联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:研究联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)对乳腺癌细胞的抑制作用及其机制。方法:制备HC-NPs,培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞。以对数生长期的细胞为研究对象。分成对照组和实验组,对照组及实验组分别予以脂质体纳米颗粒空载(NPs)、HC-NPs处理。测定细胞生长抑制率、移行愈合率,并测定相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、Bax、Survivin、MMP-9、p-STAT3的表达情况。结果:HC-NPs处理人乳腺癌MDA-MB-231后,与NPs对照组相比,可明显抑制细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。FCM法检测实验组凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期测定有显著差异,P均<0.05。HC-NPs作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h后,细胞周期停滞在G_2期。Transwell法检测到HC-NPs处理后,测定侵袭迁移,与对照组比较,HC-NPs组侵袭迁移能力明显低于对照组(P均<0.05)。Western blotting法测定相关蛋白p-STAT3、Cyclin D1、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达情况,HC-NPs组明显降低且低于对照组,而Bax明显增高且高于对照组,总STAT3水平无明显差异。结论:HC-NPs对乳腺癌细胞的抑制作用机制与下调JAK/STAT信号通路有关。

联氨基姜黄素对大鼠肝癌的防护作用及其机制

目的探讨联氨基姜黄素(HZC)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导雄性SD大鼠肝癌发生、发展的影响。方法根据实验设计将选取的80只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(10只)、药物对照组(10只)、模型组(30只)、干预组(30只)。正常对照组以80 mg/kg给予生理盐水腹腔注射;药物对照组以80 mg/kg给予HZC腹腔注射;模型组以50 mg/kg给予DEN腹腔注射;干预组以50 mg/kg DEN和80 mg/kg HZC腹腔注射,以上4组给药方法均2次/w,12 w后停药。待24 w实验结束,利用组织学、免疫组化和组织生化等检测方法,观察HZC对DEN诱发大鼠肝癌的影响。结果正常对照组、药物对照组肝组织均未发生癌变。与模型组相比,干预组肝癌发病率低、存活率高、肝脏癌结节小而少,差异具有统计学意义(P<0.05)。干预组体重、肝重、肝指数与模型组比较差异显著(P<0.01)。两个对照组均具有正常肝小叶结构,模型组显示出癌灶;干预组显示癌灶伴片状坏死。免疫组化显示两个对照组无增殖细胞核抗原(PCNA)染色,干预组肝组织PCNA阳性率明显低于模型组(P<0.01)。肝组织血浆中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、总胆红素水平(TBL)也显著低于模型组(P<0.05)。结论HZC抑制了DEN诱发大鼠肝癌的进程,并具有防护作用,对降低肝癌发生和减少DEN对大鼠肝脏的毒性作用具有显著效果。

联氨基姜黄素诱导DC细胞成熟抑制小鼠皮肤鳞癌进展的机制研究

目的研究联氨基姜黄素诱导DC细胞成熟抑制小鼠皮肤鳞癌进展的机制。方法梯度浓度(1/5/10/50/100/500μM)的联氨基姜黄素处理SCC细胞系SCL-148 h,MTT检测细胞活性。同时构建自发性SCC小鼠模型,给予药物处理观察肿瘤进展情况,流式检测肿瘤组织树突状成熟状态。Western blot检测联氨基姜黄素处理前后树突状细胞STAT3通路的变化。结果不同浓度的联氨基姜黄素在处理SCC细胞系SCL-1的过程中可能会对细胞的活性产生抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。半数最大抑制浓度值(IC50)为18.7μM。正常C57BL/6小鼠在为期2周的肠胃给药处理以后,通过与对照组进行比较发现其体重的变化并不显著。自发性SCC小鼠模型在接受联氨基姜黄素处理后,抗肿瘤的效果较为突出,差异有统计学意义(P<0.05)。流式检测SCC小鼠的肿瘤组织,发现联氨基姜黄素处理可促进树突状细胞成熟(CD80/CD86明显上调),差异有统计学意义(P<0.05)。进一步Western blot检测联氨基姜黄素处理前后树突状细胞STAT3通路发现处理组STAT3磷酸化水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联氨基姜黄素可在体外杀伤SCC细胞,并在体内促进树突状细胞成熟进而抑制SCC进展,其可能的机制是通过抑制STAT3磷酸化,抑制STAT3通路。

姜黄素和姜黄素联氨基抗肝癌作用比较及机制研究

目的:比较姜黄素(CUR)和其衍生物联氨基姜黄素(HZC)的体内外抗肝癌作用及机制。方法:采用MTT法检测CUR或HZC(2.5、5、10、20、40、80μmol/L)对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测CUR或HZC(10、20、40μmol/L)对HepG2细胞周期分布和凋亡情况的影响;采用Western blotting法检测CUR或HZC(10、20、40μmol/L)对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响。将雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、CUR对照组(n=10)、HZC对照组(n=10)、肝癌模型组(n=30)、CUR防护组(n=30)、HZC防护组(n=30)。CUR对照组和HZC对照组大鼠分别腹腔注射CUR或HZC(剂量均为80 mg/kg);模型组、CUR防护组和HZC防护组大鼠均腹腔注射对二乙基亚硝胺(50 mg/kg)建立肝癌模型,同时2种药物防护组大鼠分别腹腔注射CUR或HZC(剂量均为80 mg/kg),每周2次,连续给药12周。给药期间,记录大鼠体质量变化和死亡情况;24周后,计算大鼠肝脏指数并观察其外观,统计肝癌结节数;采用苏木精-伊红染色法观察大鼠肝组织病理学变化并计算肝癌细胞核分裂指数;采用免疫组化法检测大鼠肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)指数。结果:CUR和HZC均能显著升高HepG2细胞的增殖抑制率、G0/G1期细胞周期百分比和凋亡率(P<0.05);均能显著降低细胞中磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-xl蛋白的表达水平,显著升高Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(Cyt-c)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)、Caspase-3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PAPR)蛋白的表达水平(P<0.05);且HZC的上述作用均显著强于CUR(P<0.05)。动物实验结果显示,3个对照组大鼠无死亡,未发生肝脏癌变,肝脏外观和组织切片未见病理变化;体质量及增量、肝脏指数、癌细胞核分裂指数、肝组织PCNA指数组间比较差异均均无统计学意义(P>0.05)。与肝癌模型组比较,CUR防护组和HZC防护组大鼠的存活率均显著升高,肝癌发生率和癌结节数均显著降低(P<0.05);体质量及增量均显著升高,肝脏指数、癌细胞核分裂指数、肝组织PCNA指数均显著降低(P<0.05);肝脏外观和组织切片均有一定程度病变,可见癌灶伴局灶性坏死或伴大斑片状坏死;但2种药物防护组上述指标的改善程度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:HZC能通过抑制JAK2/STAT3信号通路和调节线粒体内源性通路的活化,发挥抑制HepG2细胞增殖、诱导其凋亡的作用,且比CUR具有更强的体外抗肝癌活性;但与CUR比较,HZC对肝癌模型大鼠各项抗肝癌指标的改善未见显著差异。

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的探讨联氨基姜黄素(hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(NPs)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G2/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加(P<0.01),抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子(p-STAT3)以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对小鼠乳腺癌4T1细胞生物学行为的影响

目的探讨联氨基姜黄素(Hydrazinocurcumin,HC)脂质体纳米颗粒(Liposome nanoparticles,NPs)对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法采用薄膜分散-超声法制备HC-NPs,透射电镜检测纳米颗粒的粒径大小。将4T1细胞分为PBS组、NPs组和HC-NPs组,分别加入10%(v/v)PBS、10%(v/v)NP、10%(v/v)HC-NPs,培养24 h后,MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;刘氏染色法检测细胞的形态;Transwell试验检测4T1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测转导和转录激活因子STAT3及细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移相关蛋白的表达水平。结果透射电镜下可见HC-NPs为150 nm左右的脂质体颗粒。HC-NPs对4T1细胞的增殖抑制率明显高于NPs组(P<0.01);与PBS组和NPs组相比,HC-NPs可使细胞形态不规则,诱导细胞周期发生G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),明显抑制细胞侵袭和迁移(P<0.01)及STAT3的激活,下调CyclinD1、c-Myc、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达,同时上调Bax的表达(P<0.05)。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制4T1细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡。

HC-NPs对RAW264.7-4T1共培养体系中乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探索联氨基姜黄素纳米脂质体(hydrazinocurcumin-loaded nanopaticles,HC-NPs)通过抑制STAT3(signal trannsduction and activators oftranscription-3)活化,对RAW264.7-4T1共培养体系中4T1细胞增殖及凋亡的影响。方法:以乳腺癌细胞—巨噬细胞共培养体系中的乳腺癌细胞4T1为研究对象,分PBS对照组和10%NPs对照组、10%HC-NPs处理组采用检测细胞形态学变化,台盼蓝染色计数细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化,Western blot检测STAT3、p-STAT3、c-MYC、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果:刘氏染色发现经10%HC-NPs处理后,4T1细胞形态变圆,台盼蓝染色计数显示细胞存活率减低,且与对照组有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测发现HC-NPs处理组细胞凋亡率为(24.21±2.37)%,细胞周期结果显示HC-NPs组处理的细胞主要阻滞在G_2/M期为(63.70±2.53)%,与对照组有显著性差异(P<0.05);Western blot检测显示,HC-NPs组4T1细胞的p-STAT3、c-MYC表达明显减少,Bcl-2/Bax比值下降,而总STAT3水平无明显变化。结论:HC-NP_s能通过抑制STAT3活化(p-STAF3),影响细胞增殖、凋亡相关基因,抑制共培养体系中乳腺癌细胞4T1的增殖,促进其凋亡。