邻联茴香胺的电化学和薄层光谱电化学研究

采用电化学和薄层光谱电化学方法 ,以三电极系统在酸性介质中对邻联茴香胺(ODA)电氧化性质进行了研究 ,测得邻联茴香胺的克式量电位、电子转移数和扩散系数 ,实验结果表明 。

进口与国产邻联茴香胺测定血清铜蓝蛋白氧化活力比较

血浆铜蓝蛋白(cerulopasmin,CP;EC 1.16.3.1)属于氧化还原酶,在肝豆状核 变性时显著降低,在妊娠、心肌梗塞、传染病、肝癌及转移性肿瘤等均明显升高。

乙醇对超氧化物歧化酶活性邻联〔二〕茴香胺染色法的影响

超氧化物歧化酶(SOD)活性染色法有硝基四氮唑蓝染色法(又称负染法)和邻联[二]茴香胺染色法(又称正染法)两种,后者是由 Misra 在邻联[二]茴香胺 SOD 活力测定法的基础上建立的。虽然该法具有许多优点,但是普遍认为其染色效果较难掌握,故应用不及负染法广泛,迄今我们仅见一篇应用报道。

酶性DNA(Ⅵ)——应用重氮化联大茴香胺检测DNA的酯酶活性

应用自行合成的重氮化联大茴香胺检测萘酚，表明ＤＮＡ能催化乙酸萘酯的水解，印证了以前关于ＤＮＡ具有酯酶活性的实验结果．ＤＮＡ对重氮化联大茴香胺与萘酚的显色无增色效应，因而可以推论ＤＮＡ 在反应体系中确能促进萘酯水解而产生萘酚．

植物过氧化物酶催化联二茴香胺氧化机理探讨

用高效液相色谱法 (HPLC)对大麦苗含硒过氧化物酶催化联二茴香胺 -H2 O2 反应体系的主要氧化产物进行了分离纯化 ,并用UV ,IR ,MS和NMR进行了结构表征 .实验结果表明 :该体系的主要反应产物为联二茴香胺的二聚体 .在此基础上 ,对含硒过氧化物酶催化联二茴香胺 -H2 O2 反应的机理作了进一步的推测 .

葡萄糖氧化酶反应体系的动力学性质及在葡萄糖分析中的应用

本文运用紫外－可见光谱仪研究了葡萄糖氧化酶偶联辣根过氧化物酶－邻联茴香胺染料体系的催化动力学性质，通过控制酶和染料的含量，确定了反应呈假一级反应的葡萄糖浓度范围，在此反应体系中，葡萄糖浓度可以通过测定染料吸光度而获得，干扰小，回收率达97％～103％。

ARTP诱变及高效筛选高产葡萄糖氧化酶菌株

以黑曲霉为出发菌株,采用常压室温等离子体(ARTP)注入技术对前培养后的出发菌株进行诱变,并结合改进后的邻联茴香胺高效平板显色圈进行初筛及摇瓶复筛。获得一株产葡萄糖氧化酶高产菌株,其产量由出发菌的45.6 U/m L提高到85.3 U/m L。通过对发酵关键条件碳酸钙和吐温-80添加量进行优化,结果显示酶活提高到125.6 U/m L,较原始菌株提高了175.4%。经6代传代培养,产葡萄糖氧化酶性能稳定。

斑马鱼jak2a载体构建及其对红系造血功能影响的初步研究

目的构建jak2a野生型(wilde type,wt)载体并完成其在斑马鱼体内的过表达,运用邻联茴香胺染色观察其对红系造血的影响,为后续探讨斑马鱼骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorders,MPD)模型的Jak/Stat信号通路奠定基础。方法根据jak2a基因GenBank NM_131093序列V581F突变位点上下游序列设计引物,以pGM-T-jak2a V581F质粒载体为模板进行PCR后,用DpnⅠ酶对产物进行消化去除模板,转化感受态细菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定阳性菌落,小量提取质粒,NdeⅠ限制性内切酶线性化pGM-T-jak2a-wt质粒,运用T7Transcript Aid酶对jak2a基因进行体外转录及加帽。经凝胶电泳对目的片段进行鉴定。以200ng/μL浓度jak2a-wt mRNA加帽产物显微注射斑马鱼单胞期受精卵,运用邻联茴香胺染色检测其对红系增殖的影响。结果完成pGM-T-jak2aV581F的定点突变,成功构建pGM-T-jak2a-wt载体,DNA序列分析的结果与GenBank上的序列(NM_131093)一致,酶切线性化及体外转录加帽pGM-T-jak2a-wt,凝胶电泳鉴定RNA分子大小与预期完全一致。对过表达jak2a的鱼卵进行邻联茴香胺染色,发现斑马鱼卵黄囊及ICM区红细胞明显增多。结论成功完成斑马鱼pGM-T-jak2aV581F基因定点突变并体外转录及加帽pGM-T-jak2a-wt,体内过表达jak2a对红系发生有显著影响。

以ODA为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联茴香胺 ( ODA)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶 ( HRP)及其标记物的方法。 HRP能够催化 H2 O2 氧化 ODA,其反应产物在玻碳电极上 - 0 .31 V ( vs.Ag/Ag Cl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰 ,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大 ,借助此还原电流可以测定 HRP,并可用于以 HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究 ,在最佳实验条件下测定游离 HRP的线性范围是 4.0× 1 0 - 10 ～ 6.0× 1 0 - 8g· m L- 1,检测限为3.3× 1 0 - 10 g· m L- 1;测定游离的酶标记物 ( Ig G- HRP) ,稀释范围为 1∶ 2 0 0 0～1∶ 1 0 0 0 0 0 0 ,最大稀释比为 1∶ 1 0 0 0 0 0 0。

眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶活性检测方法的优化

目的优化眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶(L-amino acid oxidase of Naja atra venom,NAV-LAO)酶活性测定方法。方法采用邻联茴香胺(ODA)、邻苯二胺(OPD)和3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)三种供氢体测定NAV-LAO的活性并比较其灵敏度和重复性。结果OPD方法测定L-氨基酸氧化酶酶活性的检测限为0.0025mg.mL-1,相对标准偏差(RSD)为2.1%。结论OPD方法测定NAV-LAO活性具有较好的灵敏度和稳定性。

柱后衍生法测定饮用水中溴酸盐

采用联茴香胺离子色谱柱后衍生法测定水中溴酸盐,样品经过简单过滤或离心处理后即可直接进样分析。该方法的溴酸盐检出限为0.0005mg/L,峰面积和保留时间重现性良好,回收率为95.0%～110.0%,相对标准偏差小于3.07%。

基于芯片三电极系统检测辣根过氧化物酶的研究

本文设计一种芯片三电极系统,以金盘电极为工作电极,金片电极为辅助电极,Ag/AgCl电极为参比电极,以邻联茴香胺(ODA)和邻苯二胺(OPD)两种常见的底物体系建立了检测辣根过氧化物酶(HRP)的方法。HRP能够催化H_(2)O_(2)氧化ODA和OPD,其氧化产物在芯片金电极上分别于-0.23 V和-0.50 V(vs.Ag/AgCl)处产生一个灵敏的还原峰,峰电流随HRP浓度增加而增大。对于ODA-H_(2)O_(2)体系,测定游离HRP的范围是5.0×10^(-7)~1.0×10^(-5)g/mL,检出限为1.0×10^(-7)g/mL(3σ)。对于OPD-H_(2)O_(2)体系,测定游离HRP的线性范围是1.0×10^(-8)~1.0×10^(-4)g/mL,检出限为1.0×10^(-9)g/mL(3σ)。

用721-分光光度计测定过氧化氢酶活性的新方法

本研究采用两步法对过氧化氢酶活力进行测定。第一步是经典滴定法中的过氧化氢酶与底物作用,第二步采用过氧化物酶与剩余过氧化氢反应,氧供体(DH2)被氧化成棕色物,以棕色深浅反推过氧化氢酶活力单位。结果表明,该方法是一种灵敏、实用的测定过氧化氢酶活性的新方法。

巯基联苯胺型螯合树脂的制备及其吸附性能

以环硫氯丙烷分别与联苯胺、邻联甲苯胺和联大茴香胺进行缩聚反应,合成出3种巯基型含硫、氮的螯合树脂,对其进行了元素分析I、R表征;对金属离子的吸附性能的研究表明:3种树脂对Ag+均有很好的吸附,对Hg2+有少量的吸附,对其它重金属离子Cu2+、Pb2+、Zn2+、Cd2+、Cr3+几乎不吸附,其中以联苯胺巯基型树脂对Ag+的吸附性能最好,吸附量最高达到9.13 mmol/g。

ODA-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

提出邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系,并用于测定HRP和HRP标记物.该方法是将HRP催化H_2O_2氧化邻联茴香胺的酶催化反应与邻联茴香胺的氧化产物的电极还原反应相偶合,在BR缓冲溶液中,在-0.56V(SCE)左右产生灵敏的极谱波.应用此极谱波测定HRP的检测限为3.7×10^(-12)g/mL,线性范围为1.O×1O^(-11)～2.0×10^(-9)g/mL.对邻联茴香胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的偶合反应机理及电极还原过程进行了较详细的探讨.