4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷(SCID)荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法将40只SCID鼠随机分为5组,A组(对照组)行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组(Ad4-1BBL-B7-H3组)行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组(空载组)行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组(非免疫重建组)不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组(非肿瘤组)行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)和Toll样受体2(TLR2)在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测主要组织相容性复合体1类相关分子(M1C)A、B及TLR2的表达。结果 1)B组小鼠肿瘤体积最小(P<0.05);2)A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组(P<0.05);3)B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4)人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5)B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组(P<0.05)。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。

非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷小鼠体内成人脂肪源Flk1^+CD31^-CD34^-细胞的多向分化

目的:探讨成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞用于移植的可能性。方法:将男性成人脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞按106个/只剂量经尾静脉输入10只6～8周龄、接受亚致死剂量射线照射的非肥胖型糖尿病及严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内(实验组),对照组10只输注等体积的RPMI1640培养基,2个月后处死动物,检测植入情况。结果:在实验组小鼠体内,脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞不仅有助于造血重建及体内微血管损伤的修复,参与血管新生,还能分化为消化道上皮细胞;而对照组小鼠则在2周内全部死亡。结论:脂肪源Flk1+CD31-CD34-细胞极有可能成为一种理想的种子细胞用于移植。

严重联合免疫缺陷小鼠的免疫重建及其在HIV-1研究中的应用

严重联合免疫缺陷小鼠的免疫重建及其在ＨＩＶ－１研究中的应用张梅英秦英（综述）王太一（审校）（中国医科大学实验动物部，沈阳）ＳＣＩＤ小鼠（ＳｅｖｅｒｅＣｏｍｂｉｎｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔＭｉｃｅ）即严重联合免疫缺陷小鼠，为一种先天性Ｔ和Ｂ细胞...

重症联合免疫缺陷小鼠的分子生物学研究进展

重症联合免疫缺陷小鼠的分子生物学研究进展陆长明，综述，李厚达，校阅（苏州医学院核医学生物技术重点实验室）１９８３年，Ｂｏｓｍａ等［１］首先报道了一种隐性遗传的重症联合免疫缺陷（Ｓｃｉｄ）小鼠。该鼠免疫器官萎缩，体内缺少可检测的Ｔ、Ｂ淋巴细胞，血液中缺...

利用人源化小鼠研究组织工程材料的体内免疫原性

目的建立并利用人源化小鼠模型,研究组织工程材料的体内免疫原性。方法利用NOD/SCID小鼠(非肥胖型糖尿病鼠与重症联合免疫缺陷鼠反交鼠模型),通过腹腔注射人外周血单个核细胞(PBMC)(100×106)建立人源化小鼠,在人源化小鼠皮下植入异体人皮肤(阳性对照)、人体脂肪干细胞与脱钙骨构建的组织工程骨(实验组)、单纯脱钙骨材料(阴性对照)。在植入后1周、2周、3周、4周,取小鼠尾静脉血,流式细胞仪检测人CD4+和CD8+淋巴细胞比例。4周后,取小鼠的移植局部皮肤进行HE染色分析,同时检测脾细胞人CD4+和CD8+淋巴细胞比例。结果NOD/SCID小鼠腹腔注射人PBMC4周内,在外周血和脾中均可测到人CD4+和CD8+淋巴细胞。病理分析结果显示:在人源化小鼠皮下植入的组织工程材料及成体干细胞构建的组织工程骨组未见炎性细胞浸润;而单独植入人皮肤组可见明显的炎性细胞浸润。结论人源化小鼠可作为组织工程材料体内免疫原性的研究的良好模型。

SCID与NOD/SCID小鼠部分免疫指标的比较

目的测定SCID和NOD/SCID小鼠的免疫器官质量、血常规指标以及部分血液生化指标（immunoglobulin G,IgG）,分析比较2个免疫缺陷小鼠在免疫方面的特点。方法对4~8、12~16和20~24周龄SCID与NOD/SCID小鼠眼眶静脉采血,测定血常规指标,剖取胸腺和脾脏进行称质量比较。对4~6、8~10、16~18周龄的SCID和NOD/SCID小鼠眼眶静脉采血,测定比较血清IgG含量。结果 a.同周龄SCID与NOD/SCID小鼠胸腺质量差异无显著性。3个年龄段（4~8、12~16和20~24周龄）的NOD/SCID小鼠脾脏显著低于各组SCID小鼠（P〈0.05）,SCID小鼠脾脏随年龄增加趋势明显;b.NOD/SCID小鼠白细胞数（white blood cell count,WBC）、淋巴细胞绝对值（lymphocytes,LYM#）、红细胞数（red blood cell,RBC）、血红蛋白含量（hemoglobin,HGB）及平均血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）显著低于同周龄SCID小鼠（P〈0.05）,高龄SCID小鼠白细胞水平和淋巴细胞百分比显著高于低龄（4~8周龄）SCID鼠（P〈0.05）。c.NOD/SCID小鼠血清IgG含量显著低于SCID小鼠（P〈0.05）。结论SCID与NOD/SCID小鼠部分免疫指标存在显著性差异。

肺孢子菌肺炎小鼠模型建立及免疫学评价

目的构建肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)小鼠模型并进行免疫学评价。方法采用重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠气管滴注肺孢子菌构建PCP模型,通过实时荧光定量PCR及肺组织六胺银染色进行病原学鉴定,通过苏木素-伊红染色评估肺组织损伤程度,通过免疫荧光染色和流式细胞术进行免疫学评价。结果模型组小鼠感染6周后,肺组织肺孢子菌rRNA拷贝数显著高于假手术组,六胺银染色可见肺孢子菌滋养体和包囊,肺组织肺泡壁增厚,肺间质增宽,大量Gr-1~+中性粒细胞CD68~+巨噬细胞浸润,中性粒细胞活化标志物髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和巨噬细胞活化标志物一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活化水平显著升高,肺内及肺泡灌洗液的中性粒细胞和单核细胞数量及比例显著高于对照组和假手术组。结论采用SCID小鼠进行气管滴注肺孢子菌能构建稳定的PCP小鼠模型,该模型表现出与临床相似的免疫学特征。

SCID鼠人源化及视网膜母细胞瘤模型的建立

目的进行SCID鼠的人源化并建立人化SCID鼠视网膜母细胞瘤模型。方法SCID鼠腹腔注射人脐带血单个核细胞(CBMNC)生理盐水悬液。两周后割尾采血,检测其IgG水平。将10只人化的SCID鼠混分为两组,分别于腹股沟皮下注入视网膜母细胞瘤细胞株(SoRb-70),浓度分别为2×106,2×107,然后对肿瘤的发生率及瘤体大小连续观察,并作统计学分析,最后做病理解剖及组织切片观察。结果该实验经腹腔注射移植入SCID小鼠体内的CBMNC可在小鼠体内存活并大量增殖。移植后2～4周,SCID小鼠血清中即可检测到人免疫球蛋白。视网膜母细胞瘤细胞以两个梯度接种人化SCID鼠10只,观察8周,10只SCID小鼠7只致瘤。结论该模型的建立方法科学合理,在一定程度上可模拟人眼视网膜母细胞瘤的生物学行为,为进一步研究其发生发展机制及免疫治疗提供了一种模型。

荷瘤SCID-hu鼠模型及其肿瘤实验研究现状

严重联合免疫缺陷鼠(severe combined immune deficiency mice,SCID)具有T、B淋巴细胞联合免疫缺陷等生物学特性,可以将人类有关免疫细胞、免疫组织和器官移植入其体内进行人免疫功能重建-SCID-hu鼠。荷瘤SCID-hu鼠模型为人类肿瘤的发病机制、生物治疗等方面的研究提供了良好的实验平台。

三株人白血病细胞系/SCID小鼠模型的建立及其生长特性

本文报道了3株人白血病细胞系(HL-60,CEM和J6-1/SCID)小鼠模型的建立及其生长特点。发现人粒细胞白血病细胞系(HL-60)和T淋巴细胞系(CEM)给SCID小鼠静脉或腹腔移植后均发生全身性白血病,外周血可见白血病细胞。J6-1细胞(可能来自恶性淋巴瘤)眼眶后静脉移植后具有恶性淋巴瘤生长特点,在局部形成瘤块(与瘤细胞漏出血管有关),并侵及颌下淋巴结,无全身性播散。由此可见,人白血病细胞/SCID小鼠模型更类似于人类白血病,是进行人类白血病研究新的良好的模型。

SCID小鼠及其在人类血液学研究中的应用

严重联合免疫缺陷(severe combined im-mune deficiency,SCID)小鼠是研究人类正常造血和白血病的理想模型,有“SCID-人鼠”之称。该小鼠是1983年Bosma等首先在CB-17近交系小鼠[来自BALB/c×C57BL/Ka-IgH-1~b/ICR(17F34)小鼠]中发现的。scid基因定位于16号染色体上,为一隐性基因。该基因与IgH位点无连锁,不引起腺苷脱胺酶(ADA)缺乏。SCID小鼠必须在SPF条件下饲养。

微卫星DNA序列在人-鼠脐血移植模型中的应用

目的 评价微卫星 DNA序列在人 -鼠脐血异种移植中的应用价值。方法 采用 PCR扩增短串联重复序列 (PCR- STR)技术及克隆形成细胞体外培养方法 ,观察移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响。结果 1静脉输注 1～ 5× 10 7个 MNC/只鼠可使受鼠体内表达供者 DNA,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠可以重建小鼠造血功能 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关。结论STR- PCR分析可以从分子水平对移植物植入状态进行微量和准确的鉴定 ,该方法为人 -鼠脐血移植模型的鉴定提供了简便。

选择性雌激素受体β激动剂治疗小鼠子宫腺肌病的实验研究

目的探讨选择性雌激素β受体激动剂WAY-200070对子宫腺肌病异位病灶生长的影响,为从抗雌激素途径治疗子宫腺肌病提供依据。方法将子宫腺肌病患者异位病灶种植于严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)颈背部皮下,建立腺肌病鼠模型。移植后第2天给予药物,实验组(n=26)颈背部皮下注射WAY-200070,对照组(n=25)颈背部皮下注射等体积生理盐水(NS),连用14d;移植物取出后称重,采用免疫组化法测定腺体和间质,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定雌激素β受体(ERβ)表达。结果实验组移植前后病灶重量的改变与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组腺体萎缩,结构不完整,间质伴有不同程度的坏死,实验组CD10及细胞角蛋白CK的表达显著低于对照组(P=0.006);实验组和对照组ERβ表达比较,差异无统计学意义(P=0.1419)。结论ERβ激动剂WAY-200070作用于SCID小鼠移植子宫腺肌病异位病灶能够引起病灶重量改变、腺体和/或间质的改变,并可能通过作用于雌激素β受体发挥作用。

胰腺癌严重联合免疫缺陷小鼠移植瘤模型的建立

动物模型是进行转化医学研究的重要工具。本文拟介绍一种胰腺癌严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠移植瘤模型的建立方法。一、材料与方法1．实验动物：采用5～6周龄的雌性SCID小鼠，饲养于无特定病原体（SPF）条件。

人脐血移植SCID小鼠的实验研究

目的 探讨人脐血造血细胞在严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内植入、分化及造血调控。方法 采用流式细胞技术及克隆形成细胞体外培养方法观察了移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响及移植物抗宿主反应。结果 1静脉输注 1～ 5× 10 7个脐血单个核细胞 (MNC) /只鼠可使受鼠体内表达嵌合体 ,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠 :可以重建造血功能并在小鼠骨髓微环境中分化表达 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关 ;可引起受鼠移植物抗宿主反应 ,并与输入细胞剂量有关。结论 脐血造血干细胞不仅可以在受鼠骨髓微环境中存活 ,还可进一步分化为各系特异细胞 ,重建造血。

SCID小鼠在银屑病发病机制研究中的应用

银屑病发病机制还不十分清楚 ,以往研究发现本病与角质形成细胞、成纤维细胞、T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞和微血管内皮细胞的异常有关。但是因为缺乏适宜的动物模型使银屑病的研究受到影响 ,SCID小鼠的使用为研究单一相关因素在银屑病发病机制中的作用提供了一个新的途径。现就SCID小鼠在银屑病发病机制研究中的应用进行综述。

组织工程皮肤及人脾淋巴细胞植入重度联合免疫缺陷小鼠的研究

目的组织工程皮肤已逐渐应用于临床,但其免疫原性仍存在争议。通过重度联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠重建人免疫系统,观察移植的组织工程皮肤的免疫排斥情况。方法按朱堂友等的方法体外构建组织工程皮肤和无细胞真皮基质。取雄性4～6周龄SCID小鼠20只,体重16～17g,随机分为4组(n=5)。A、B、C组于小鼠侧腹部切除1cm×1cm大小全层皮肤后,A组移植组织工程皮肤,B组移植自愿捐赠的人包皮,C组将无细胞真皮基质埋植皮下;D组为正常对照,不作处理。移植术后2周A、B、C组取材行HE染色,观察各移植材料存活情况。并于各组小鼠腹腔注射3×107个人脾淋巴细胞,4周内定期行大体、组织学、免疫组织化学、人IgG免疫荧光染色,观察是否发生免疫排斥反应。结果HE染色示A组组织工程皮肤具有真、表皮双层结构,类似人正常皮肤组织;B组人包皮仍保持人皮肤的正常组织结构;C组无细胞真皮基质位于原位,无明显被降解迹象。植入人脾淋巴细胞后,A、C、D组HE染色未见明显炎性细胞浸润;同时间点B组炎性细胞浸润程度均明显高于其他3组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组植入人脾淋巴细胞2周后表皮全层细胞抗人角蛋白14单克隆抗体(monoclonal anti-body,mAb)染色阳性,抗人Ⅳ型胶原mAb染色阳性;A、C、D组抗人CD3、CD4、CD8 mAb染色均未见阳性细胞;B组2周后真皮、皮下组织中大量抗人CD3、CD4和CD8 mAb染色阳性细胞。A、C、D组于植入人脾淋巴细胞后人IgG免疫荧光染色均未见阳性结果;B组3周后真皮深部大血管管壁人IgG mAb免疫荧光染色阳性。结论组织工程皮肤免疫原性较弱,植入SCID小鼠后未见明显的免疫排斥反应。

SCID小鼠耳廓皮下滑膜移植模型的建立及其在英夫利昔疗效评估中的应用

目的:建立一种简便、可靠、易于给药及观察的小鼠荷人类风湿关节炎(RA)滑膜模型,为抗RA药物疗效及其机制的体内研究提供实验系统.方法:无菌获取4例RA患者膝关节滑膜组织,修剪成3 mm3大小,移植入严重联合免疫缺陷小鼠(SCID)耳廓皮下,同时以2例OA滑膜作为对照.移植入4 wk后开始,给予TNF-αmAb体英夫利昔治疗4 wk,以无关抗人IgG1抗体作为对照.隔日观察,根据移植物红肿程度对炎症进行评分.移植入8 wk后,处死小鼠取出移植物,进行苏木素-伊红(HE)染色病理分析.结果:人滑膜在SCID小鼠体内存活至少8 wk,移植后RA滑膜炎症大体评分高于OA滑膜组(P<0.05);移植前后RA滑膜病理特点无明显变化,经局部注射TNF-α抗体治疗后炎症评分降低(P<0.05),病理检测示滑膜增殖及淋巴细胞浸润评分降低(P<0.05).结论:SCID-HuRAg模型的病理特点与RA患者体内类似;经局部注射生物靶向药物英夫利昔后有相应改善,是对RA滑膜炎症机制进行体内研究的一种简便实用模型.

SEC对胶质瘤的体内杀伤及其联合放射治疗的研究

目的:观察SEC活化的淋巴细胞对胶质瘤的体内杀伤作用,并观察SEC联合手术、放疗、化疗对胶质瘤的治疗效果。方法:选用T、B淋巴细胞联合免疫缺陷的SCID小鼠,通过建立荷瘤动物模型及HuPBL-SCID免疫嵌合模型,观察肿瘤生长曲线,荷瘤小鼠生存曲线。30例胶质瘤患者,均经手术切除、放疗、化疗,随机分对照组,处理1组(全身应用SEC),处理2组(局部应用经SEC活化的淋巴细胞)。结合MRI片观察疗效。结果:生长曲线显示:A组、C组、B组对胶质瘤的抑制率分别为58·5%、46·2%和36·3%。生存期曲线显示:对照组(D组)小鼠于第27天开始出现死亡,至第40天全部死亡,而A组小鼠在40天才开始出现死亡,其中有50%的小鼠到观察的最后时期(60天)仍生存良好。临床资料显示对照组有效率为40%,处理1组及处理2组有效率为50%和62·5%。结论:SEC在胶质瘤移植后的人源化免疫嵌合模型(SCID/HuPBL/SHG44)中显示出强大的抗胶质瘤作用。SEC与手术、放疗、化疗结合,能明显提高临床病人的疗效。

人脐血细胞在SCID小鼠体内生长特性的研究

本实验将人脐血和骨髓单个核细胞,分别经腹腔输入C.B-17SCID小鼠体内,动态观察了受体内人CD3抗原表达及增殖能力。结果输入脐血或骨髓单个核细胞后,受体内均有逐渐增加的人CD3细胞(分别从2.0％、1.5％增至6.8％、5.4％),且脐血组高于骨髓组。接种后60d,二组实验小鼠骨髓CFU-GM产率明显高于对照组(P<0.01),脐血组高于骨髓组(P<0.05)。在60d时受体小鼠外周血、骨髓、肝、脾、肺组织和骨髓CFU-GM集落,用PCR方法检测出人Y染色体特异DNA片段。结果表明,输注人脐血或骨髓细胞到SCID小鼠腹腔后,可在体内长期生长且具有增殖能力。这种模型的建立为今后造血细胞体内研究提供了一种良好途径,也进一步以动物实验证实脐血造血干/祖细胞具有不同于骨髓造血细胞的生物学特性。