猪带绦虫不同阶段45W-4BX和18kD基因联合表达及保护性分析

【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原,为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列,经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞,酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接,构建双基因融合表达载体pGEX-4BX/18。用IPTG诱导的表达产物,进行SDS-PAGE电泳、Western blot分析活性。分别用300μg重组GST-4BX、GST-4BX/18蛋白免疫猪,间接ELISA测定抗体水平。感染后90 d剖检计算各组的减虫率,比较评价重组抗原的免疫保护性。【结果】4BX/18 kD在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为50 kD的融合蛋白,并能被人囊虫和感染初期的猪囊虫阳性血清所识别。重组抗原免疫猪后45 d抗体达到峰值,联合表达重组抗原的减虫率为97%,GST-4BX免疫组的减虫率为95%。【结论】重组抗原4BX和4BX/18kD均具有较好的免疫保护效果,有望利用它们研制出抗猪囊尾蚴病的高效疫苗。

猪带绦虫TSO45W-4BX与猪CD58分子在大肠埃希菌中的联合表达

目的以猪CD58为分子佐剂,将CD58基因与猪带绦虫疫苗候选抗原基因TSO45W-4BX联合表达,寻找新型抗猪囊尾蚴疫苗。方法分别以重组质粒pGEM-4B和pGEM-CD58为模板,PCR扩增猪带绦虫TSO45W-4BX基因和猪CD58基因,将TSO45W-4BX与酶切处理的pGEX-4T-1定向连接,转化大肠埃希菌JM109,重组质粒经鉴定正确后,在其下游酶切插入CD58基因,PCR扩增和测序证明阅读框正确后,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE))和蛋白质印迹法(Westernblotting)分析表达产物的免疫活性。结果pGEX-4BX和pGEX-4BX/CD58分别表达Mr41000和Mr69000的融合蛋白,pGEX-4BX表达产物主要以可溶性形式存在,而pGEX-4BX/CD58却以包涵体形式存在,但两者都能被囊尾蚴病患者血清识别。结论TSO45W-4BX与CD58基因联合表达,TSO45W-4BX仍具有免疫活性。

宫颈癌中α/β-连接素的联合表达及意义

目的 探讨α- 连接素(α- catenin,α- cat)和β- 连接素(β -catenin,β- cat)在宫颈癌中的表达及与生物学行为的关系。方 法 应用免疫组化S P法检测α cat和β cat在41例子宫颈癌和10例正常子宫颈组织中的表达。结果 α- cat和β- cat在宫颈 癌异常表达分别为68.3%和41.5%,α -cat的异常表达与宫颈癌的分化程度、有无淋巴结转移和肌层浸润相关(P<0.01,P< 0.05,P<0.05)。β- cat异常表达率在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组(P<0.01),α- cat和β -cat与宫颈癌的病理类型、 细胞增殖程度、临床分期以及患者年龄无关(P>0.05)。结论 宫颈癌广泛存在α- cat和β -cat异常表达。α- cat,β- cat与宫 颈癌的分化和浸润转移密切相关,检测α- cat和β- cat联合表达可以更精确而灵敏地预测宫颈癌的浸润与转移。

鸡贫血病毒VP1和VP2蛋白在家蚕中的联合表达

将鸡贫血病毒 VP1和 VP2基因分别克隆入转移载体 p Bac PAK8中 ,获得重组转移质粒 p Bac-vp1和 p Bac-vp2。以上两质粒分别与Cvn 酶切线性化的亲本病毒 Bm-Bac PAK6DNA共转染家蚕细胞 ,通过蓝白斑筛选 ,纯化得到重组病毒 Bm-vp1和 Bm-vp2。PCR分析表明 Vp1和 Vp2基因已整合进杆状病毒基因组中。将 Bm-vp1和 Bm-vp2共感染 5龄家蚕 ,通过表达产物免疫 SPF鸡产生的抗血清与 CAV感染的 MDCC-MSB1细胞的间接荧光抗体分析 ,证明表达产物能诱导鸡产生相应的抗体。该研究表明 ,表达 VP1和 VP2蛋白的重组家蚕杆状病毒 ( recombinant Bm NPV)

MDV和AIV主要保护性抗原基因在鸡痘病毒中的联合表达

将强启动子Ps插入载体7S中构建成插入载体7SP,将鸡马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白B(gB)基因和禽流感病毒(AIV)血凝素H9A基因共同克隆到插入载体7SP中,获得重组转移质粒7SPGA,通过酶切鉴定获得Ps-gB与P7.5-HA同向的转移质粒,再将报告基因盒PL11-LacZ插入转移质粒7SPGA得7SPLGA,将质粒7SPLGA与禽痘病毒疫苗株共转染鸡成纤维细胞,通过蓝白斑筛选纯化得到重组病毒rFPV-Ps-gB-P7.5-HA,以间接免疫荧光法证实gB基因和HA基因同时得到表达。该研究为探索新型基因工程苗打下了良好的基础。

多种癌基因联合表达判断非小细胞肺癌预后的研究

目的 探讨多种癌基因蛋白表达与非小细胞肺癌 (NSCLC)预后的关系。方法 1981～ 1994年 ,15 8例符合条件患者进入本研究。免疫组化方法检测Pan -ras,cmyc ,c -erbB2 ,EGFR和p 5 3等基因蛋白表达。Kaplan -Meier法计算生存率、局控率及远处转移率 ,Log-Rank法检验差异性 ,多因素分析为Cox模型。用记分方法探讨多种癌基因表达与预后关系。结果 全组 5年生存率、局控和远处转移率分别为 4 4 %、6 3%和 4 0 %。单个癌基因单因素分析 :Pan -ras、p 5 3与NSCLC远处转移有关 (P=0 .0 39,0 .0 6 )。多因素分析 :5个癌基因与NSCLC三项观察指标均无关。采用记分方法综合多种癌基因蛋白表达分析可提高其对NSCLC预后预测意义。结论 1.多种癌基因综合分析较单一癌基因对NSCLC预后判断更具价值。 2 .

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因和流感病毒HA基因的联合表达及应用

参照已公布的流感病毒血凝素基因(HA基因)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列,设计并合成一对引物P1、P2,以RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORF7片段(约410bp),其中含HA基因主要核苷酸序列(33bp)。用BamH Ⅰ、Xho Ⅰ分别对扩增出的片段及pET32a质粒进行酶切,连接后构建了重组质粒pETHN并转化到BL21(DE3)宿主菌中诱导表达。用纯化后的表达产物与流感病毒血凝素单抗及乳胶建立了诊断猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的乳胶凝集试验。检测结果显示:该方法有良好的特异性及敏感性,与IDEXX公司FLISA检测试剂盒符合率达93.8％。

胃癌中α-及β-连接素联合表达

目的 :探讨α 及β 连接素 (catenin)联合表达与胃癌侵袭转移间的关系。方法 :应用ABC染色法在同一胃癌术后标本上进行α 及β catenin抗体染色 ,计数胃癌组织中阳性细胞所占的比例。 结果 :正常胃黏膜上皮细胞全部表达α 及 β catenin。 38例胃癌组织中α 及 β catenin阳性表达率分别为2 8 9% (11/ 38)和 5 0 % (19/ 38)。存在淋巴结转移的胃癌其α 及 β catenin的阳性表达率分别为 8 7%及 2 6 1% ,均远低于无淋巴结转移者 (P <0 0 1)。α 与 β catenin共同阳性表达占 30 % ,共同阴性表达占 36 9%。α catenin(- ) / β catenin(- )表达者最易发生淋巴结转移 ,α catenin(+ ) / β catenin(- )表达者易发生肝转移。结论 :检测α ,β

猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达

扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F18ab菌毛单克隆抗体对联合表达的融合蛋白质进行检测鉴定。

口蹄疫病毒P1和3C基因的联合表达

口蹄疫病毒P1和3C基因联合表达能够产生完整的口蹄疫病毒衣壳蛋白,并形成无核酸的与原病毒外形一致的全新的空衣壳,该空衣壳具有与口蹄疫病毒颗粒相同的抗原特性,免疫动物后能诱导产生抗口蹄疫病毒特异性中和抗体,是开发安全高效口蹄疫重组疫苗的理想途径。论文对口蹄疫P1、3C基因及其对应的蛋白功能和P1、3C基因联合表达研究进行综述,对P1、3C基因联合表达重组疫苗的潜在优点进行了讨论。

大肠癌中C-erbB-2、P_(21)基因联合表达的研究

目的:探讨C-erbB-2、P21两种基因蛋白联合表达在大肠癌发生、发展中的作用及其与大肠癌临床病理特征间的关系。方法:采用免疫组织化学S-P方法,对大肠癌组织(20例)、癌切缘组织(20例)和大肠腺瘤(10例)、炎性息肉(20例)、炎性溃疡(10例)、血吸虫病(6例)及正常大肠粘膜组织(10例)同步检测C-erbB-2、P21两种基因蛋白。结果:P21与C-erbB-2蛋白在各组织中单阳表达率之间差异无统计学意义(P>0·05),而癌组织全阳率与其他组织相比差异有统计学意义(P<0·05),高分化腺癌分别与中、低分化及粘液腺癌比较差异有统计学意义(P<0·05)。C、D期高于A、B期,且差异有统计学意义(P<0·05)。结论:C-erbB-2、P21蛋白的阳性表达为大肠癌发生的早期表现,C-erbB-2、P21蛋白检测可作为大肠癌早期诊断的指标。

EZH2、p-ERK1/2、p-STAT和MYC联合表达在EZH2阳性霍奇金淋巴瘤及其相关大B细胞淋巴瘤鉴别诊断中的应用

EZH2是一种重要的甲基转移酶,在不同肿瘤的发生中起重要作用。作者前期实验发现,EZH2在一系列侵袭性B细胞淋巴瘤(ABCLs)、T细胞淋巴瘤和组织细胞肿瘤中表达,同时伴有细胞内信号分子p-ERK、MYC和p-STAT3的不同程度表达,而这些信号分子均是EZH2表达的潜在调节因子。作者选择26例结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤(NLPHL)、31例经典型霍奇金淋巴瘤(cHL)、19例富于T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(THRLBCL)及9例形态学介于弥漫大B细胞淋巴瘤和经典型霍奇金淋巴瘤(BCLu-DLBCL/cHL)之间的未分类B细胞淋巴瘤,采用EZH2、p-ERK、MYC和p-STAT3进行了共表达研究。结果发现,NLPHL中肿瘤性LP细胞和cHL中R-S细胞,以及THRLBCL和BCLu-DLBCL/cHL中的肿瘤细胞均强阳性表达EZH2。

细粒棘球蚴AgB亚单位基因的联合表达和血清学评价

目的为进一步提高AgB抗原在诊断中的敏感性和特异性,将细粒棘球蚴AgB1和AgB2两个亚单位基因在同一载体中进行联合表达,并对联合表达的重组抗原和单基因表达的AgB1、AgB2在血清抗体检测中的差异进行比较研究。方法在表达载体PET32a中构建AgB1+AgB2(AgBs)联合基因的重组质粒,用ELISA检测重组抗原与病人血清的反应性。结果构建了AgBs重组质粒,经测序证实插入的联合基因片段序列正确。AgBs重组质粒表达的融合蛋白分子量为38kDa,为不溶性蛋白。联合表达抗原AgBs对细粒棘球蚴病(CE)血清的敏感性为84.4%,特异性为80.5%;单基因表达的AgB1和AgB2的敏感性分别为75.6%和57.8%,特异性分别为72.6%和91.2%。结论成功构建了AgB亚单位联合表达基因,联合表达的AgBs抗原对CE血清的诊断价值优于单基因表达的AgB1或AgB2抗原。

乙酰肝素酶、MMP-9在胰腺癌中的联合表达及临床意义

胰腺癌恶性度高、病情隐匿及预后差,是危害人类健康最为严重的恶性肿瘤[1].基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase9,MMP-9）是一类与肿瘤发生、侵袭和转移密切相关的蛋白水解酶.研究表明MMP-9在多种肿瘤组织中的表达增加[2].笔者采用免疫组织化学方法检测胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺组织中的HPA和MMP-9的联合表达,以探讨二者在胰腺癌中的表达特点、相互关系及其临床意义.

胃癌患者外周血细胞角蛋白和癌胚抗原mRNA联合表达及意义

近年来,分子生物学技术的发展为胃癌诊断及预后判断提供了新的手段,众多研究显示,巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术可检出胃癌患者周围静脉血中微量癌细胞,并经随访发现,这些播散癌细胞有明确预后意义.本研究采用RT-PCR技术,检测胃癌患者外周血中细胞角蛋白(CK)20mRNA及癌胚抗原(CEA)mRNA的表达情况,并探讨其临床意义.

舞蹈治疗联合音乐治疗改善高校大学生心境障碍的干预研究——一种多样联合表达疗法的模式建立与疗效初探

目前国内诸多干预研究已证实舞蹈治疗或其他形式艺术干预对高校大学生因精神压力大而产生的焦虑、抑郁、睡眠障碍和人际关系敏感等心理健康问题有积极影响,但对于各类艺术表达形式的整合干预模式的研究却屈指可数。本研究以心境障碍的在校大学生为研究对象,采用混合方法的探索性实验研究设计,通过舞蹈治疗联合音乐治疗的多样联合表达疗法对其实施为期6周的团体干预,旨在探索和开发适用于中国高校大学生的多样联合表达治疗模式以改善其心理健康问题。数据使用中文版SAS、SDS抑郁自评量表、汉密尔顿抑郁和焦虑量表进行收集,并以焦点小组访谈、整合干预过程及临床医生的评定对其进行多维度的定性疗效评估。结果显示,舞蹈治疗联合音乐治疗的干预模式对于大学生焦虑、抑郁、人际交往问题的改善,及自我效能感的提升均有显著效果。

大肠癌组织中nm23H_1和VEGF联合表达的临床意义

本文分析采用免疫组织化学法检测60例大肠癌切除标本nm23H1和VEGF的表达情况,探讨其联合表达的临床意义。结果表明,大肠癌中nm23H1和VEGF表达呈负相关,联合表达可作为评价大肠癌浸润与转移状况的生物学指标。

表皮生长因子受体和转化生长因子-α联合表达提示乳腺癌病人预后更差

据《Int. J.Cancer(Pred.Oncol.)》2000年89卷第6期报道 表皮生长因子受体(EGF-R)及其配体转化生长因子-α(TGF-α),通过自分泌生长调节系统,对包括乳腺癌在内的几种人类癌症发挥有重要作用。

MDM2p53蛋白在人脑胶质瘤中的表达意义及相关性研究

目的检测MDM2、p53蛋白在胶质瘤中的表达,探讨两基因蛋白在胶质瘤形成和发展中的作用以及二者的相关性。方法对已明确诊断的48例脑胶质瘤利用LSAB免疫组化法检测MDM2、p53蛋白的表达。结果MDM2、p53蛋白阳性率分别为22.9%、41.7%。在高级别的肿瘤(Ⅲ、Ⅳ级)中p53表达率63.2%,明显高于低级别(Ⅱ级)的肿瘤(27.6%)(p<0.05)。在不同分级的胶质瘤中,MDM2表达率及阳性程度没有显著差异。P53蛋白表达多出现在MDM2蛋白阴性的病例中,两者联合表达者仅1例。结论P53在胶质瘤中的异常表达与肿瘤的分化程度相关;MDM2基因异常是胶质瘤发生过程中的早期事件。