白 分枝杆菌
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细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗的构建 被引量:4
14
作者 刘小荣 景涛 +3 位作者 李苗 宋楠楠 王明珠 祝秉东 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期526-530,共5页
目的分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗。方法分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃... 目的分别构建细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型卡介苗及耻垢分枝杆菌疫苗。方法分别以卡介苗(BCG)基因组DNA和PGEX-4T-Eg95为模板,PCR扩增获120bp的BCG抗原85B信号肽序列和423bp的Eg95基因序列。先将Eg95基因序列定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261,构建非分泌型重组质粒pMEg95。再将BCG-Ag85B信号肽序列定向克隆至pMEg95,构建分泌型重组质粒pSMEg95。电穿孔法将两型重组质粒分别导入BCG菌及耻垢分枝杆菌。结果双酶切、PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因Eg95序列和Ag85B信号肽序列正确插入载体PMV261,细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗构建成功。结论构建了含有Eg95基因序列和BCG-Ag85B信号肽序列的细粒棘球绦虫Eg95重组非分泌型和分泌型分枝杆菌疫苗。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EG95 卡介苗 分枝杆菌 疫苗
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耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠细胞因子产生及Th1/Th2应答的影响 被引量:9
15
作者 徐苗 陈保文 +3 位作者 沈小兵 苏城 罗永艾 王国治 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期781-784,共4页
目的研究以耻垢分枝杆菌(M.S)制备的M.S疫苗对小鼠免疫应答的影响,验证M.S的免疫原性、探讨M.S疫苗的免疫调节作用。方法将BALB/c小鼠随机分成生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组,每组6只,分别注射生理盐水和不同剂量的M.S疫苗。... 目的研究以耻垢分枝杆菌(M.S)制备的M.S疫苗对小鼠免疫应答的影响,验证M.S的免疫原性、探讨M.S疫苗的免疫调节作用。方法将BALB/c小鼠随机分成生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组,每组6只,分别注射生理盐水和不同剂量的M.S疫苗。取小鼠脾细胞或腹腔巨噬细胞体外培养,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养上清中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-12和γ干扰素(IFN-γ)的含量,分析M.S疫苗对小鼠Th1/Th2类应答的影响。结果(1)生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组小鼠产生的IL-12分别为(32.6±22.7)、(58.9±18.6)、(77.3±38.0)、(114.7±9.9)pg/m l,M.S疫苗中、高剂量组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)生理盐水对照组和M.S疫苗低、中、高剂量组小鼠产生的IL-2分别为(5.0±2.6)、(13.4±9.3)、(15.3±9.7)、(22.6±7.5)pg/m l,M.S疫苗高剂量组与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。(3)体外以ConA刺激时,生理盐水对照组和M.S疫苗中剂量组小鼠产生的IFN-γ分别为(662±279)和(807±163)pg/m l,IL-4分别为(407±127)和(101±26)pg/m l,但M.S疫苗组与生理盐水对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);体外以M.S-纯化蛋白衍生物(PPD)刺激时,生理盐水对照组和M.S疫苗中剂量组小鼠产生的IFN-γ分别为(14.0±6.31)和(55.3±32.4)pg/m l,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),各组产生的IL-4均在检测限以下。结论M.S具有良好的免疫原性,以此制备的M.S疫苗具有促进Th1类应答、抑制Th2类应答的免疫调节作用。 展开更多
关键词 分枝杆菌 疫苗 TH1细胞 TH2细胞 免疫因子
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结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的研制 被引量:3
16
作者 陈保文 沈小兵 +2 位作者 徐苗 苏城 王国治 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第9期850-852,共3页
目的研制结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(MS疫苗)。方法耻垢分枝杆菌培养物经多次洗涤后,制备所需浓度的菌悬液,高压匀浆后,经高压灭菌、稀释、分装、冻干,制成MS疫苗。将结核杆菌感染的豚鼠随机分为A组(接种疫苗8.7μg/次... 目的研制结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(MS疫苗)。方法耻垢分枝杆菌培养物经多次洗涤后,制备所需浓度的菌悬液,高压匀浆后,经高压灭菌、稀释、分装、冻干,制成MS疫苗。将结核杆菌感染的豚鼠随机分为A组(接种疫苗8.7μg/次)、B组(接种疫苗17.5μg/次)和C组(接种生理盐水),观察疫苗对结核杆菌感染豚鼠的保护作用。结果MS疫苗浓度确定为每支蛋白含量为17.5μg(0.25mg湿菌)。疫苗具有良好的安全性,且可有效抑制或杀死豚鼠体内的结核杆菌,减轻豚鼠各脏器的病变程度。结论已成功制备MS疫苗,其对结核杆菌感染动物有较好的预防效果,有望成为结核病高危人群预防用疫苗。 展开更多
关键词 结核病 高危人群 分枝杆菌 疫苗
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猪囊尾蚴特异性抗原cC1重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建与鉴定 被引量:3
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作者 王雪梅 骆江坤 +5 位作者 李倩 李江艳 陈勇 陶志勇 夏惠 方强 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2014年第3期287-291,共5页
目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后... 目的构建表达猪囊尾蚴cC1抗原的重组耻垢分枝杆菌疫苗。方法提取pET28a-cC1质粒DNA,用xho I和BamH I双酶切,用Klenow酶补平xho I酶切末端,同时提取pMV261穿梭质粒载体,用Hind III和BamH I双酶切,用Klenow酶补平Hind III酶切末端,纯化后的酶切产物通过T4连接酶连接,构建pMV261-cC1穿梭质粒,测序验证正确后,将pMV261cC1穿梭质粒经电穿孔法转化耻垢分枝杆菌,构建重组耻垢分枝杆菌,经热诱导后,以猪囊尾蚴病患者血清为一抗进行Western-blotting鉴定。此外,比较正常耻垢分枝杆菌和重组cC1耻垢分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线。结果构建的重组穿梭载体经酶切、测序验证正确。构建的重组耻垢分枝杆菌经热诱导后,SDS-PAGE电泳分析显示,在40 kDa处有外源性蛋白表达,与预期值相符。Western-blotting显示其可被猪囊尾蚴病患者血清识别,表明cC1抗原基因在耻垢分枝杆菌中表达成功。重组耻垢分枝杆菌与正常耻垢分枝杆菌的增殖特性无明显差异。结论成功构建了表达猪囊尾蚴特异性抗原cC1的重组耻垢分枝杆菌疫苗。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 cC1 分枝杆菌 疫苗
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一种新型的表达PPE68蛋白的重组耻垢分枝杆菌载体疫苗的构建及鉴定 被引量:1
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作者 项杰 张冠慧 +3 位作者 王艳萍 徐涛 席淑红 樊毅 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第3期324-328,共5页
目的:构建一种新型的、含结核分枝杆菌(M.S)抗原PPE68的耻垢分枝杆菌载体疫苗。方法:以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组为模板,PCR方法获得Rv3873基因,然后通过克隆构建获得真核表达质粒pVAX-1-Rv3873,最后通过电转化的方法将pVAX-1-Rv... 目的:构建一种新型的、含结核分枝杆菌(M.S)抗原PPE68的耻垢分枝杆菌载体疫苗。方法:以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组为模板,PCR方法获得Rv3873基因,然后通过克隆构建获得真核表达质粒pVAX-1-Rv3873,最后通过电转化的方法将pVAX-1-Rv3873真核表达质粒转化至耻垢分枝杆菌的感受态细胞中获得重组的耻垢分枝杆菌载体疫苗rM.S-PPE68。结果:成功构建了含结核分枝杆菌抗原PPE68的耻垢分枝杆菌载体疫苗。结论:该疫苗的构建为结核病的预防,尤其在高免疫保护作用的疫苗开发方面,提供了新的研究策略。 展开更多
关键词 结核病 疫苗 分枝杆菌 PPE68
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细粒棘球绦虫EgM123重组耻垢分枝杆菌疫苗在小鼠体内的表达及其免疫应答 被引量:5
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作者 何黎 齐文静 +3 位作者 郑雪婷 郭刚 李军 张文宝 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期1314-1318,1323,共6页
目的构建表达细粒棘球绦虫成虫特异性基因EgM123的耻垢分枝杆菌疫苗株,接种BALB/c小鼠,观察其免疫原性。方法 PCR扩增EgM123片段,定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261中,构建重组质粒pMV261-EgM123。连接产物转化至大肠埃希菌... 目的构建表达细粒棘球绦虫成虫特异性基因EgM123的耻垢分枝杆菌疫苗株,接种BALB/c小鼠,观察其免疫原性。方法 PCR扩增EgM123片段,定向克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒pMV261中,构建重组质粒pMV261-EgM123。连接产物转化至大肠埃希菌DH5α中,培养后提取质粒,测序确定阅读框架正确,后电穿孔转入耻垢分枝杆菌,构建表达EgM123的重组耻垢分枝杆菌疫苗(rMS-EgM123),经热诱导后采用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白表达。在培养过程中连续检测菌液A600值,绘制重组菌生长曲线。取重组菌接种小鼠,检测基础接种和加强免疫接种后血清特异抗体水平。结果 PCR扩增出大小为594bp的EgM123片段,EgM123基因正确插入到穿梭质粒pMV261中,测序鉴定阅读框架正确。重组耻垢分枝杆菌连续传10代培养,重组质粒DNA序列未发生变异。Western blot检测表达产物能被抗EgM123鼠血清识别。用重组耻垢分枝杆菌疫苗加强免疫后的小鼠血清特异性抗体呈持续上升趋势,单次加强免疫8周后抗体水平(A405值为2.504±0.659)显著高于亚单位疫苗组(P<0.05)。结论重组耻垢杆菌疫苗菌能表达细粒棘球绦虫成虫EgM123蛋白,且该重组疫苗可通过加强免疫增强基础免疫诱导小鼠产生的抗体水平。 展开更多
关键词 包虫病 EgM123 重组分枝杆菌 疫苗
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猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌疫苗诱导小鼠免疫应答 被引量:3
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作者 王亮亮 陈闽艳 +1 位作者 郑维琼 周必英 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期793-799,共7页
目的观察猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法SPF级昆明小鼠60只(18~22 g,雌雄各半),采用随机数字表法分为3组,每组20只,分别为重组MS-TSOL18疫苗组、MS对照组... 目的观察猪带绦虫TSOL18重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,MS)疫苗免疫小鼠诱导产生的体液和细胞免疫应答。方法SPF级昆明小鼠60只(18~22 g,雌雄各半),采用随机数字表法分为3组,每组20只,分别为重组MS-TSOL18疫苗组、MS对照组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。采用口服灌胃法免疫2次,间隔2周。于免疫后0、2、4、6、8周,每周4只小鼠眼眶静脉取血,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清IgG与IgG2a水平;无菌取脾,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后增殖水平,采用ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后产生白细胞介素(IL)-2和IL-4的水平。结果与MS对照组(IgG:0.160 ± 0.019、0.187 ± 0.038、0.193 ± 0.050、0.170 ± 0.005,IgG2a:0.213 ± 0.010、0.198 ± 0.012)和PBS对照组(IgG:0.159 ± 0.015、0.184 ± 0.029、0.191 ± 0.025、0.165 ± 0.018,IgG2a:0.198 ± 0.032、0.178 ± 0.025)比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠血清特异性IgG水平(0.310 ± 0.034、0.391 ± 0.029、0.443 ± 0.030、0.373 ± 0.021)在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),lgG2a水平(0.446 ± 0.056、0.339 ± 0.026)在免疫后6、8周升高(P均< 0.05),6周时均达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞增殖水平在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),在6周时达峰值。抗原刺激后,与MS对照组和PBS对照组比较,重组MS-TSOL18疫苗组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2和IL-4水平均在免疫后2、4、6、8周升高(P均< 0.05),分别在6周和4周时达峰值。结论猪带绦虫TSOL18重组MS疫苗免疫可诱导小鼠产生体液和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 有钩绦虫 TSOL18 重组分枝杆菌疫苗 免疫应答 小鼠
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