HBV S基因与HCV C基因融合基因免疫与联合基因免疫效果研究

目的比较HBV S基因与HCV C基因真核表达质粒融合基因免疫与联合基因免疫的效果，为HBV和HCV融合基因疫苗研究奠定基础。方法将同时含HBV S基因与HCV C基因的真核表达质粒SCpcDNA3.1、含HBVS基因真核表达质粒SpcDNA3.1、含HCV C基因真核表达质粒CpcDNA3．1分别免疫小鼠；将SpcDNA3.1+CpcDNA3.1联合免疫小鼠。ELISA法检测血清抗HBs和抗HCV。结果无论是抗HBs和抗HCV阳转出现的时间、阳转率和体液免疫应答强度，融合基因免疫都优于联合基因免疫：融合基因免疫的抗HBs的应答强度低于SpcDNA3．1质粒的免疫，抗HBc的应答强度高于CpcDNA3.1质粒的免疫。结论HCV C基因或其表达产物对HBV S基因或抗原的表达和提呈有抑制作用；HCV C基因与HBV S基因相融合，更有利于HCV核心蛋白的提呈。

丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达

目的 :为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略 ,构建具有 2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体。方法 :分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有 2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游 ,称为pRSC HBV/HCV ,转染SP2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达 ,免疫Balb/c小鼠 ,用酶联免疫小鼠体液免疫应答。结果 :pRSC HBV/HCV转染SP2 / 0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞 ,SDS Page电泳显示在 14kD及 2 1kD处均可见蛋白条带 ,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致 ,Western印迹分析显示在 14kD及 2 1kD处可见特异性的蛋白条带。 5只免疫鼠中全部出现抗 HCV及抗 HBV抗体 ,而对照组全阴性。结论 :pRSC HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白 ,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答 ,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础。

GM-CSF对抗原化抗体基因免疫T_H细胞应答的调节作用

目的 研究GM CSF(粒 单核巨噬细胞集落刺激因子 )与抗原化抗体联合基因免疫时 ,GM CSF对TH 细胞应答的调节作用。方法 在编码免疫球蛋白重链的质粒中分别克隆黏蛋白 1(MUC1 )中特异性PDTRP抗原表位和GM CSF编码基因 ,构建含PDTRP和GM CSF编码基因的抗原化抗体表达重组体。经脾免疫和肌肉加强的方式免疫BALB c小鼠。采用ELISA方法检测小鼠血清中特异性抗体的水平及其亚类并动态观察 ;RT PCR方法检测TH 细胞分化中细胞因子和转录因子的表达水平。结果 抗原化抗体基因免疫能诱导机体产生免疫应答。GM CSF增强抗原化抗体基因免疫诱生的抗PDTRP特异性IgG抗体水平并且伴随IgG1 IgG2a显著性升高 ,同时可增强淋巴细胞TH2型细胞因子及转录因子 (IL 4、GATA 3)mRNA的表达水平。结论 GM CSF在增强抗原化抗体基因免疫诱导的免疫应答的同时使得免疫应答向TH2方向偏移。