血站酶联免疫检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用比较

探讨血站酶联免疫吸附检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用效果差异。方法 本研究选取的研究中心为呼伦贝尔中心血站,选取的对象为在血站进行乙肝病毒筛查的献血者100例,收集的周期为一年即2022年6月份至2023年的6月份。所有献血者收集基本信息后进行血液采集,分别采取酶联免疫吸附法和核酸检测法进行乙肝病毒的筛查,所有献血者筛查结束后进行结果统计分析,本研究采用SPSS23.0数据分析软件对结果进行统计,统计的指标包括不同检测技术在乙肝病毒筛查中的诊断效能,灵敏度、特异度,并分析不同检测技术筛查窗口期、漏诊率等。结果 在100例献血者中,采用酶联免疫吸附法检测的乙肝病毒表面抗原阳性有2份血液样本,而采用核酸技术检测的乙肝病毒表面抗原阳性有6份血液样本,两种检测方法的阳性诊断率分别为2.0%和6.0%;追踪1个月后,采用酶联免疫吸附法检测的诊断灵敏度为68.37%、特异度为75.61%,而核酸检测技术在乙肝病毒中的诊断灵敏度为87.56%、特异度为90.38%;两种检测技术在检测抗原中的窗口期分别为29.67±1.05d和24.52±1.01d,而在检测乙肝病毒中的漏诊率则分别为3.0%和1.0%;与酶联免疫吸附检测技术比较,核酸检测技术在乙肝病毒表面抗原中的阳性诊断率明显更高(P<0.05),诊断灵敏度、特异度明显更短,窗口期和漏诊率均明显更低(P<0.05)。结论 两组目标检测方法在目标病毒中的应用效果存在明显差异,且核酸检测法效果更佳,在目标病毒检测及感染预防中的应用更具有临床推广的价值。

酶联免疫检测与核酸检测对输血相关传染性疾病的效果研究

探讨酶联免疫检测与核酸检测对输血相关传染性疾病的效果研究。方法 选取2022年5月-2023年5月我院500份无偿献血样本作为研究对象,所有样本均进行酶联免疫检测以及联合核酸检测,对检验结果进行分析。结果 500份血液样本中,经酶联免疫检测出98份阳性,核酸检测出128份阳性,其中核酸检测出含有乙肝表面抗原(HBsAg)108份,含有丙型肝炎病毒( HCV)样本15份,含有人类免疫缺陷病毒( HIV) 样本5份,与酶联免疫检测差异有统计学意义(P<0.05);联合检测出阳性145份,高于两种单独检测的阳性率(P<0.05)。结论 在输血传播疾病的筛查中使用核酸检测具有较高的检测价值,提高对血液传播性疾病的筛查,联合酶联免疫检测具有更高的阳性检测率。

氯霉素酶联免疫检测方法的研究

通过活化琥珀氯霉素的羧基使其与蛋白联结合成了免疫抗原 ,并制备了氯霉素的多克隆抗体 ,建立了氯霉素直接竞争酶联免疫检测方法 ,检测时间在 1h之内。抗体的ELISA效价达 3.2× 10 5以上 ,I50 为 12 .9ng ml,检测范围为 0 .2 4ng ml- 6 78.8ng ml。抗体与琥珀氯霉素的交叉反应率为 174 .5 4 % ,与其它抗生素的交叉反应率均小于 0 .0 1%。牛奶样品中平均添加回收率为10 6 .5 6 %。所建立的氯霉素酶联免疫检测方法达到了我国牛奶氯霉素残留限量 0 .2 5ng ml的要求 。

转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究

将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30（＋）-pat并在大肠杆菌中进行表达，分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000，单抗效价为5×10^4；单抗为IgGl类，轻链为，（型。基于抗pat蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法（SandwichELISA）。检测范围为1．6～100μg／L，线性回归方程y=0．6914x-2．572，决定系数为0．9951。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量，其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白，其余均未检出pat蛋白。

ISO15189在酶联免疫检测性能验证方法的探讨

目的经血传播疾病的抗原抗体检测采用酶联免疫方法,对这些方法进行性能验证,以符合ISO15189的要求。方法血液筛查检测采用的酶联免疫方法共有8个检测系统,针对这8个检测系统进行重复性、精密度、灵敏度及特异性、符合性、最低检出限、CUTOFF值的验证。结果 7个方面的性能验证数据与相应的标准进行比较,8个检测系统所有的性能验证结果都符合相应标准的要求。结论针对酶联免疫检测采用的性能验证方法能够满足ISO15189的要求,同时也符合实验室的要求,能够提高实验室对检测系统的性能指标的认识,对实验室管理水平的提高起到了重要的作用。

转基因抗虫作物中豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)酶联免疫检测方法的建立

从10个不同豇豆品种中筛选出抑制剂活性最高的901青皮豇豆,提取豇豆胰蛋白酶抑制剂。通过G-75凝胶过滤、亲和层析纯化了豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)并制备了其兔多克隆抗体。用所制备的抗体建立了酶联免疫检测方法并检测了转CpTI编码基因棉花、水稻中的CpTI含量,发现棉花不同器官CpTI的表达量不尽相同。

罗丹明123人工抗原的合成及抗体的酶联免疫检测

为建立罗丹明B(rhodamine B)的免疫分析方法,采用戊二醛法,将半抗原罗丹明123与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原R123-B S A和包被抗原R123-OVA。经动物免疫实验证实人工抗原合成,并制备抗罗丹明123的多克隆抗体,此抗体同时能够检测食品中的罗丹明B,且最低检测限为0.001ng/mL。

碱性橙Ⅱ的酶联免疫检测方法的研究

建立碱性橙Ⅱ的酶联免疫分析方法。采用戊二醛偶联法将半抗原碱性橙Ⅱ与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原碱性橙Ⅱ-BSA和包被抗原碱性橙Ⅱ-OVA。经紫外可见吸收光谱鉴定和大白兔免疫实验证实人工抗原成功合成,并制备抗碱性橙Ⅱ的多克隆抗体,该抗体可检测快速定量食品中的碱性橙Ⅱ,最低检测限为10 pg。该检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中碱性橙Ⅱ检测试剂盒的研制。

抗HCV分片段酶联免疫检测试剂的临床评价

在克隆表达了丙型肝炎病毒不同区抗原(HCV—C、NS—3、NS—4、NS—5)的基础上,研制出抗HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂。对该试剂特异性、灵敏度进行了临床评价。结果显示该试剂具有良好的特异性和灵敏度。

酶联免疫检测技术在水环境雌激素快速筛选中的应用研究

采用酶联免疫(ELISA)检测技术,对长江口水样和污水处理厂水样中的典型雌激素雌二醇(E2)进行分析,并与化学检测浓度进行验证比较.结果表明:ELISA的检测限可低至0.5 ng.L-1,试验的变异系数小于30%,具有较高的灵敏性和良好的重复性;ELISA检测长江口采集的水样中E2浓度范围在0.5 ng.L-1以下到0.7 ng.L-1,污水处理厂水样中E2浓度范围在2.5～11.5 ng.L-1,与液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的分析结果相比,相关系数R2为0.9147,表明两种方法具有良好的相关性;ELISA检测所需的水样量比LC-MS/MS更少,使用96微孔板可同时对43个样品进行检测,从而缩短了单个样品的分析时间,具有快速简便和经济适用性.

GA_(1,3,4,7)酶联免疫检测法(ELISA)的建立

用碳二亚胺(EDC)法将赤霉素A_4(GA_4)与卵清蛋白(OVA)连接,形成GA_4-OVA复合物用于包板,利用GA_4-Me与GA_4-OVA对兔抗GA_4-PAbs竞争结合反应,建立了GA_(1,3,4,7)间接酶联免疫检测法(ELISA).其灵敏度、检测范围和最小检测样品量分别为45pg,0.2～200ng和50～500mg,样品的平均回收率为97%,批内和批间的变异系数分别为4.2%和4.8%.

盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究

〔目的〕在成功制备关键试剂的基础上 ,建立克伦特罗酶联免疫检测方法 ,并研制其测试盒。〔方法〕应用ELISA法重复测定样品 ,变异系数为 6.9% ,方法的添加回收率尿样为 92 .5 % ,检测限可达 0 .1ng/ml ,克伦特罗抗体与沙丁胺醇、异丙肾上腺素交叉反应率分别为 1.2 5 %、0 .0 3 %。〔结果〕自制的试剂盒与英国Randox公司的 β -Agonist试剂盒对比试验结果 ,两组数据经极差t检验分析 ,|t| <t0 .975无显著差异。〔结论〕该试剂盒具有专一性、快速、灵敏、准确的特点。

呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的研究

建立了呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测法。用活化酯法将卵清蛋白和半抗原连接成为包被原,对包被原和单克隆抗体的稀释倍数,封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗孵育时间和显色反应时间进行优化,同时通过灵敏度、特异性、精密度和准确度等指标进行方法学评价。结果显示,最佳条件为:包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为800倍和6 400倍,封闭液是1%脱脂乳,竞争时间是60 min,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗孵育时间是45 min,显色时间是15 min。通过建立的标准曲线计算得到线性方程是Y=-0.253X+1.336(R2=0.995),IC50是2.015 ng/m L,线性范围是0.131~30.911 ng/m L,空白猪肉添加回收率是84.8%~90.3%,批内和批间变异系数分别为3.3%~4.1%和4.6%~6.7%。此方法特异性强,准确性、精密度和重现性均良好,可用于动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的快速筛查。

石杉碱甲多克隆抗体的制备及酶联免疫检测方法的建立

目的制备珍稀药源植物蛇足石杉的活性成分石杉碱甲(huperzine A,HupA)的人工抗原及多克隆抗体,建立快速检测HupA的酶联免疫分析方法。方法采用戊二醛法,将半抗原HupA与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备人工抗原HupA-BSA和包被抗原HupA-OVA。用HupA-BSA免疫新西兰大白兔,制备抗HupA的抗血清,通过间接ELISA法和竞争ELISA法检测抗血清的效价和特异性。采用Protein A亲和层析法对抗血清进行纯化,以纯化后的多克隆抗体建立HupA的标准竞争抑制曲线。结果合成的人工抗原HupA-BSA的偶联比为10.8∶1,免疫兔子得到抗HupA的抗血清,其效价为1∶64000,HupA的标准竞争抑制曲线为Y=0.215 1X-0.095 5(R2=0.987 3)。结论成功合成石杉碱甲人工抗原,经过免疫兔子制备抗石杉碱甲的多克隆抗体,建立HupA的酶联免疫检测方法。

酶联免疫检测试剂盒应用于牛奶中四环素残留的测定

为了加强牛奶中四环素残留量的监控,以四环素-卵清白蛋白为包被抗原,四环素-牛血清白蛋白免疫的产生的抗血清为抗体,辣根过氧化物酶-羊抗兔IgG为酶标记物,研制了四环素快速酶联免疫分析试剂盒,在3.9-2000ng/mL四环素标准浓度范围内,呈线性相关,相关系数为0.9882,批内误差小于批间误差,但其变异系数均在10%以下。与土霉素、金霉素的交叉反应分别为24.31%、6.22%。该试剂盒具有快速、灵敏、准确的特点,适用于牛奶中四环素残留量的快速筛选测定。

猪牛肉加热终点温度酶联免疫检测方法的建立

为满足肉类及肉制品加热终点温度监控需要,通过免疫新西兰白兔获得加热终点温度指示蛋白乳酸脱氢酶的抗体,应用棋盘滴定法确定最适抗体包被浓度和酶标抗原浓度,用1%BSA-PBS稀释去除基质影响,从而建立了猪牛肉加热终点温度酶联免疫检测方法。

一种呋喃西林酶联免疫检测方法的建立

[目的]建立一种饲料中呋喃西林酶联免疫检测方法。[方法]利用制备的人工抗原和高特异性单克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫技术建立呋喃西林检测方法。[结果]在优化条件下,检测抗原浓度为10μg/mL,抗体稀释度为1∶5000。呋喃西林在0.1~10.0 ng/mL具有较好的线性关系(R 2=0.9987),IC 50为1.43 ng/mL。与呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林代谢物氨基脲的交叉反应率低于0.5%。饲料样品中添加呋喃西林的平均回收率为87.5%~96.0%,变异系数为6.1%~9.7%。[结论]该方法快速、准确、灵敏,可用于饲料中呋喃西林的分析检测。

水产品中孔雀石绿残留酶联免疫检测的基质干扰及消除方法

目前孔雀石绿类残留是我国水产品质量安全的隐患之一。本研究选用大菱鲆、大黄鱼和南美极白对虾3种阴性样本,利用商品化试剂盒研究水产品中孔雀石绿酶联免疫检测效果,结果表明,样本基质组分的存在会导致检测结果产生显著的偏差,其中蛋白质是主要的干扰因素之一。利用9%三氯乙酸对提取液进行处理,可以简便有效地去除干扰蛋白,显著降低基质干扰程度。在0.5μg/kg的加标浓度下,3种水产样品的平均回收率基本维持在120%～130%,相对标准偏差均小于11.2%,基本达到了实践中筛选检测的要求。

苏丹红残留酶联免疫检测技术研究

通过对苏丹红分子结构进行改造,制备了半抗原及人工抗原,免疫动物,制备了苏丹红特异性抗体。该抗体灵敏度为0.5μg/L,对苏丹红I号交叉反应率为100%,对对位红交叉反应率为120%,对于苏丹红II、III、IV号均小于1%。基于该抗体建立了简介竞争性酶联免疫法检测辣椒酱最低检测限(LOD)为27.64μg/kg,定量限(LOQ)为30μg/kg,30μg/kg～90μg/kg添加水平回收率为96.7%～134.1%,变异系数小于15%,可初步用于苏丹红的实验室分析。

呋喃妥因代谢物化学发光酶联免疫检测方法的研究

对呋喃妥因代谢物1－氨基乙内酰脲（ AHD）进行半抗原改造，采用活化酯法将半抗原与卵清蛋白（ OVA）偶联为包被原，与标准品竞争AHD单克隆抗体的抗原结合位点，加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗，建立了AHD间接竞争化学发光酶联免疫（ CLEIA）检测法，并对化学发光液、包被原与抗体最优稀释度、包被条件、封闭液和竞争时间五项参数进行优化。结果表明：该方法具有良好的特异性， IC50为0．753 ng／mL，在鸡肉组织中的检测限为0．028μg／kg，添加回收率在80．54％～102．64％之间，变异系数均小于10％。与国标中液相色谱－串联质谱法（ LC－MS／MS）和我国出入境行业标准中酶联免疫检测法（ ELISA）相比，不仅降低了检测限，而且操作简便，为动物源性食品中呋喃妥因代谢物的残留提供了准确、便捷的分析检测手段。