H5和H9亚型禽流感病毒联合RT-PCR检测方法的建立

目的建立H5和H9亚型禽流感病毒(AIV)联合RT-PCR检测方法。方法针对H5和H9亚型AIV血凝素(HA)基因,在其裂解位点两侧设计引物。在确定单项RT-PCR检测方法反应条件基础上,建立、优化联合RT-PCR反应体系和反应条件,并通过相关病毒检测试验,验证其敏感性和特异性。结果所建立的H5和H9亚型联合RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便、快捷等特点。结论该方法可用于AIV的检测及致病性分析。

犬瘟热和犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的应用

塔里木农垦大学乔军、解放军大学夏咸柱、东北农业大学何宠彬等对此课题进行了研究。他们利用犬瘟热(CDV)和犬冠状病毒(CCV)牧异性引物对同一样品中CDV和CCV的RNA模板进行联合RT—PCR扩增，并优化其扩增条件，得到两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带，且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。其敏感性试验表明：该联合PCR能检测出10^-4倍稀释的CDV模板(10^6.6TCID50／0．1mL)。对7份临床发病犬病科检测，其阳性检出率可高于电镜负染检查。这表明此法有高度敏感、特异、准确、快速等特点，适用于当前民用和军用兽医临床对CDV、CCV的检测和对犬的其他疾病的鉴别诊断。

检测犬细小病毒和犬瘟热病毒联合PCR/RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立一种能同时检测犬细小病毒(CPV)和犬瘟热病毒(CDV)的快速鉴别PCR方法,试验根据GenBank中登录的CPV NS1基因和CDV F基因序列设计2对特异性引物,通过综合CPV单项PCR方法与CDV单项RT-PCR方法的扩增程序,最后确定出联合PCR/RT-PCR方法的最佳退火温度、延伸时间和循环次数等反应程序,并对扩增产物进行克隆鉴定,同时进行特异性试验、敏感性试验和临床病料的检测。结果表明:建立的联合PCR/RT-PCR方法可以在一个扩增体系内同时检测两种病毒,其最佳联合PCR/RT-PCR扩增退火温度为50.8℃;经特异性分析,联合PCR/RT-PCR方法对犬副流感病毒(CPIV)、狂犬病毒(RV)、犬腺病毒(CAV)的检测为阴性;经敏感性分析,联合PCR/RT-PCR方法在模板浓度稀释到1×10~0 TCID_(50)时仍能见到较清晰的特异性条带;应用联合PCR/RT-PCR方法对延吉市36份犬病料样本进行检测,CPV阳性率为25.00%,CDV阳性率为33.33%,CPV和CDV混合感染阳性率为8.33%。说明试验建立的CPV和CDV联合PCR/RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高,可用于犬细小病毒病和犬瘟热病毒病的临床诊断。

促排卵治疗后子宫内膜降钙素mRNA表达水平的分析

目的了解多囊卵巢综合征患者经过促排卵治疗妊娠率较低的原因,探讨其有关子宫内膜的分子学改变。方法采用逆转录-联合酶链反应(RT-PCR)技术检测多囊卵巢综合征患者66例(研究组)促排卵后子宫内膜中的降钙素mRNA表达水平,研究组分别进行不同的促排卵治疗方案(研究组A、研究组B),另选择因输卵管与男性不育因素的女性不孕患为对照组,比较降钙素mRNA表达水平的差异。结果对照组、研究组A、研究组B的子宫内膜降钙素mRNA的半定量分析结果:(0.89±0.08)、(0.79±0.08)、(0.82±0.07)。研究组A、研究组B显著低于对照组(P均<0.05),研究组A、研究组B比较无显著性差异(P>0.05)。结论促排卵治疗可使着床期子宫内膜降钙素mRNA的表达水平下降,从而导致低临床妊娠率。